国家自然科学基金(30570243)
- 作品数：9 被引量：14H指数：3
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- 鼠胚胎成纤维细胞饲养层及与鼠尾胶联合促日本血吸虫培养细胞贴壁作用的研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察鼠胚胎成纤维细胞(MEF)与鼠尾胶及联合对日本血吸虫培养细胞的促贴壁作用。方法灌注法获取21 d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞数为1×109／L,并将细胞分别接种于预先铺敷鼠尾胶(鼠尾胶组)、MEF(MEF组)、铺敷鼠尾胶后接种MEF(联合组)和既不铺敷鼠尾胶也不接种MEF(对照组) 的4组培养瓶中培养,培养基为RPMI-1640含20％小牛血清附加常量抗生素。定时计数贴壁细胞数,计算贴壁率。结果随着培养时间从24-48 h,各组日本血吸虫细胞的贴壁率逐渐增高,48 h以后贴壁率开始下降;方差分析显示,同组内不同培养时间细胞贴壁率比较,差异有统计学意义(F=149．22、81．97、232．86、63．05,P<0．01);q检验发现,同组内不同培养时间两两比较差异有统计学意义(P<0．01)。相同培养时间,各组间培养细胞的贴壁率不都相同 (F24=44．65,P<0．01;F48=1 071．489,P<0．01;F72=4 208．35,P<0．01);q检验分析显示,除培养24 h的MEF组与鼠尾胶组细胞的贴壁率差异无统计学意义外(q=0．792,P>0．05),其余两两比较均有统计学意义(P<0．01)。结论 MEF对日本血吸虫培养细胞的贴壁具有促进作用,MEF与鼠尾胶联合对培养细胞的贴壁具有协同作用。
- 李俊琳熊飞钟沁萍明珍平董惠芬蒋明森
- 恒稳电磁场与雄虫抽提物联合作用对日本血吸虫卵黄培养细胞的影响
- 目的以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)为评价指标,探讨恒稳电磁场与雄虫抽提物联合作用对日本血吸虫卵黄培养细胞LDH活性的影响。方法灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体,无菌处理后分离雌雄虫...
- 明珍平钟沁萍黄晶晶蒋明森董惠芬
- 关键词：日本血吸虫LDH
- 文献传递
- MNNG诱导对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响
- 目的研究MNNG诱导后日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)含量的动态变化,探讨MNNG诱导后培养细胞的增殖能力。方法将日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,置于含20%小牛血清附加常量抗生素的RP...
- 明珍平钟沁萍董惠芬蒋明森
- 文献传递
- 血吸虫幼虫期的体外培养与生长发育被引量：4
- 2006年
- 寄生虫的体外培养，一直是医学和兽医寄生虫学研究诊断试剂、化疗药物、疫苗和寄生虫与宿主相互作用的一个极具价值的技术平台。血吸虫在终宿主体内阶段的体外培养，不论是曼森血吸虫还是日本血吸虫，均能培养成功，即：尾蚴转变为童虫，童虫生长、发育、合抱乃至性成熟产卵；同时，利用体外培养在可控、直观及已知的条件下进行血吸虫代谢抗原、免疫效应和免疫逃避机制的研究。虽然通过对血吸虫生理、生化、摄食、营养等方面的研究，推动了抗虫药物的筛选与机理的阐明，然而血吸虫在中间宿主螺体内幼虫期的体外培养及生长发育过程的研究仍在进行，并相对滞后，为此，有必要深入了解血吸虫在中间宿主螺体内幼虫期成长发育机制。
- 朱俊勇董惠芬
- 关键词：血吸虫幼虫细胞培养
- 亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响被引量：3
- 2006年
- 目的以日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Argyrophilicnucleolarorganizerregionassociatedproteins,AgNORs)为评价指标,探讨亚精胺(Spermidine,Spd)对培养细胞的促增殖作用。方法采用联合法将虫龄为24d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,培养于常规培养基中。接种后第3天,随机分为实验组和对照组。将实验组细胞用无血清培养基配制的终浓度为75μmol/L的Spd处理48h,对照组细胞则用不含Spd的无血清培养基处理,时间相同;PBS清洗3次后换用常规培养基继续培养。于第7、14、21、28、35天分别对培养细胞进行AgNORs染色。使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数及平均吸光值,并作统计分析。结果经Spd处理,各实验组培养细胞AgNORs着色明显深于对照组;但随着培养时间的延长,实验组与对照组细胞着色均逐渐变浅。各实验组细胞AgNORs颗粒数目与平均吸光值高于对照组,二者比较差异有统计学意义(u7=50.95、43.78;u14=55.23、43.54;u21=36.65、32.25;u28=31.6、32.95;u35=28.86、9.54;P<0.01)。各实验组AgNORs吸光值两两比较,除第7天与第14天之间差异无统计学意义外(q=0.008058,P>0.05),其余差异都有统计学意义(P<0.01)。结论Spd具有促进日本血吸虫培养细胞增殖的能力,每周用Spd处理培养细胞1次,能更大限度地促进血吸虫培养细胞的生长。
- 陈喜珪易同寅明珍平钟沁萍蒋明森董惠芬
- 关键词：亚精胺
- 亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞SDH的影响被引量：3
- 2005年
- 目的以琥珀酸脱氢酶(SDH)为指标,探讨亚精胺(Spermidine ,Spd)对日本血吸虫成虫培养细胞生长代谢的影响。方法将24 d龄的日本血吸虫成虫用冷消化法制成细胞悬液,联合法将细胞接种于小盖玻片上培养。培养至第4 d ,一部分细胞用含Spd终浓度分别为0(对照)、25、50、75、80、90、100、150、200μmol/L的无血清培养基处理24 h,另一部分细胞用终浓度为75μmol/L的Spd分别处理0(对照)、12、24、36、48、60、72 h。然后用PBS清洗3次,再换用常规培养基继续培养。至第8 d ,对处理过的培养细胞进行SDH细胞化学染色,Olympus-BH2显微镜下观察、拍照,并将结果输入HPIAS-2000图像分析仪进行图像分析。结果用Spd作用24 h,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随Spd浓度的升高逐渐增强,75μmol/L时达到最高,>75μmol/L,SDH活性逐渐减弱。当Spd作用浓度为75μmol/L时,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随着Spd作用时间的延长逐渐增强,48 h时达到最高,然后逐渐减弱。统计学分析显示,Spd处理后的实验组培养细胞,其SDH活性与对照组细胞比较差异具有显著性(P<0 .05) ;用终浓度为75μmol/L的Spd处理培养细胞48 h,培养细胞的SDH活性显著强于其余各组(P<0 .01)。结论Spd可显著增强日本血吸虫培养细胞的生长代谢活性;用终浓度为75μmol/L的Spd处理48 h,培养细胞的SDH活性最强。
- 易同寅董惠芬蒋明森明珍平钟沁萍
- 关键词：血吸虫培养细胞亚精胺
- 日本血吸虫雄虫抽提物对卵黄培养细胞超微结构的影响
- 2011年
- 目的观察日本血吸虫雄虫抽提物对卵黄培养细胞超微结构的影响。方法灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体,无菌处理后分离雌、雄虫体。取雌虫卵黄腺段虫体,冷消化法制备细胞悬液,将细胞接种于培养瓶中,随机分为对照组和实验组。对照组以常规培养基培养,实验组以常规培养基含100μg/ml雄虫抽提物培养。培养第7天,取实验组与对照组细胞制备标本并观察。结果实验组成熟卵黄细胞出现概率较对照组高,核和胞质染色均匀;卵黄滴内的卵黄球之间界限清晰,数目可数;线粒体数目较少,电子密度较低。未成熟卵黄细胞胞质中粗面内质网较丰富。对照组中卵黄细胞的核和胞质电子密度降低,脂滴数目增多,空泡化程度严重,未见线粒体;成熟卵黄细胞中卵黄滴内的卵黄球之间已发生融合,有卵黄球从中释放出来,成为裸露体;未成熟卵黄细胞中卵黄球与外面包绕的膜之间空隙增大,粗面内质网扩大和囊泡变,核糖体脱颗粒。结论日本血吸虫雄虫抽提物对雌虫卵黄细胞在体外的发育与存活具有促进作用。
- 钟沁萍李俊琳明珍平蒋明森董惠芬
- 关键词：日本血吸虫超微结构
- 日本血吸虫雄虫抽提物对卵黄培养细胞超微结构的影响
- 目的观察日本血吸虫雄虫抽提物对卵黄培养细胞超微结构的影响。方法灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体,无菌处理后分离雌雄虫体。将雄虫匀浆后反复冻融3次,离心取上清液,考马斯亮蓝法测定蛋白含量后置于﹣20℃下保存备用。取雌虫...
- 李俊琳明珍平钟沁萍蒋明森董惠芬
- 文献传递
- 肝基质和MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞Ag-NORs研究
- 目的研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞内Ag-NORs含量和分布的影响,观察培养细胞分裂增殖能力变化。方法将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞分别接种于普通小盖玻片(MNNG组)和涂有肝基质的盖玻片上(肝...
- 明珍平钟沁萍董惠芬蒋明森
- 文献传递
- 鼠胚胎成纤维细胞饲养层及其与肝基质联合对日本血吸虫童虫培养细胞LDH、ACP影响的研究被引量：3
- 2006年
- 目的以乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)为评价指标,研究鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层及其与肝基质联合对日本血吸虫童虫培养细胞代谢的影响。方法实验分MEF与肝基质联合组(后简称联合组)、MEF组、肝基质组和对照组4组。联合组与肝基质组预先铺敷肝基质,MEF组和对照组未铺敷肝基质,将虫龄21d的日本血吸虫童虫细胞分别接种于预先铺敷或未铺敷肝基质的小盖玻片上。肝基质组和对照组细胞培养于RPMI1640含20%小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中,联合组与MEF组的细胞培养于有MEF饲养层的常规培养基中。培养第7d,运用酶细胞化学方法对日本血吸虫童虫培养细胞进行LDH、ACP染色,OlympusBX51显微镜下观察并拍照,HIPAS2000图像分析仪测定其含量,并作统计分析。结果4组童虫培养细胞其LDH、ACP活性不同。LDH、ACP着色按联合组、MEF组、肝基质组、对照组依次变浅。定量分析显示,培养细胞的LDH含量,各组之间两两比较差异具显著性(P<0.01);联合组、MEF组、肝基质组培养细胞的ACP含量两两比较存在显著差异(p<0.01),联合组、MEF组与对照组之间比较差异具统计学意义(P<0.01),而肝基质组与对照组之间差异无显著性(P>0.05)。结论MEF饲养层能促进日本血吸虫童虫培养细胞的代谢,并能与肝基质协同促进培养细胞代谢。
- 熊飞李俊琳明珍平钟沁萍董惠芬蒋明森
- 关键词：肝基质酸性磷酸酶
