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hβ_2GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达: 2006年; 目的:构建h2βGPⅠ(h2βGPI)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β2GP-ⅠDI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,并在大肠杆菌M15中进行高效表达。方法:应用PCR技术扩增hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体β2GPⅠ-DI,并根据同尾酶特性构建hβ2GPⅠ第一功能区基因二串联体β2GPⅠ-DI2,将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序,测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中,构建成重组表达载体PQE30-β2GPⅠ-DI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,在大肠杆菌M15中以l mmol.L-1IPTG诱导蛋白表达,经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性。结果:表达了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白,相对分子质量约为9 000和17 000,其表达量均可达菌体总蛋白的25%,并具有hβ2GPⅠ的抗原性。结论:成功构建了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体,并诱导了蛋白的高效表达。; 李明辉谭岩姜艳芳刘力华方艳秋许淑芬段秀梅付嘉; 关键词：基因表达

人β_2糖蛋白1的重组表达及对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导内皮细胞产生ICAM-1的影响被引量：8: 2006年; 目的:探讨重组人β2糖蛋白1(hrβ2-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:应用pQE30表达载体表达hrβ2-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应用hrβ2-GP1处理前后的APS患者血清分别与内皮细胞株EA.hy926共孵育,细胞ELISA和RT-PCR方法分析处理前后EA.hy926表达ICAM-1的变化。结果:成功构建pQE30-hβ2-GP1,并对表达产物进行了纯化和鉴定,所获得的蛋白与预期的大小一致,并具有人β2-GP1的抗原性;rhβ2-GP1处理后的APS患者血清与处理前比较,与其孵育的内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1在蛋白和mRNA水平均明显降低,这种抑制作用随着rhβ2-GP1的浓度增加而逐渐增强。结论:抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1)促进内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1,hrβ2-GP1可中和此作用。; 付嘉方艳秋徐立李明辉刘桂英姜艳芳段秀梅刘力华许淑芬谭岩; 关键词：抗磷脂抗体综合征内皮细胞系

重组人β_2糖蛋白1第一结构域对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生ICAM-1、MCP-1的影响被引量：4: 2006年; 目的:探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域(hrβ2GPⅠDⅠ)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子1(ICAM1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的影响。方法:应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,细胞ELISA和RTPCR方法分析处理前后HUVEC表达ICAM1、MCP1的变化。结果:hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理后的APS患者血清较处理前相比,与其孵育的HUVEC表达ICAM1、MCP1在蛋白和mRNA水平均明显降低。结论:hβ2GPⅠDⅠ可中和APS患者血清中的大部分致病性抗β2GPⅠ抗体(anti-β2GPⅠ)。; 付嘉谭岩方艳秋徐立李明辉刘桂英姜艳芳段秀梅刘力华许淑芬; 关键词：抗磷脂抗体综合征人脐静脉内皮细胞 ICAM-1 MCP-1

β_2-GPI与细胞凋亡的关系研究: 2006年; 目的:探讨β2-糖蛋白-Ⅰ(β2-GPI)与凋亡细胞的结合是否通过磷脂酰丝氨酸(PS)。方法:采用UV照射的方法,诱导K562细胞凋亡,应用碘化丙啶、梯状电泳和β2-GPI检测细胞凋亡。采用β2-GPI与Annexin V的竞争实验来检测β2-GPI是否通过PS与凋亡细胞结合。结果:随着UV照射时间延长,K562细胞的凋亡率增加,在照射300秒时,凋亡细胞达到51.01%(47.23%±4.41%),DNA出现明显的片段化。rGFP连接的β2-GPI,与凋亡细胞结合,β2-GPI可以有效地检测细胞凋亡,而且与Annexin V竞争同一结合位点,即PS。4℃时β2-GPI与晚期凋亡细胞的结合高于37℃,而且随着时间延长,与凋亡细胞的结合均降低。结论:通过β2-GPI与Annexin V的竞争抑制实验第一次为“β2-GPI通过PS与凋亡细胞结合”这一推断提供直接的实验证据,第一次证实β2-GPI既可以与早期凋亡细胞结合,也可以与晚期凋亡细胞结合,rGFP-hβ2-GPI可以作为新的检测细胞凋亡的试剂应用。; 姜艳芳谭岩刘桂英方艳秋徐立刘力华段秀梅许淑芬; 关键词：ANNEXIN V 细胞凋亡磷脂酰丝氨酸

急性心肌梗死患者血清同型半胱氨酸水平与内皮细胞功能、纤溶活性及炎症因子的关系被引量：6: 2005年; 目的探讨急性心肌梗死(AM I)患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与纤溶活性,内皮细胞功能,炎症因子的关系及其临床意义。方法分别测定AM I患者(162例)及健康对照组(90例)血中Hcy水平以及纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)活性,血管性血友病因子(vWF),心肌肌钙蛋白I(cTnI),D-二聚体(DD),C反应蛋白(CRP)及血脂各项指标,用统计学方法分析Hcy与它们的关系。结果AM I组Hcy水平较对照组明显升高(P<0.01),AM I患者PAI-1活性增强,vWF及DD水平明显高于对照组(P<0.01),CRP及CTnI在AM I组呈阳性反应。多因素相关性分析结果显示Hcy与PAI-I、vWF、CRP、cTnI、DD均有良好相关性,但与血脂无关。结论Hcy是AM I独立危险因素。Hcy可能通过损伤血管内皮细胞,引起血管壁炎症反应,抑制纤溶系统,促进AM I的发生、发展。; 姜雅秋郭晓林佟倩; 关键词：急性心肌梗死同型半胱氨酸纤溶活性内皮细胞功能炎症因子

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吉林省科技厅科研基金(20030419)