南京医科大学科技发展基金(07NMUZ037)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李肖蓉王如兴张燕张学光党时鹏更多>>
- 相关机构：苏州大学无锡市人民医院南京医科大学更多>>
- 发文基金：南京医科大学科技发展基金江苏省卫生厅面上科研课题无锡市社会发展科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 超声介导心肌营养素1基因转移骨髓间充质干细胞及表达测定被引量：1
- 2009年
- 目的探讨超声介导白蛋白微泡破裂促进心肌营养素1(CT-1)基因转移骨髓间充质干细胞(MSC)表达的测定。方法从分离培养的新生大鼠心肌细胞中克隆CT-1基因,构建其表达载体,与白蛋白微泡混合后,在超声作用下介导CT-1基因转染大鼠MSC,荧光显微镜及流式细胞术检测报告基因EGFP的表达,Western blot检测MSC中CT-1表达。结果可获大鼠CT-1编码基因,并成功构建表达载体pIRES2-CT-1。体外实验结果示,以脉冲0.75 W/cm2作用30 s转染2次,可以有效地将CT-1基因转染MSC,经转染的MSC可以表达分泌CT-1及报告基因EGFP。结论超声介导白蛋白微泡破裂可以有效促进CT-1基因转染MSC,该技术可能为临床应用基因联合干细胞移植治疗急性心肌梗死提供新的方法。
- 王如兴李肖蓉吕海军吴小庆张燕张滨杨丽华张学光
- 关键词：心肌营养素1骨髓间充质干细胞超声
- 超声介导不同种类微泡破裂对基因转移的影响
- 2009年
- 基因治疗目前在治疗基因缺陷疾病、肿瘤、炎症以及其他临床疾病方面显示出巨大潜力，但作为一种有效的方法，其成功与否很大程度上取决于它所使用的载体是否能以最小的毒性、有效地、选择性地将靶基因转移到靶细胞或靶组织。虽然病毒载体具有转染率高、能稳定持久地表达所携带的外源目的基因等优点，但病毒的免疫原性和潜在致突变性限制了其安全使用。
- 党时鹏王如兴李肖蓉
- 关键词：基因转移超声介导微泡病毒载体基因治疗
- 血红素加氧酶1分子克隆及表达载体的构建
- 2009年
- 背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血-再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点。目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建血红素加氧酶1的真核表达载体。设计、时间及地点:实验于2008-03/06在苏州大学生物技术研究所完成。材料:成年雄性SD大鼠,由苏州大学动物实验中心提供,用于脾脏细胞总RNA的提取;克隆载体PMD18-T购自Takara公司;表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学生物技术研究所保存。方法:分离大鼠脾脏获取脾脏细胞,Trizol法提取脾脏细胞的总RNA,经反转录-聚合酶链反应扩增获得血红素加氧酶1基因,将扩增出来的产物与克隆载体PMD18-T连接,转化TOP10感受态细菌,挑取阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序确证。测序正确后抽提质粒作为模板进行PCR,Sal-Ⅰ和BamH-Ⅰ同时双酶切PCR产物和载体PIRES2-EGFP,再在T4DNA连接酶的作用下进行连接,构建其真核表达载体。主要观察指标:血红素加氧酶1基因的克隆和DNA测序结果证实序列是否正确;PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1真核表达载体的构建以及测序证实目的基因成功插入载体。结果:①实验完成了大鼠血红素加氧酶1基因的克隆,所获得的序列与GeneBank中收录的大鼠血红素加氧酶1序列完全一致。②构建真核表达载体PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1,测序正确说明血红素加氧酶1基因成功插入表达载体PIRES2-EGFP中。结论:实验成功克隆了大鼠血红素加氧酶1基因全长,并构建了其真核表达载体。
- 张燕王如兴李肖蓉陈永井杨丽华党时鹏王明元张学光
- 关键词：血红素加氧酶1克隆
- 聚乙烯亚胺修饰的白蛋白微泡转染CHO细胞实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的:制作非病毒基因转移载体,提高白蛋白微泡转基因效率。方法:采用人体白蛋白、聚乙烯亚胺(PEI)和葡萄糖按一定的质量比混合后用超声振动仪声振20s制得PEI修饰的白蛋白微泡(PAMB),通过流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞比率以比较PEI、PEI+白蛋白、PAMB和Lipofectamine2000的基因转移效率。结果:单纯PEI组、白蛋白+PEI组、PAMB组和Lipofectamine2000组的平均转基因效率分别为(13.75±4.88)%、(5.20±1.15)%、(49.17±6.75)%和(53.72±5.69)%。PAMB组明显高于单纯PEI组,而与商品化Lipofectamine2000组没有统计学差异。结论:经PEI修饰后的白蛋白微泡转基因效率明显提高,是一种有效的体外基因转移载体,本研究也可能为在体基因转移提供新的方法。
- 党时鹏王如兴张学光张燕王明元郭冬萍李肖蓉
- 关键词：PEI基因转移
