河北省科技支撑计划项目(10220301D)
- 作品数：2 被引量：14H指数：2
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- 相关机构：河北省动物疫病预防控制中心河北农业大学石家庄市动物园更多>>
- 发文基金：河北省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛型布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因的克隆与原核表达被引量：3
- 2011年
- 根据GenBank中登录的牛型布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因序列,设计了1对引物,采用PCR技术,牛流产病例分泌物为模板,扩增bp26的编码基因,得到1条753bp的片段。将其连入Simple-T载体中进行酶切和测序鉴定。测序正确后,将该基因插入到pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,将此重组质粒转化到Rosetta(DE3)感受态细胞中,并用IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot检测。结果显示bp26基因可以在大肠杆菌中获得表达,表达产物分子质量约为29ku,与预计的蛋白分子质量一致。Western-blot试验证明,该蛋白可以与患牛布氏杆菌的阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性。
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- 关键词：克隆原核表达
- 牛布鲁氏菌BP26间接ELISA检测方法的建立被引量：11
- 2014年
- 为建立检测牛布鲁氏菌(Brucella)血清抗体的间接ELISA方法,本研究将原核表达并纯化的Brucella外膜蛋白BP26作为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,经过对各种反应条件进行优化,建立了牛Brucella间接ELISA抗体检测方法。该方法对其他相关的牛病病原无交叉反应,其组内和组间的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。对100份临床血清样品进行检测,同时将建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的同类试剂盒进行比较,符合率为93%。本研究为布鲁氏菌病提供了一种简便的血清学诊断方法。
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- 关键词：间接ELISA
