国家自然科学基金(31070776)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 相关作者：张泽英刘东旭张辉赵昕黄爱妮更多>>
- 相关机构：湖北大学武昌工学院武汉生物工程学院更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- shRNA沉默C5aR对LPS诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的影响被引量：3
- 2017年
- 为观察短发夹状RNA(Short hairpin RNA,shRNA)阻断大鼠C5a受体(C5a receptor,C5aR)基因表达对抑制脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)损伤的影响,将构建好的针对大鼠C5aR基因的shRNA表达质粒转染NRK-52E细胞系,经G418筛选后,形成稳定的表达C5aR shRNA的细胞系。设置空白对照组(NC组)、正常对照组(LPS组)、阴性对照组(LPS+shRNAc组)和处理组(LPS+C5aR-shRNA组)。采用荧光定量反转录PCR(RT-PCR)检测细胞中白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)mRNA的表达,酶联免疫吸附方法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中TNF-α、IL-6和髓过氧化物酶(MPO)活性,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果显示,与正常对照组和阴性对照组相比,试验组中C5aR shRNA能有效抑制炎症因子TNF-α、IL-6的释放,降低细胞凋亡率和细胞中MPO活性(P<0.05)。可见,C5aR shRNA能显著抑制由LPS诱导的TNF-α、IL-6等炎症因子的释放,改善大鼠肾脏功能,对LPS诱导的肾脓毒症损伤有明显保护作用。
- 张泽英张辉赵昕黄爱妮蒋思婧
- 关键词：C5A受体基因沉默
- C5a受体颉颃剂及其在动物疾病模型治疗中的研究进展被引量：1
- 2014年
- C5a受体是人和动物体内补体系统的重要组成部分,与C5a结合后介导了众多生物学效应,参与了许多疾病的发生、发展,并在多种病变中起重要作用,如器官缺血再灌注损伤、急性肺损伤、脓毒血症、类风湿性关节炎、肾小球肾炎等疾病。如何抑制C5a受体的生物活性,从而减轻炎症反应一直是免疫学研究的热点问题。文章着重介绍了C5a受体颉颃剂及其在动物疾病模型治疗中的研究进展。
- 张泽英刘东旭
- 关键词：C5AC5A受体补体
- C5a受体与肾脏疾病关系的研究进展被引量：1
- 2015年
- 补体活化产物C5a是炎症反应趋化因子,具有过敏毒素样作用和强趋化作用,在炎症反应过程中起着重要的作用。C5a的作用主要通过与C5a受体的结合来实现。研究表明在多种肾脏疾病中均可引肾脏细胞中C5a受体的表达增加,从不同层面阻断C5a与C5a受体的相互作用可降低肾脏损伤。随着C5a受体功能、信号传递途径及与肾脏疾病关系的不断深入研究,C5a受体有望成为一个有效的治疗靶点,在炎症性疾病治疗过程中发挥作用。论文综述了C5a受体的结构、信号传导途径及与肾脏炎症性疾病的关系,有助于为肾脏炎症性疾病的治疗提供参考。
- 张泽英刘东旭
- 关键词：C5AC5A受体信号传导肾脏疾病
- 靶向大鼠C5aR基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2018年
- 构建靶向大鼠C5aR基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,验证C5aR蛋白的功能,为后续进一步研究C5aR在免疫治疗中的作用奠定基础。具体方法是根据基因库提供的大鼠C5aR mRNA核苷酸序列(序列号:NM_053619),设计并合成短发夹结构的互补DNA序列,克隆到经BamHI和EcoR I双酶切的线性化质粒pLVX-shRNA,构建重组质粒,并予以DNA测序鉴定。重组干扰质粒构建成功后,通过脂质体2000转染大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,LPS处理后收集细胞,采用荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测干扰质粒对C5aR基因的表达抑制效应。通过尾静脉高压注射技术将重组干扰质粒导入Wistar大鼠肾脏,采用腹腔注射LPS方法复制脓毒血症急性肾损伤模型,大鼠随机分为正常对照组、LPS处理组、LPS+C5aR shRNA转染组,采用ELISA方法检测血清中Cr、BUN以及TNF-α、IL-6等炎性因子的含量。结果显示构建的shRNA序列经DNA测序证实与设计序列完全一致,重组质粒构建成功。转染C5aR shRNA后,NRK-52E细胞中C5aR mRNA和C5aR蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。该重组干扰质粒能有效抑制C5aR基因的表达,能显著抑制由LPS诱导的TNF-α、IL-6等炎性因子的释放,改善大鼠肾脏功能,对LPS诱导的肾脓毒血症损伤具有明显保护作用。
- 张泽英高小龙刘东旭
- 关键词：C5A受体RNA干扰短发夹RNA
