浙江省重点科技计划(2008C12074)
- 作品数：4 被引量：31H指数：3
- 相关作者：徐俊锋缪青梅汪小福陈笑芸周育更多>>
- 相关机构：浙江省农业科学院沈阳师范大学更多>>
- 发文基金：浙江省重点科技计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 转Cry1Ab基因水稻分子特征及其特异性PCR检测方法被引量：8
- 2012年
- 转Cry1Ab基因水稻Bt01为一种新型的转基因水稻,文章首先利用Southern blotting验证了外源基因Cry1Ab转入了Bt01中,且为单拷贝,再利用TAIL-PCR方法获得了其插入位点信息,根据获得的Bt01的5′端插入位点序列,设计了相应的定性与定量PCR检测体系的引物及探针,实验结果显示,定性PCR检测体系的最低检测极限(LOD)为10个拷贝,定量PCR检测体系的LOD为5拷贝,最低定量极限(LOQ)为10拷贝。同时为了验证建立的定量PCR体系的准确性,利用该体系检测已知转基因水稻Bt01含量分别为3%和0.5%的样品,定量结果分别为2.7%和0.47%。研究结果表明,该转化体特异性定性与定量检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因水稻Bt01的身份识别和检测提供了有效的方法。
- 汪小福陈笑芸张小明周育张焕春缪青梅方敬徐俊锋
- 关键词：分子特征转基因CRY1AB特异性检测
- 不同TAIL-PCR通用引物在转基因大豆、水稻、油菜侧翼序列分离中的应用评价被引量：5
- 2013年
- 为研究不同转基因作物T-DNA插入位点侧翼序列分离中所用的通用简并引物对TAIL-PCR的影响,本研究使用5个通用简并引物分别对8个转基因大豆、30个转基因水稻和2个转基因油菜株系进行了TAIL-PCR分析,结果表明,5个简并引物在TAIL-PCR中的扩增效果存在显著差异,同一简并引物在不同转基因物种的扩增效果显著不同。AD1引物在转基因水稻和转基因油菜中扩增效果较好,AD2引物在转基因水稻、油菜和转基因大豆中扩增效果均较好,AD3引物在转基因水稻中扩增出1个株系,在转基因油菜中扩增出1个株系,但AD3引物与pFGC5941 T-DNA RB上游有匹配,不适用于以pFGC5941为载体的转基因材料分析。AD4和AD5 2个引物在3个转基因物种的扩增均较差。对AD1和AD2两个引物的TAIL-PCR扩增产物进行测序,结果表明,扩增产物均对应转基因材料的侧翼序列。研究表明,不同通用引物在不同转基因事件中侧翼序列的分离效果差异较大,通用引物AD1和AD2TAIL-PCR成功率最高。不同通用引物的应用效果不仅与不同物种有关,也与外源基因的插入位点有关,而且还与载体序列匹配程度相关。为提高TAIL-PCR中T-DNA插入位点侧翼序列分离成功率,建议同时采用多个通用引物平行扩增。
- 陈笑芸汪小福刘仁虎张小明周育缪青梅徐俊锋
- 关键词：TAIL-PCR转基因大豆转基因水稻转基因油菜侧翼序列
- 转基因大豆深加工食品DNA鉴定技术研究被引量：17
- 2013年
- 转基因食品的标识制度是法律赋予消费者的知情权和选择权。对转基因食品的鉴定和检测技术是保证国家《转基因食品卫生管理办法》有效执行的重要保障。依据转基因技术的原理,DNA检测技术是鉴定转基因食品的简单、高效手段。然而,这一技术严重依赖于从转基因深加工产品中提取的DNA质量。本文选取豆腐、油豆腐、豆浆、酱油、豆瓣酱、蛋白粉、异黄酮等多种转基因大豆深加工食品,比较不同DNA提取技术对检测结果的影响,结果发现对深加工食品进行适当前处理后,利用改良CTAB法提取DNA,能显著提高大豆深加工食品中DNA的提取效率和质量。本研究中建立了4种大豆制品中转基因成分的定性PCR检测方法体系,可用于不同的转基因大豆深加工食品检测;讨论了目前转基因检测技术存在的问题以及转基因产品标识的必要性。
- 陈笑芸汪小福周育缪青梅徐俊锋
- 关键词：转基因大豆深加工食品DNA鉴定PCR检测
- 热加工过程对转基因水稻检测的影响被引量：1
- 2013年
- 热加工会导致食品中DNA的降解和破坏,为研究热加工过程对转基因水稻检测的影响,试验采用水煮、高温灭活、高温烘干和微波4种外源模拟热加工的方法处理目前我国3种转基因水稻(KF6,KMD1和TT51-1)。并按照国家标准对相应的参数进行检测,内源基因SPS,CaMV35S启动子,NOS终止子和抗虫基因Bt,4种参数的PCR扩增结果显示,热加工过程无论对内源基因和外源插入基因的检测都有影响,表明现行的标准对转基因水稻加工品的检测存在局限,同时我们重新设计了针对抗虫基因Bt的引物用于检测热加工处理的样品,扩增结果优于标准引物。
- 黄赛楠汪小福徐俊锋陈笑芸缪青梅李玥莹
- 关键词：转基因检测热加工转基因水稻
