山西省科技攻关计划项目(20090311059-3)
- 作品数：4 被引量：9H指数：1
- 相关作者：杨志明边云飞肖传实张娜娜杨慧宇更多>>
- 相关机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- LOX-1特异性小发夹RNA表达载体的构建及其对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)基因的发卡样siRNA(shRNA)表达载体的构建及其对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响。方法:(1)采用DNA重组技术,将LOX-1shRNA双链与线性化pGenesil-1质粒表达载体连接,构建LOX-1特异性小发夹RNA表达载体pLOX-1-shRNA1及pLOX-1-shRNA2,用脂质体法转染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7),半定量逆转录聚合酶链反应法检测LOX-1mRNA的表达,Western blot法检测LOX-1蛋白的表达,选择沉默效果最佳的作为下一步的干预序列。(2)ox-LDL诱导巨噬细胞建立泡沫细胞模型,pLOX-1-shRNA进行干预,干预组使用脂质体法进行细胞转染,转染24小时后,再加入ox-LDL作用24小时,用油红O染色法及细胞内游离胆固醇及总胆固醇测定法观察对泡沫细胞形成的影响,倒置荧光显微镜观察RAW264.7细胞对Dil-ox-LDL的摄取率。结果:测序鉴定发现插入的发卡样序列正确,成功合成了发卡样LOX-1基因RNA干扰表达载体,pLOX-1-shRNA1及pLOX-1-shRNA2转染RAW264.7细胞后,其LOX-1基因和蛋白表达显著下调,并且以pLOX-1-shRNA2沉默效果最佳。结论:成功构建了能有效抑制LOX-1基因及蛋白表达的干扰表达载体,同时可抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成及对Dil-ox-LDL的摄取,为进一步利用RNA干扰技术防治动脉粥样硬化提供理论基础。
- 杨慧宇边云飞杨志明张娜娜肖传实
- 关键词：RNA干扰巨噬细胞源性泡沫细胞
- 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1特异性小发夹RNA表达载体的构建及其对巨噬细胞源性泡沫细胞氧化应激的影响
- 2009年
- 杨慧宇边云飞杨志明张娜娜高奋肖传实
- 关键词：巨噬细胞源性泡沫细胞氧化应激
- LOX-1特异性小发夹RNA表达载体的构建及其效应被引量：1
- 2010年
- 氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）在动脉粥样硬化形成和发展过程中起着关键的作用，而血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1（LOX-1）是OX—LDL在血管内皮细胞上的主要受体，它在介导ox—LDL对血管内皮细胞的损伤、参与动脉粥样硬化的形成和发展过程中发挥了重要作用。
- 边云飞李茂莲杨慧宇杨志明高奋张娜娜肖传实
- 关键词：小发夹RNALOX-1动脉粥样硬化形成血管内皮细胞LDL
- 氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞Fractalkine表达的影响及机制分析被引量：7
- 2009年
- 目的观察氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞Fractalkine表达的影响并探讨其可能作用机制。方法采用胰蛋白酶消化法原代培养人脐静脉内皮细胞,取2～5代用于实验,随机分为:①对照组用RPMI1640培养基;②氧化型低密度脂蛋白不同浓度(5、25、50和75mg/L)组;③氧化型低密度脂蛋白作用不同时间(6、12、24、48和72h)组;④氧化型低密度脂蛋白+p38MAPK特异性阻断剂SB203580组;⑤p38MAPK特异性阻断剂SB203580组。用RT-PCR及ELISA法检测Fractalkine mRNA及蛋白表达水平,用Westernblot法检测p38MAPK磷酸化表达水平。结果①氧化型低密度脂蛋白在一定浓度范围及作用时间呈时间-剂量依赖方式诱导Fractalkine mRNA及蛋白表达增加,最佳作用时间为48h,最佳作用浓度为50mg/L;②与对照组比较,氧化型低密度脂蛋白诱导组人脐静脉内皮细胞p38MAPK磷酸化表达水平显著增加(P<0.05);使用SB203580干预后p38MAPK磷酸化水平明显下降,与氧化型低密度脂蛋白诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。③预先用p38MAPK特异性阻断剂SB203580(20μmol/L)与内皮细胞共同孵育60min后,再加入氧化型低密度脂蛋白作用48h后,Fractalkine表达水平明显降低,与氧化型低密度脂蛋白组比较有统计学差异(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞Fractalkine表达增加,其作用机制可能是通过p38MAPK信号转导通路。
- 边云飞杨慧宇杨志明张娜娜高奋肖传实
- 关键词：氧化型低密度脂蛋白FRACTALKINEP38丝裂原活化蛋白激酶人脐静脉内皮细胞
