国家自然科学基金(81000460)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：海南医学院附属医院海南医学院北京大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 活化Notch1信号促进骨肉瘤细胞体外侵袭作用及机制被引量：2
- 2012年
- 目的:初步探讨活化Notch1信号影响骨肉瘤细胞侵袭行为的分子机制。分析Notch1信号活化后,RANKL-OPG-RANK信号轴的变化情况。方法:体外培养骨肉瘤细胞系Saos-2,转染Notch1信号的胞内段ICN1后,检测骨肉瘤细胞的侵袭能力,利用实时定量PCR检测RANKL、RANK和OPG的mRNA表达水平。结果:实验组(Saos-2-ICN)ICN1的蛋白表达水平高于对照组(Saos-2-G418)。Saos-2-G418侵袭细胞数为(41.4±6.4)个,Saos-2-ICN侵袭细胞数为(93.7±12.8)个。Saos-2-G418组RANKL、OPG和RANK分子mRNA相对表达水平分别为(0.6±0.07),(1.2±0.14)和(0.3±0.04);Saos-2-ICN组RANKL、OPG和RANK分子mRNA相对表达水平分别为(1.8±0.3),(0.58±0.09)和(2.0±0.4),两者间具有统计学差异(P<0.05)。结论:活化Notch1信号,提高细胞侵袭力,升高RANKL和RANK基因mRNA表达水平,降低OPG基因mRNA表达水平。本实验结果提示RANKL-OPG-RANK信号轴可能参与Notch1信号调控骨肉瘤细胞的侵袭和转移。
- 段莉郑根建
- 关键词：骨肉瘤RANKLRANKOPG
- Notch信号对骨免疫的调控及其在牙周炎发生中的可能作用被引量：2
- 2012年
- 破骨细胞是进行性骨吸收的主要功能细胞,其与T细胞、B细胞间的相互影响在生理性骨改建中发挥重要作用。免疫细胞活性异常和破骨细胞过度活跃是引发病理性骨改建(如发生在牙周炎中的牙槽骨吸收)的病理基础。Notch信号是一类种系发生高度保守的跨膜蛋白,不仅参与调控T细胞和B细胞的分化和功能,而且对骨改建中的主要功能细胞-破骨细胞的分化有重要的调控作用。因此,深入探讨Notch信号在骨免疫中的作用机制,可为牙周炎的临床治疗提供新的思路和依据。本文就Notch信号对骨免疫的调控机制及其在牙周炎发生中的可能作用作一综述。
- 段莉林典岳郑根建
- 关键词：NOTCH信号破骨细胞牙周炎
- 抑制miR-140腺相关病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的构建一种抑制microRNA-140(miR-140)表达的腺相关病毒(AAV)载体系统,从而实现对细胞内miR-140表达水平的高效抑制。方法应用分子生物学方法将腺相关病毒载体与miRNA诱饵microRNA tough decoy RNAs(Tu D)相结合,构建p AAV-U6-miR-140-Tu D-EGFP表达质粒;用脂质体转染法将p AAVU6-miR-140-Tu D-EGFP表达质粒和p AAV-RC、p AAV-Helper质粒共转染至AAV-293细胞中,包装生成携带miR-140-Tu D的重组腺相关病毒r AAV-U6-miR-140-Tu D-EGFP。进一步将病毒感染骨肉瘤细胞U2OS,定量RT-PCR检测miR-140-Tu D对细胞内miR-140基因的沉默效果,并测定病毒的感染滴度。结果DNA测序证明miR-140-Tu D已成功构建到表达质粒p AAV-U6-MCS-EGFP中;AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白提示共转染成功;r AAV-U6-miR-140-Tu D-EGFP感染滴度约为4.1×1010·m L-1;包装的重组腺相关病毒r AAV-U6-miR-140-Tu D-EGFP感染U2OS细胞后,能显著下调U2OS细胞miR-140基因的表达水平。结论携带miR-140-Tu D重组腺相关病毒的包装成功,该病毒具有稳定沉默miR-140基因从而降低其表达水平的功能。
- 贺鹏段莉梁宇杰
- 关键词：腺相关病毒TOUGHDECOY骨肉瘤细胞
- 高浓度葡萄糖对Notch2信号通路及破骨细胞分化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨高浓度葡萄糖对RANKL诱导破骨细胞分化及Notch信号通路的影响。方法高糖（5-40mmol／L）条件下，RANKL刺激小鼠骨髓源性破骨前体细胞向破骨细胞分化，TRAP染色检测破骨细胞分化情况，实时定量PCR检测Notch信号通路相关基因（Notchl、Notch2、Jaggedl）的表达情况。结果RANKL诱导破骨细胞分化过程中，实验组（20mmol／L和40mmol／L葡萄糖）破骨细胞个数分别为（110．3±6．81）和（72．0±8．0）；Notchl相对表达量分别为（1．25±0．43）和（1．14±0．45），Notch2相对表达量分别为（1．65±0．23）和（1．1±0．11），Jaggedl相对表达量分别为（1．16±0．38）和（1．09±0．23）；对照组（20mmoUL和40mmol／L甘露醇）破骨细胞个数分别为（152．7±7．0）和（157±12．5），Notchl相对表达量分别为（1．84±0．38）和（1．66±0．40），Notch2相对表达量分别为（2．82±0．28）和（2．42±0．27），Jaggedl相对表达量分别为（1．52±0．26）和（1．45±0．34）。其中，破骨细胞数量和Notch2基因表达量在实验组与对照组问差异具有显著统计学意义（P〈O．05）。结论高浓度葡萄糖抑制Notch信号及破骨细胞分化，该结果提示Notch2信号可能参与高糖抑制破骨细胞分化过程。
- 段莉林典岳
- 关键词：高糖破骨细胞分化NOTCH1NOTCH2JAGGED1
- 两种不同细胞培养方法对破骨细胞分化及Notch2基因表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨两种不同培养方法对体外破骨细胞分化的影响,分析破骨细胞分化过程中的关键信号Notch2分子的mRNA和蛋白表达水平的差异,为进一步破骨细胞功能实验奠定基础。方法:单独培养:从4周龄的小鼠腿骨骨髓腔分离骨髓细胞,巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和破骨细胞生成因子(RANKL)诱导大鼠骨髓细胞形成破骨细胞;共培养:从4周龄的小鼠大腿骨骨髓腔分离骨髓细胞,与原代成骨细胞共培养,VitD3和前列腺素E2(PGE2)诱导。对获得的破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和细胞计数,并测定破骨细胞分化过程中的关键信号Notch2分子的mRNA和蛋白表达水平。结果:两种培养方法获得的破骨细胞均为TRAP染色阳性的多核巨细胞;共培养方法得到的破骨细胞数目为(240±36)个/孔,而单独培养法为(160±23)个/孔。共培养组Notch2分子mRNA表达水平为4.1±1.2,单独培养组为2.4±0.6,共培养组高于单独培养组(P<0.05),共培养组Notch2蛋白表达水平亦高于单独培养组。结论:与通过RANKL和M-CSF诱导破骨细胞分化的培养方法相比,利用成骨细胞和破骨前体共培养可诱导出更多的破骨细胞和高水平的Notch2表达。培养方法影响破骨细胞的数量和Notch2基因的表达水平。
- 段莉郑根建
- 关键词：细胞培养破骨细胞分化NOTCH2
