国家自然科学基金(81160318) 作品数:13 被引量:52 H指数:5 相关作者: 张洁清 李力 宋红林 周云霞 梁少凤 更多>> 相关机构: 广西医科大学附属肿瘤医院 广西医科大学 贵港市人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广西壮族自治区自然科学基金 广西医疗卫生重点科研课题 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
雌二醇诱导子宫内膜癌细胞产生的VEGF、bFGF对PI3K/AKT通路的影响 被引量:5 2015年 目的:探讨雌二醇(E2)诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞生成的血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路的主要基因蛋白的影响。方法:(1)以不同浓度E2作用于Ishikawa细胞30min后,采用蛋白印迹法检测p-AKT蛋白水平。(2)实验设3组:1对照组;2E2组;3抑制剂+E2组(包括BIBF1120+E2组、Ponatinib+E2组和LY294002+E2组),用荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测子宫内膜癌细胞内VEGF、bFGF、PI3K、AKT基因及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期的变化,Transwell检测细胞迁移能力。结果:(1)不同浓度(分别为0.01,0.1,1,10,100μmol/L)的E2作用30min后Ishikawa细胞中p-AKT蛋白的表达水平均高于对照组(P<0.05),且E2浓度为1μmol/L时其表达水平最高;(2)E2组中VEGF、bFGF、PI3K、AKT mRNA及VEGF、bFGF、p-PI3K、p-AKT蛋白活化水平均高于对照组(均P<0.05)。BIBF1120+E2组、Ponatinib+E2组、LY294002+E2组细胞中PI3K、AKT基因及p-PI3K、pAKT蛋白的表达均低于E2组(均P<0.05);(3)E2组与对照组相比,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加(均P<0.05),迁移穿过微孔的细胞增加(均P<0.05)。LY294002+E2组、BIBF1120+E2组、Ponatinib+E2组分别与E2组相比,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少(均P<0.05),迁移穿过微孔的细胞减少(均P<0.05)。结论:E2通过非基因转录效应产生VEGF、bFGF可以激活PI3K/AKT通路,促进子宫内膜癌的发生和转移。 蒋斯 陈海燕 张洁清 宋红林 李力关键词:子宫内膜癌 PI3K/AKT通路 VEGF BFGF 沉默PI3K基因对E_(2)刺激后子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:1 2021年 目的:探讨沉默PI3K基因对雌激素刺激下的子宫内膜癌细胞增殖、迁移、凋亡的影响。方法:培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,构建LV-PI3K-RNAi慢病毒载体转染Ishikawa细胞。实验分组Control组未经任何处理的Ishikawa细胞;Ishikawa组经E_(2)刺激的Ishikawa细胞;NC组经E_(2)刺激并转染阴性对照慢病毒的Ishikawa细胞;PI3Ki组经E_(2)刺激并转染LV-PI3K-RNAi慢病毒的Ishikawa细胞。Real-time PCR、Western blot法检测各组VEGF、bFGF、PI3K mRNA及蛋白表达水平,MTT法、流式细胞仪分别检测细胞增殖能力及凋亡的情况。结果:与Ishikawa组、NC组比较,PI3Ki组的VEGF、bFGF、PI3K mRNA及蛋白表达水平明显降低,细胞增殖能力显著降低,凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PI3K基因低表达可干扰E_(2)在基因、蛋白水平激活Ishikawa细胞产生VEGF、bFGF,从而下调E_(2)对子宫内膜癌细胞增殖和抑制凋亡的影响。 陈坤 张洁清 李力关键词:雌二醇 BFGF PI3K/AKT 雌二醇诱导子宫内膜癌细胞产生的VEGF和bFGF对MAPK通路的影响 被引量:14 2014年 目的 探讨雌二醇诱导子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞生成的血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路中主要基因蛋白的影响.方法 实验分为4组:雌二醇组(E2组,加入1 μmol/L的雌二醇作用30 min),抑制剂组[包括Bibf1120组:加入10 μmol/L的VEGF受体抑制剂——Bibf1120; Ponatinib组:加入2.5 μmol/L的bFGF受体抑制剂——Ponatinib; U0126组:加入10μmol/L的MAPK激酶(MEK)特异性抑制剂——U0126.各组均预处理1 h],抑制剂+E2组(包括Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组和U0126+E2组,各抑制剂预处理1h后,加入1μmol/L的雌二醇作用30 min);对照组(仅加入无血清DMEM培养基).(1)以不同浓度(分别为0.01、0.1、1、10、100μmol/L)雌二醇作用于Ishikawa细胞后,采用蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白活化水平.(2)采用荧光定量PCR技术检测各组细胞中VEGF、bFGF、MEK1/2、ERK1/2mRNA的表达,蛋白印迹法检测各组细胞中VEGF、bFGF蛋白的表达及磷酸化NEK1/2(p-MEK1/2)、p-ERK1/2蛋白活化水平,流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期比例,体外穿膜实验检测各组细胞的迁移能力.结果 (1)不同浓度(分别为0.01、0.1、1、10、100 μmo1/L)的雌二醇作用30 min后Ishikawa细胞中p-ERK1/2蛋白的活化水平分别为0.16±0.03、0.10±0.03、0.41±0.04、0.19±.0.03、0.19±0.03,均明显高于对照组的0.05±0.00 (P<0.05),且雌二醇浓度为1μmol/L时其活化水平最高.(2)E2组细胞中VEGF、bFGF mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);Bibf1120+E2组细胞中VEGF mRNA及蛋白的表达水平分别与E2组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).E2组MEK1/2、ERK1/2mRNA及p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平均显著高于对照组(P<0.05);Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2� 卢燕琼 蒋斯 张洁清 宋红林 李力关键词:子宫内膜肿瘤 血管内皮生长因子A 成纤维细胞生长因子2 丝裂原激活蛋白激酶类 血清脂联素水平与Ⅰ型子宫内膜癌的相关性研究 被引量:3 2018年 目的探讨血清脂联素水平与Ⅰ型子宫内膜癌的关系。方法回顾性分析我院收治的34例新发Ⅰ型子宫内膜癌患者和24例正常子宫内膜患者的临床资料,检测空腹血清葡萄糖、空腹血胰岛素、血清脂联素水平,采用logistic回归分析血清脂联素水平与子宫内膜癌发生的关系。结果Ⅰ型子宫内膜癌患者血清脂联素水平与肿瘤FIGO分期、组织学分化程度、肌层浸润深度、宫颈受累、淋巴结转移情况无关(P>0.05)。单因素logistic回归分析结果显示,以脂联素高水平组为对照,脂联素低水平组罹患子宫内膜癌的风险高于高水平组(OR=8.125,95%CI:1.874~35.233,P=0.005);中水平组罹患子宫内膜癌的风险高于高水平组(OR=4.024,95%CI:1.060~15.278,P=0.041)。调整空腹胰岛素水平或HOMA-IR指数等可能混杂因素后,这种关系依然存在。结论血清脂联素水平越低,罹患子宫内膜癌的风险越高,低血清脂联素水平可能促进子宫内膜癌发生发展。 邓露 梁慧瑾 蔡志福 张洁清 李力关键词:子宫肿瘤 血清脂联素 LOGISTIC回归 雌二醇对子宫内膜癌Ishikawa细胞MAPK通路的激活及增殖的影响 被引量:3 2016年 目的探讨雌激素是否能激活MAPK信号转导通路,以及对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响。方法培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,按药物干预分为3组:雌二醇(E_2)组、U0126(MAPK激酶抑制剂)+E_2组、对照组。采用荧光定量PCR技术检测各组MEK1/2、ERK1/2 m RNA表达的变化;Western blot法检测各组p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白的活化程度;流式细胞仪检测各组的细胞周期比例;细胞集落形成实验检测各组细胞的增殖能力;体外穿膜实验比较各组细胞的迁移能力。结果 E_2组MEK1/2、ERK1/2 m RNA表达增加(P=0.025,P=0.002),U0126+E_2组中,U0126能阻断E_2诱导MEK1/2、ERK1/2m RNA的表达上调(P=0.000,P=0.000)。E_2组p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平升高(P=0.049,P=0.028);U0126+E_2组中,U0126能阻断E_2诱导的p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化(P=0.018,P=0.003)。E_2组G1期细胞比例显著低于对照组及U0126+E_2组(P=0.017),集落形成率显著高于对照组及U0126+E_2组(P=0.009),穿过微孔的细胞数显著多于对照组及U0126+E_2组(P=0.000)。结论雌二醇通过激活MAPK通路,促进子宫内膜癌的发展,MEK抑制剂能阻断并抑制这一作用。 容雁 卢燕琼 张洁清 宋红林 李力关键词:子宫内膜癌 雌二醇 MAPK通路 雌激素通过激活AKT通路产生的细胞因子增强子宫内膜癌细胞增殖能力 被引量:10 2013年 背景与目的:目前认为子宫内膜癌的发生可能与无拮抗的雌激素长期作用有关,但雌激素如何调节细胞增殖的作用机制尚不清楚。AKT信号转导通路是细胞生存和增殖的一个重要调节信号。本研究探讨在子宫内膜癌细胞HEC-1A中,雌二醇能否通过激活AKT通路产生细胞因子,以及其对细胞增殖能力的影响。方法:蛋白质印迹法(Western blot)技术检测雌二醇作用HEC-1A细胞后AKT活化情况,以及AKT抑制剂、ER抑制剂对AKT活化的影响。荧光定量PCR及ELISA技术检测雌二醇(E2组)作用于HEC-1A细胞30 min后;或雌激素受体抑制剂(ER组)、AKT抑制剂(AKT组)分别预处理细胞1 h后再加入雌二醇作用30 min后,细胞内血管内皮生长因子受体(VEGF)、bFGF、IL-8基因mRNA表达及细胞培养上清液中蛋白表达。细胞集落形成实验、流式细胞仪检测细胞周期的变化,CFSE法检测细胞增殖能力。结果:E2组的AKT活化比值较对照组显著升高(P=0.006 2),ER组和AKT组的AKT活性比值较E2组显著降低(P=0.006 0和P=0.006 4),但不能完全抑制雌二醇作用。E2组的VEGF、bFGF、IL-8 mRNA或蛋白的表达均明显高于对照组(P均<0.01);在ER组及AKT组中VEGF、bFGF、IL-8 mRNA或蛋白的表达均明显低于E2组(P均<0.05);雌二醇作用HEC-1A细胞后,细胞增殖数明显增多,细胞周期加快(P均<0.01)。结论:在HEC-1A细胞,雌二醇可能通过激活AKT信号通路产生VEGF、bFGF、IL-8因子,从而增强肿瘤细胞的增殖能力。 陆媛媛 张洁清 梁少凤 李力关键词:雌二醇 AKT 增殖 雌二醇经丝苏氨酸蛋白激酶激活核因子κB通路对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖迁移的影响 被引量:11 2014年 目的 探讨雌二醇在子宫内膜癌Ishikawa细胞中是否通过丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)介导核因子κB (NF-κB)通路产生细胞因子,及其对细胞增殖及迁移的影响.方法 Western blot法检测雌二醇作用Ishikawa细胞后AKT活化情况,以及AKT和ER抑制剂对雌二醇活化AKT的影响,TransAM NF-κB p65检测不同浓度雌二醇及1×10^-6 mol/L雌二醇作用不同时间后的NF-κB活性水平.经雌二醇(雌二醇组)、ER抑制剂(ER组)、AKT抑制剂(AKT组)和NF-κB抑制剂(NF-κB组)分别预处理Ishikawa细胞后,采用荧光定量PCR检测细胞内血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) mRNA表达,Western blot法检测VEGF、bFGF蛋白的变化,流式细胞仪检测细胞周期的变化,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移能力.结果 Western blot检测结果显示,雌二醇、AKT和ER抑制剂作用Ishikawa细胞后AKT活性水平分别为0.090±0.075、0.013 ±0.036、0.042±0.008,对照组为0.053±0.036;雌二醇组的AKT活性值比对照组、ER组及AKT组升高,差异均有统计学意义(P<0.05).TransAM检测显示,雌二醇浓度为1×10^-6mol/L时,Ishikawa细胞NF-κB活性为0.77±0.20,较对照组(0.51±0.16)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);1×10^-6mol/L雌二醇作用30 min及1h时,Ishikawa细胞NF-κB活性水平最高(P<0.05).AKT组NF-κB活性为0.54±0.27,低于1×10^-6mol/L雌二醇组(P<0.05).雌二醇组VEGF、bFGF mRNA的表达分别为6.34±0.45和1.58 ±0.12,明显高于对照组的0.83±0.03和0.34±0.02(均P<0.01);雌二醇组VEGF、bFGF蛋白的表达均明显高于对照组、ER组、AKT组和NF-κB组(均P<0.05).雌二醇作用Ishikawa细胞后,细胞增殖数明显增多,G0/G1期比例明显低于对照组(均P<0.01).结论 雌二醇可能经AKT激活NF-κB通路产生VEGF和bFG因子,促进Ishikawa细胞的增殖与迁移能力。 宋红林 梁少凤 张洁清 李力关键词:雌二醇 核因子ΚB 细胞运动 GPR30和VEGF蛋白在子宫内膜腺癌中的阳性表达率及临床价值 被引量:1 2016年 目的探讨G蛋白偶联受体30(GPR30)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率及其与临床病理特征的关系,分析GPR30及VEGF蛋白在子宫内膜腺癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测GPR30与VEGF蛋白在93例子宫内膜腺癌、37例不典型增生子宫内膜和31例正常子宫内膜组织中的阳性表达率。结果GPR30和VEGF蛋白在子宫内膜腺癌中的阳性表达率分别为65.59%和58.06%,均显著高于不典型增生子宫内膜及正常子宫内膜(P<0.05)。随临床分期升高及淋巴结转移,GPR30及VEGF蛋白在子宫内膜腺癌中的阳性表达率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),但不同肌层浸润深度比较差异无统计学意义(P>0.05);随着组织学分级升高,GPR30蛋白阳性表达率明显升高,VEGF蛋白阳性表达率则无显著变化。GPR30与VEGF蛋白在子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率呈正相关。结论GPR30及VEGF蛋白的阳性表达率与子宫内膜腺癌的发生、发展有关,GPR30及VEGF检测有助于评估子宫内膜腺癌的生物学行为和预后。 周云霞 刘婵桢 宋红林 张洁清 李力关键词:子宫内膜腺癌 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子与雌孕激素受体在子宫内膜腺癌中的表达及意义 被引量:5 2016年 目的:探讨子宫内膜腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达与雌激素受体(ER)α及β、孕激素受体(PR)的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化(SP)方法检测93例子宫内膜腺癌(内膜腺癌组)和31例正常子宫内膜(正常内膜组)VEGF、ERα、ERβ及PR的表达。结果:1内膜腺癌组VEGF阳性表达率(58.1%)明显高于正常内膜组(32.3%),而ERα的阳性表达率(59.1%)明显低于正常内膜组(80.6%),差异均有统计学意义(P<0.05)。ERβ、PR的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。2在子宫内膜腺癌组织中,VEGF的阳性表达在病理分期和有无淋巴结转移中比较,差异有统计学意义(P<0.05);ERα的阳性表达率在病理分期、组织学分级、肌层浸润深度中比较,差异有统计学意义(P<0.05);PR的阳性表达率在病理分期和组织学分级中比较,差异有统计学意义(P<0.05);ERβ的阳性表达率在临床病理特征中的比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。3VEGF与ERα的表达呈负相关(r=-0.273,P=0.046)。结论:VEGF及ERα的表达与子宫内膜腺癌的发生发展及预后有关,VEGF及ERα的检测可能有助于评估子宫内膜腺癌的生物学行为和预后。 陈国伟 周云霞 张洁清 李力关键词:子宫内膜腺癌 血管内皮生长因子 雌激素受体Α 雌激素受体Β 孕激素受体 子宫内膜腺癌雌激素受体亚型的表达及其与临床病理的关系 被引量:1 2016年 目的探讨雌激素受体α(ERα)、ERβ在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选择2011年1月~2012年12月在广西医科大学附属肿瘤医院经组织学证实的93例子宫内膜腺癌(子宫内膜癌组)及31例正常子宫内膜(对照组)组织,分别采用qRT-PCR及免疫组化法检测ERα、ERβ mRNA及蛋白的表达情况。结果子宫内膜癌组ERα mRNA表达量及蛋白阳性表达率、ERα/ERβ mRNA均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01);随着临床分期、组织学分级、肌层浸润加深,ERα mRNA表达量、蛋白阳性表达率及ERα/ERβ mRNA比值逐渐下降(P〈0.05或P〈0.01);子宫内膜癌组ERβ mRNA及蛋白表达也降低,与对照组比较,差异均无统计学意义(均P〉0.05)。子宫内膜癌组织中ERα与ERβ阳性表达率呈负相关(r=-0.234,P〈0.05)。结论在子宫内膜癌的发生发展中,ERα的变化可能较ERβ更有意义,ERα/ERβ mRNA比值可作为判断子宫内膜癌预后的指标。 陈国伟 周云霞 张洁清 李力关键词:子宫内膜腺癌 雌激素受体Α 雌激素受体Β