国家自然科学基金(30970044)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：崔堂兵陈亮张少平郭勇刘彩平更多>>
- 相关机构：华南理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程理学更多>>
- 豆豉纤溶酶的定向进化被引量：5
- 2010年
- 为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率(kcat)是野生型的2.57倍.
- 张少平崔堂兵陈亮郭勇
- 关键词：枯草芽孢杆菌豆豉纤溶酶易错PCR定向进化
- 产纤溶酶微生物的筛选鉴定及生长模型的建立被引量：2
- 2010年
- 使用酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛的方法,从9种豆豉中分离到纤溶酶产生菌59株,其中DC-YJ11菌株的酶活较高。通过对其形态特征、生理生化特征结合16SrDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。并对其构建了系统发育树和基于BP神经网络的生长模型BP-YJ11。
- 刘彩平崔堂兵
- 关键词：枯草芽孢杆菌纤溶酶BP神经网络
- 纤溶酶的分离纯化及其胞外存在方式的初步探索
- 2011年
- 为了获得纯纤溶酶并确定纤溶酶在枯草杆菌DC-12胞外是否存在酶与酶原2种形式,收集枯草杆菌DC-12不同时间点的发酵上清液进行分离纯化,对纤溶酶及其可能存在的酶原进行纯化和分析,不同时间点的发酵液通过Sephadex G-75凝胶过滤,都出现2个吸收峰。层析液和加入纤溶酶原激活剂尿激酶的层析液在加热的纤维蛋白平板上都有水解圈,并且10μL层析液和2μL巴比妥那缓冲液在加热的纤维蛋白平板上产生的水解圈与10μL层析液和2μL 100U/mL尿激酶所产生水解圈的面积相同。通过SDS-PAGE凝胶电泳发现,Ⅰ峰在44.3ku～66.4ku处有一条带,Ⅱ峰在29ku处有一条带,表明获得了电泳纯的豆豉纤溶酶,可用于后续研究,初步判定豆豉纤溶酶在枯草杆菌DC-12胞外不存在酶原。
- 陈亮崔堂兵
- 关键词：枯草杆菌纤溶酶分离纯化
- 豆豉纤溶酶对枯草杆菌WB800的影响被引量：1
- 2011年
- [目的]研究豆豉纤维酶(DFE)在枯草杆菌WB800中的生理功能。[方法]以能够合成DFE的重组菌株WB800/pBE3.DFE为试验菌株,研究其产孢率和在各外界胁迫下的耐受性。[结果]菌株WB800/pBE3和WB800/pBE3.DFE在产孢培养基中发酵24 h后,菌株WB800/pBE3.DFE的产孢率仅比对照菌株高9.6%;继续发酵至48 h,菌株WB800/pBE3.DFE的产孢率提高到了83.3%,而对照菌株的产孢率只有57.0%。表明DFE可以提高枯草杆菌的产孢率。在酸性、NaCl、高温、H2O2胁迫下,菌株WB800/pBE3.DFE的耐受性要高于对照菌株。可见,DFE很可能通过调节产孢机制来提高枯草杆菌的耐受性。[结论]该研究初步揭示了DFE在枯草杆菌中的生理功能,为DFE的应用奠定了理论基础。
- 陈亮崔堂兵
- 关键词：枯草杆菌耐受性
