甘肃省科技攻关计划(0709TCYA053)
- 作品数：5 被引量：19H指数：2
- 相关作者：车团结何祥一邓旎史晓艳张琳更多>>
- 相关机构：兰州大学兰州百源基因技术有限公司海南省人民医院更多>>
- 发文基金：甘肃省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因突变分析及其真核表达载体的构建被引量：6
- 2009年
- 目的克隆少汗型外胚层发育不良症(HED)eda-A1基因并进行突变分析,同时构建eda-A1基因编码序列突变型(M)和野生型(W)的真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步明析eda基因的功能奠定基础。方法设计含有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点的引物,从HED患者和正常人外周血淋巴细胞中提取总mRNA,利用RT-PCR法克隆eda-A1(M/W)基因cDNA序列;并运用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pcDNA3.1(-)载体和eda-A1基因片段,将eda-A1(M/W)插入到pcDNA3.1(-)载体中,从而构建新的真核表达载体,命名为pcDNA3.1(-)-eda-A1-M和pcDNA3.1(-)-eda-A1-W。结果成功克隆少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因,并发现未见报道过的907位A→C错义突变,导致306位编码氨基酸由谷氨酰胺变异为脯氨酸;经PCR法、重组载体双酶切法、DNA测序验证,成功构建了pcDNA3.1(-)-eda-A1-W/M的真核表达载体。结论成功构建少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因(突变型和野生型)真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步研究该基因在牙齿发育中的生物学作用奠定了实验基础。
- 雷科车团结王锦明邓旎张琳何祥一
- 关键词：突变真核表达载体
- 白假丝酵母菌对人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞增殖的诱导作用被引量：2
- 2011年
- 目的研究白假丝酵母菌(S.albicans)对人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养ECV304,实验分为S.albicans上清液组、S.albicans灭活菌液组、上清液和灭活菌液混合组、对照组。采用MTT法、细胞计数法、倒置显微镜及流式细胞术分别观察各组对ECV304细胞增殖及细胞周期的影响。结果在不同浓度、不同时间的培养条件下,4倍稀释的S.albicans上清液在培养48 h能显著促进细胞增殖;倒置显微镜观察发现4倍稀释的S.albicans上清液实验组细胞密度明显增高;上清液和灭活菌液分别作用细胞40h后,上清液组细胞S期、G2/M期所占百分比显著升高,增殖指数(PI)增高,与对照组相比,有显著性差异(P<0.05)。而灭活菌液组的PI值无显著性差异(P>0.05)。结论 S.albicans的代谢产物可引起ECV304细胞的增殖。
- 张琳车团结史晓艳何祥一
- 关键词：白假丝酵母菌增殖代谢产物细胞周期
- 应用PCR技术快速检测口腔念珠菌菌株被引量：2
- 2011年
- 目的:本研究将PCR技术应用于口腔念珠菌检测中,寻找出一种能够快速、准确、有效检测口腔念珠菌的方法。方法:收集口腔临床唾液样本100例,科玛嘉显色培养基进行培养,同时应用PCR方法对100例临床样本进行检测鉴定。结果:传统念珠菌培养方法的检出率为35%;应用两对引物,PCR方法的检出率分别为68%和49%。传统的念珠菌检测方法耗时长,特别是培养法,需时48hrs;应用PCR方法对念珠菌进行检测,只需要5hrs,且阳性检出率和准确性较高。结论:PCR方法快速敏感、特异性高,相较于念珠菌传统培养方法,是一种更加简便理想的检测方法。
- 邓旎车团结雷科廖天安何祥一
- 关键词：口腔念珠菌聚合酶链反应
- 嗜酸乳杆菌对人舌癌细胞增殖的影响被引量：7
- 2012年
- 目的研究嗜酸乳杆菌对人舌癌细胞Tca8113增殖及细胞周期的影响。方法体外培养Tca8113细胞,分别将不同稀释度(原液和4、16倍稀释)的嗜酸乳杆菌上清液、灭活菌液和无细胞提取物与Tca8113细胞共培养,采用倒置显微镜观察细胞形态并行细胞计数,磺酰罗丹明B(SRB)法测定细胞增殖率,流式细胞术分析嗜酸乳杆菌各组分对Tca8113细胞增殖及细胞周期的影响,激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)检测细胞内自由基和Ca2+含量。结果嗜酸乳杆菌各组分作用于Tca8113细胞48 h后,在倒置显微镜下观察,细胞由菱形、多角形、铺路石状变为细长形。细胞计数与SRB实验分析:在不同稀释度同一培养时间与不同培养时间同一稀释度培养条件下,嗜酸乳杆菌各组分均可明显抑制Tca8113细胞增殖,抑制力随稀释度增加而降低,随培养时间延长而增强。流式细胞术分析:嗜酸乳杆菌各组分作用Tca8113细胞48 h后,细胞增殖指数降低(P<0.01)。CLSM检测:嗜酸乳杆菌各组分作用Tca8113细胞48 h后细胞内自由基和Ca2+含量均升高(P<0.01)。结论嗜酸乳杆菌代谢产物、灭活菌液、无细胞提取物均可抑制Tca8113细胞增殖,可能与菌体及其代谢产物引起细胞内自由基含量增多、Ca2+超载有关。
- 史晓艳陈骏车团结白德成何祥一
- 关键词：TCA8113细胞嗜酸乳杆菌细胞增殖激光扫描共聚焦显微镜
- 兰州市母婴间念珠菌传播的流行病学研究被引量：2
- 2009年
- 目的:调查兰州市产妇念珠菌的定殖以及母婴间念珠菌的传播状况。方法:采集产妇的阴道分泌物及口腔分泌物样本(共104×2例),及其新生婴儿的口腔分泌物样本(共104例)。采用CHROMagar念珠菌显色培养基进行培养、分离及鉴定,同时应用分子生物学技术对结果进行验证鉴定。结果:312例样本(母亲104×2,新生儿104)中81例分离培养出念珠菌,产妇阴道念珠菌检测阳性率39.42%(41例),产妇口腔念珠菌阳性率33.65%(35例),其中21.15%(22例)阴道与口腔同时阳性;新生儿口腔念珠菌培养阳性率为4.81%(5例)。检出阳性样本中菌种分布为,白色念珠菌53株,光滑念珠菌33株,克柔念珠菌2株,热带念珠菌1株。有2对母婴同时分离出白色念珠菌,经PCR检测,其基因型相同。结论:兰州市新生儿念珠菌检出率以及母婴间念珠菌的传播率较其他地区高。新生儿念珠菌感染与念珠菌的水平传播和垂直传播都相关。监控医院内念珠菌的传播及预防母亲产前阴道念珠菌感染可减少新生儿念珠菌感染的可能性。
- 邓旎张金婷车团结康妍丽范真何祥一
- 关键词：念珠菌产妇口腔流行病学
