国家自然科学基金(90608024)
- 作品数：14 被引量：23H指数：3
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- 相关机构：暨南大学广州市职业病防治院广东省妇幼保健院更多>>
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- 人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的B细胞表位预测
- 2009年
- 目的预测人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的B细胞表位。方法应用互联网软件分析Hopp&Woods亲水性(Hydrophilicity)、可及性(Accessibility)、极性(Polarity)及柔韧性(Flexibility)、Welling抗原性(Antigenicity)和二级结构(Secondary structures)等参数,用吴玉章等建立的B细胞表位预测法综合评价。结果多种预测法重复了人巨细胞病毒UL23开放阅读框编码蛋白的N端第27～43、104～119、125～160位氨基酸区域内或附近,该区域含有β转角和无规卷曲结构,极可能是B细胞识别表位。结论为应用合成肽或原核表达大片断蛋白制备抗人巨细胞病毒UL23基因编码蛋白的抗体提供了依据。
- 朱峰李弘剑李月琴何智强李实骞张欣周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒B细胞表位
- 人DNAJB6蛋白与人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23相互作用的鉴定被引量：6
- 2009年
- pUL23是人巨细胞病毒(HCMV)UL23基因编码的皮层蛋白.HCMV皮层蛋白与病毒颗粒的形成、病毒转移、免疫调控等病毒生活过程相关.利用GAL4酵母双杂交系统筛选人胚肾cDNA文库,获得与人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23相互作用的宿主蛋白分子DNAJB6[DnaJ(Hsp40)homolog,subfamily B,member 6].回复酵母双杂交、体外GST-Pull down和免疫共沉淀试验再次确认两者之间的相互作用.该结果为进一步研究pUL23蛋白在HCMV生活周期中的作用机制提供依据.
- 姚伙旺李实骞胡嘉淼陈业志邹奕张欣李月琴周天鸿李弘剑
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交蛋白质相互作用
- 人巨细胞病毒编码蛋白pUL23在E.coliBL21(DE3)中的表达和纯化
- 2012年
- 大肠杆菌中高效表达携带组氨酸标签的人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23,并进行纯化以及鉴定。提取感染HCMVTowne病毒株的HFF细胞的总RNA,逆转录为cDNA作为模板,经PCR获得UL23的基因片段,将此片段插入表达载体pET-28a(+),构建pET28a(+)-UL23重组质粒。将pET28a(+)-UL23转化至大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达。表达产物经Western blotting分析后进行发酵,再用Ni sepharose亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,成功构建pET28a(+)-UL23原核表达载体,表达及纯化了His-pUL23融合蛋白,为进一步研究pUL23奠定基础。
- 李婧惠刘明亮李继东张忠明冉艳红周天鸿李弘剑
- 关键词：人巨细胞病毒纯化组氨酸标签
- 稳定表达人巨细胞病毒pUL49蛋白人胚肺成纤维细胞系的建立
- 2010年
- 目的用逆转录病毒载体介导的基因转移方法,建立稳定表达人巨细胞病毒(HCMV)UL49基因的HELF细胞系。方法首先应用RT-PCR从感染HCMV的HELF细胞RNA中扩增UL49基因,克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1上,以此构建重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-FLAG-UL49,并转染AmphoPack-TM-293细胞,收集逆转录病毒,感染HELF细胞,经G418抗性筛选出阳性细胞。结果经IFA、RT-PCR及Western blot检测到UL49基因在稳定细胞系中表达。结论 HELF-PLEGFP-N1-FLAG-UL49稳定细胞系构建成功。此细胞系为进一步研究HCMV pUL49蛋白的功能提供了一个有力工具。
- 宫君原肖小平员月明李月琴张欣邹弈李弘剑周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒逆转录病毒稳定细胞系
- 基于Red重组系统构建含Flag标签标记UL23基因的重组人巨细胞病毒
- 2012年
- 利用来源于λ噬菌体的Red系统,将Flag标签及两侧带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段插入原HCMV TowneBAC中UL23基因3'末端区域,通过卡那抗性筛选带有抗性标记的重组菌株,并通过表达重组酶FLP的质粒pCP20去除卡那霉素抗性基因,得到带有Flag标签标记UL23基因和单一FRT位点的突变BAC。重组后的BAC分子同质粒pcDNA3.1(+)-pUL82共转染HFF细胞后重建重组HCMV。Western blotting检测证实所构建重组病毒能够表达含Flag标签标记的pUL23蛋白。此含有Flag标签标记UL23基因的重组HCMV的成功构建为了进一步研究人巨细胞病毒UL23基因及其产物的功能提供依据。
- 胡嘉淼肖静刘明亮曾宝娟李婧惠李继东周天鸿冉艳红李弘剑
- 关键词：RED同源重组
- 核酶M1GS-T6对HCMV UL97基因RNA片段体外切割作用被引量：3
- 2007年
- 目的:研究M1GS核酶对HCMV UL97 mRNA的体外切割作用。方法:针对HCMV UL97 mRNA T6位点设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,GS),将其共价结合至大肠杆菌核酶P催化亚基(M1 RNA)的3′末端,构建M1GS-T6核酶,并用其对UL97基因亚克隆片段转录产物进行体外靶向切割实验。结果:核酶M1GS-T6具备特异性切割靶分子UL97mRNA的能力。结论:核酶M1GS-T6具备特异性切割活性,为进一步研究HCMV病毒基因功能和治疗提供了新的途径。
- 张欣李弘剑李月琴何华坤邹奕周天鸿
- 稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23细胞系建立及其功能研究被引量：1
- 2010年
- 目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据。方法:通过PCR技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23。将该载体导入Am-phoPackTM-293细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系。采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位。结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白。共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23定位于细胞质,处于细胞核周边。结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系。该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程。
- 杨丹丽肖小平宫君原员月明李月琴张欣邹弈周天鸿李弘剑
- 关键词：巨细胞病毒逆转录病毒
- 广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL136基因的序列特征及多态性被引量：4
- 2009年
- 目的研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代株UL136基因的序列特征与基因多态性。方法从10例广州感染新生儿体内分离获得2株（D2、D3）临床HCMV分离株，经多重PCR鉴定后进行UL136基斟全序列扩增。PCR产物纯化后进行基因克隆，构建HCMVUL136-pMD18-T重组质粒。经基冈测序及应用生物信息学分析方法，分析其核酸序列稳定性、编码蛋白质的二级结构与特衙。结果成功分离2株HCMV临床分离株，测序结果显示，D2、1）3及与GenBank中公布的11株临床分离株（4J、51C、39J、33J、63J、22M、10J、32C、29C、27C、Toledo）中，UL136序列高度保守。同源性分析显示在UL136全基因序列1019个核苷酸中，存在30个位点变异，所有的变异均为碱基替换，无插入及缺失突变。编码蛋白的氨基酸序列也高度保守，240个氨基酸残基巾，不同临床分离株氨基酸变异率为1．6％～3．7％。不同分离株的UL136蛋白巾参与形成二级结构的氨基酸数目及等电点不同。进化树分析结果显示D2和D3均属于1a群。结论广州地区临床低传代分离株HCMVUL136基因核苷酸序列及其氨基酸序列极为保守，但仍存在一定多念性。其基因的稳定性提示HCMVUL136开放阅读框（ORF）可能是一个具有重要功能的基因。其编码后修饰位点提示UL136可能与膜受体介导的细胞信号转导通路有关。
- 王波李月琴胡兢晶苏海浩丁俊彩田传军张纯青周天鸿
- 关键词：巨细胞病毒多态性单核苷酸基因生物信息学
- 人类巨细胞病毒HCMV UL49区域一个新转录本的发现
- 2010年
- 将人类巨细胞病毒HCMVTowne株接种至人包皮成纤维细胞(HFF)中,收集病毒感染后的细胞,抽提病毒RNA,运用RT-PCR技术扩增基因的序列,对PCR产物作TA克隆,重组体进行测序和生物信息学分析。结果表明,HCMV的UL49区域存在一个新转录本,暂命名为UL49X。将所获得的序列与HCMV基因组比对分析表明,UL49X序列为68783bp到78608bp处的基因片段,并发现从69194bp到71530bp处有个典型的内含子。
- 廖文镇杨光李月琴张欣邹弈李弘剑周天鸿
- 关键词：HCMVRT-PCR
- 过表达SSTR2通过多种信号途径抑制SSTR2表达阳性的肿瘤生长被引量：5
- 2009年
- 目的:研究转基因SSTR2对有不同内源性SSTRs表达谱的癌细胞增殖抑制及其潜在信号途径。方法:在裸鼠身上接种过表达SSTR2或LacZ的capan-2cell和A549细胞,观察肿瘤生长情况。在裸鼠身上构建capan-2移植瘤模型,通过皮下注射携带SSTR2基因的腺病毒,观察肿瘤生长情况。免疫印迹法分析可能涉及的信号途径。结果:过表达SSTR2能够抑制具有不同内源性SSTRs表达谱肿瘤的生长,包括capan-2具有内源性SSTR2表达。SSTR2过表达明显影响了凋亡途径、MAPK途径以及血管生成中的一些组件。结论:SSTR2有希望成为使用转基因治疗多数癌症的候选基因。
- 肖小平李月琴徐彬李弘剑张欣周天鸿邹奕
- 关键词：腺病毒异种移植
