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6株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析被引量：2: 2014年; 对福建省一些猪场临诊疑似副猪嗜血杆菌感染的病例进行细菌分离鉴定,PCR扩增分离菌株的16S r RNA并进行测序分析,对分离菌进行细菌形态和PCR鉴定及序列分析。结果显示,获得6株副猪嗜血杆菌分离株,该6株分离株之间的同源性在99%以上,而与国内外参考菌株序列之间的同源性在84.5%-99.2%。发育进化树分析结果表明,分离菌株与血清4型和5型的关系较近,与其他血清型关系较远。研究建立了副猪嗜血杆菌的分离培养方法,并对分离株进行了PCR鉴定和16S r RAN序列分析,为副猪嗜血杆菌病的诊断与防治奠定基础。; 车勇良陈如敬江斌王隆柏魏宏吴学敏庄向生周伦江; 关键词：副猪嗜血杆菌 RRNA

猪丹毒杆菌的分离鉴定及其SpaA基因的遗传变异分析被引量：25: 2011年; 为确定导致福建某猪场猪只发病的病原,从病猪心、肺中分离并纯化细菌,根据其形态特征、培养特性、生化试验及PCR鉴定,确定为猪丹毒杆菌。SpaA基因测序结果表明该分离菌在第609位点处出现了由胸腺嘧啶突变为鸟嘌呤,对应的氨基酸是由甲硫氨酸突变为异亮氨酸。致病性试验结果表明,2.1×108 CFU/mL的菌液10倍稀释后,感染28日龄健康昆明小鼠,该分离菌对28日龄健康小鼠的半数致死量为2.1×103.5 CFU/mL,死亡小鼠的剖解病变表现为心肌有白色坏死点,肝脏实变、坏死,肺出血和脾脏梗死等,并分离出与感染菌株形态特征完全一致的菌落。药敏试验结果显示,该分离菌株对青霉素、红霉素、氨苄青霉素、强力霉素、先锋霉素、阿奇霉素等较为敏感。; 车勇良陈如敬王隆柏魏宏吴学敏俞玉鸿庄向生周伦江; 关键词：猪丹毒杆菌

副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法的建立与应用被引量：11: 2013年; 【目的】建立一种可快速检测副猪嗜血杆菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。【方法】根据GenBank中副猪嗜血杆菌肽聚糖相关脂蛋白(PalA)基因序列,在其保守区域设计外引物、内引物和环引物用于LAMP检测。优化副猪嗜血杆菌LAMP检测的反应体系,在反应产物中加入SYBR GreenⅠ,对检测结果进行肉眼判定,建立副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法,评价该检测方法的特异性、敏感性。用建立的副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法对临床分离的8株不同血清型副猪嗜血杆菌进行检测。从疑似患副猪嗜血杆菌病的猪体内采集10种体液,用所建立的可视化LAMP检测方法进行检测。【结果】建立了副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法,该法在55℃水浴1h即可对副猪嗜血杆菌核酸进行高效扩增,反应结束后加入SYBR GreenⅠ即可通过肉眼观察对结果进行判断。该方法具有很强的特异性,其对DNA核酸的最低检测限为40fg,是常规PCR检测最低限的100倍,显示出较高的敏感性;用建立的LAMP方法对8株不同血清型副猪嗜血杆菌进行检测,结果均为阳性。用建立的LAMP方法对10种体液进行检测,结果鼻液、气管液、胸腔渗出物、心脏血、脑膜液、腹腔液和关节囊液呈阳性,唾液、心包液和尿液呈阴性。【结论】建立了一种可对副猪嗜血杆菌进行快速检测并可凭肉眼判定结果的可视化LAMP方法,该法操作简便、反应快速、敏感性强、特异性高,适合在兽医基层进行推广应用。; 车勇良陈如敬王隆柏江斌吴学敏刘玉涛严山庄向生周伦江; 关键词：副猪嗜血杆菌环介导等温扩增技术

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏实验: 福建省某猪场大猪出现呼吸困难、喘气和咳嗽,病死猪肺脏有纤维素性胸膜肺炎病变,从病变肺脏中分离出一株革兰氏阴性短小球杆菌,生化试验表明该菌能发酵木糖、甘露醇、麦芽糖、蔗糖、果糖和葡萄糖。经PCR扩增、克隆和测序确定该菌为猪...; 车勇良陈如敬吴学敏王晨燕王隆柏刘玉涛周伦江; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌药敏; 文献传递

副猪嗜血杆菌oppA基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：5: 2015年; 采用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌(Hps)的寡肽结合蛋白(Opp A)基因,序列测定结果表明,扩增片段全长1654 bp.将扩增片段插入表达载体p GEX-6P-1中,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组融合蛋白大小约为87 ku,以纯化的重组蛋白Opp A作为抗原,建立Hps抗体的间接ELISA检测方法.通过试验确定最佳的反应条件为:抗原包被浓度为1.0μg·孔-1,于37℃包被1 h,待检血清的稀释度为1∶50,阳性判断标准(D450 nm)大于0.643.特异性和重复性试验结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和稳定性,可用于Hps抗体的检测.; 车勇良陈如敬江斌王隆柏魏宏吴学敏庄向生周伦江; 关键词：副猪嗜血杆菌克隆间接ELISA

副猪嗜血杆菌肽聚糖相关脂蛋白(PalA)的序列分析及三维结构建模被引量：2: 2012年; 为深入研究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)肽聚糖相关脂蛋白(Peptidoglycan-associated lipo-protein,palA)的生物学特性,设计了一对特异性引物,应用PCR方法来扩增Hps palA的全基因序列,进行克隆和测序。采用生物信息学方法,对Hps的palA基因核苷酸及其编码氨基酸序列进行比对,选取其中的血清学5型分离株,对其PalA蛋白的分子结构、理化性质及结构功能域、蛋白质二级结构等重要参数进行了预测和分析,并对PalA蛋白的三级结构进行了同源建模。结果显示,PCR扩增出462bp的目的片段;测序结果显示出不同血清型Hps之间palA基因核苷酸序列相似性有一定的差异,而所对应的氨基酸序列却差异很小;密码子偏爱性分析表明palA基因主要偏好GCA和AAA;PalA蛋白的理论等电点为6.28,偏弱酸性;PalA蛋白的二级结构以α螺旋、不规则卷曲和延伸链为主要构件;Hps的PalA蛋白的氨基酸序列与流感嗜血杆菌Pal蛋白的相似性为71.97%,以Pal蛋白结构为模板成功构建了Hps的PalA蛋白三维结构分子模型,该PalA蛋白三维结构与Pal蛋白相似,也含有肽聚糖结合口袋区,主要由第80位的酪氨酸(Tyr)、第39位的苯丙氨酸(Phe)和第84位的亮氨酸(Leu)组成。Hps的PalA蛋白的成功建模为PalA蛋白功能的深入研究提供了参考依据。; 周伦江车勇良陈如敬江斌王隆柏魏宏吴学敏庄向生; 关键词：副猪嗜血杆菌同源建模

副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的克隆测序与生物信息学分析被引量：2: 2013年; 对副猪嗜血杆菌神经氨酸酶基因进行PCR扩增、克隆和测序,并进行同源性比较。应用生物信息学方法,对副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的二级结构和B细胞抗原表位进行预测。结果显示,副猪嗜血杆菌神经氨酸酶基因全长2 007bp,编码668个氨基酸,同源性分析显示所测5株不同血清型的副猪嗜血杆菌神经氨酸酶基因相似度在98%以上,对应氨基酸相似度在97%以上。二级结构的预测结果显示该酶主要以无规则卷曲、α螺旋和延伸链为主,只有少数的β转角;推测该酶有16个B细胞优势抗原表位区域、8个糖基化位点。该研究为进一步分析副猪嗜血杆菌免疫机理、表位疫苗设计等奠定理论基础。; 车勇良陈如敬王隆柏江斌吴学敏刘玉涛庄向生周伦江; 关键词：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶 B细胞抗原表位

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验被引量：2: 2016年; 福建省某猪场猪出现呼吸困难、气喘和咳嗽,病死猪肺脏有纤维素性胸膜肺炎病变,从病变肺脏中分离出一株革兰氏阴性短小球杆菌,生化试验表明,该菌能发酵木糖、甘露醇、麦芽糖、蔗糖、果糖和葡萄糖。经PCR扩增、克隆和测序确定该菌为猪胸膜肺炎放线杆菌。动物试验表明,该菌对小鼠具有致病性。药敏试验显示,该分离菌株只对阿莫西林、头孢噻肟和青霉素这3种药物敏感,而对氟苯尼考、替米考星、四环素、链霉素、强力霉素、环丙沙星、林可霉素、壮观霉素和磺胺嘧啶钠呈现耐药现象。该研究为猪场用药提供了参考依据。; 车勇良陈如敬吴学敏王晨燕王隆柏刘玉涛周伦江; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌药敏试验

副猪嗜血杆菌福建株的分离与鉴定被引量：1: 2011年; 副猪嗜血杆菌（Hps）引起猪的多发性浆膜炎和关节炎,该病又称为革拉斯氏病（Glasser＇s Disease）,被证实是由副猪嗜血杆菌所引起。副猪嗜血杆菌影响2周龄到4月龄的青年猪,主要在断奶后和保育猪阶段发病,通常见于5~8周龄的猪,; 车勇良周伦江王隆柏魏宏陈如敬庄向生; 关键词：副猪嗜血杆菌多发性浆膜炎关节炎保育猪断奶后

福建地区副猪嗜血杆菌的主要生物学特性被引量：3: 2012年; 为明确福建地区副猪嗜血杆菌的耐药性、血清型及其外膜蛋白P5(OmpP5)的同源性,对来自福建地区的患病猪进行了副猪嗜血杆菌的分离与鉴定,并采用琼脂扩散试验对其进行血清型鉴定和药敏试验;选取10株不同血清型代表株进行致病性试验;测定5株不同血清型菌株的OmpP5基因序列,比较相互间的同源性及与其他生物学特性的关系。结果显示,分离株的生化特性基本一致,代表株对小鼠有一定的致病性;所有分离菌株具有一种以上的耐药性,100%的菌株对青霉素、氨苄青霉素、新霉素和洁霉素敏感,93%和87%的菌株分别对链霉素和杆菌肽耐药;分离获得的52株菌株分属于5种血清型,其中24株为血清13型,12株为血清4型,11株为血清5型,2株为血清2型,3株未定型;5株代表菌株中OmpP5基因序列的同源性在93%以上,氨基酸序列同源性在91%以上。研究表明,该外膜蛋白P5基因与菌株的血清型和菌株的致病性无直接关系。; 车勇良王隆柏陈如敬江斌吴学敏刘玉涛庄向生周伦江; 关键词：副猪嗜血杆菌血清型耐药性

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福建省属公益类科研院所基本科研专项(2010R1025-2)

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