国家自然科学基金(30760266)
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
- 相关作者：王琪李力张玮尹巧云周怡更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院广西医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- LCM、IMB联合MALDI-TOF-MS技术在恶性卵巢上皮瘤相关标志物分离检测中的应用被引量：3
- 2011年
- 目的排除混杂细胞的干扰,获取人卵巢上皮瘤细胞,分离、检测特异相关标志物。方法采用激光捕获显微切割（LCM）技术获取无间质混杂的人正常、良性、恶性卵巢上皮瘤细胞,分别提取细胞总蛋白,用免疫磁珠（IMB）技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术分离检测黑色素瘤激活因子CXCL1及IL-8（1~77 aa）、IL-8（6~77 aa）和IL-8（9~77 aa）。结果利用LCM获取的卵巢上皮细胞数量级达106~107。IMB可将CXCL1及不同亚型IL-8从卵巢正常、良性和恶性上皮瘤细胞的蛋白裂解液中分离并用于MALDI-TOF-MS检测。结论 LCM、IMB联合MALDI-TOF-MS技术可以准确有效地获取卵巢上皮癌细胞的特异标志物。
- 周怡王琪张玮李力
- 关键词：激光捕获显微切割技术免疫磁珠技术
- 小分子蛋白慢病毒表达系统的构建被引量：9
- 2011年
- 目的构建趋化因子蛋白慢病毒表达系统,建立稳定表达GFP的卵巢癌细胞系,为研究趋化因子蛋白的功能及作用机制打下基础。方法趋化因子CCL18、IL-8、CXCL1基因克隆质粒经PCR扩增、酶切,与慢病毒载体PWPI连接,构建的重组慢病毒质粒按比例与包膜质粒PCMV-dR8.74及包装质粒PMD2.G混合,LipofectinTM2000共转染293T细胞系包装病毒颗粒,病毒液感染卵巢癌SKOV3细胞后,采用流式细胞仪分选出GFP表达的细胞作为转染成功的细胞。实时荧光定量PCR验证转染后目的基因的表达,Westernblot验证目的蛋白的表达。结果重组慢病毒基因能高效地转导入靶细胞,转导效率达95%以上,并稳定表达;实时荧光定量PCR检测结果显示:细胞和组织中转染目的基因组与对照组比较,均见目的基因的表达显著增高(P<0.05);Westernblot验证转染目的基因组小分子蛋白成功表达。结论本实验成功构建了小分子蛋白慢病毒表达系统,为进一步研究小分子蛋白在人体的功能及作用机制建立了实验基础。
- 尹巧云李力于红静王琪
- 关键词：慢病毒卵巢癌
- 卵巢恶性肿瘤患者血清中白细胞介素8亚型的纯化、鉴定和临床验证
- 2009年
- 早诊早治是提高卵巢恶性肿瘤患者生存率的最佳途径。本课题组先期已运用表面增强激光解吸离子化-飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术分析卵巢恶性肿瘤患者与卵巢良性肿瘤患者和健康人血清差异蛋白表达谱，筛选出31个差异蛋白作为潜在的血清肿瘤标志物。本研究对两个质荷比（M／Z）为8136（M8136）和8927（M8927）的卵巢恶性肿瘤血清差异蛋白进行纯化、鉴定，证实M8136和M8927分别为白细胞介素8（IL-8）的两个亚型，并临床验证血清中这两个亚型的含量。
- 王琪李力黎丹戎张玮
- 关键词：卵巢恶性肿瘤恶性肿瘤患者白细胞介素8人血清纯化
- 卵巢肿瘤组织CXCL1基因表达与临床病理的相关性探讨被引量：7
- 2011年
- 目的：探讨趋化因子联接因子1（CXCL1）基因mRNA在卵巢肿瘤组织中的表达及其与临床病理的相关性。方法：Trizol一步法提取卵巢肿瘤患者卵巢组织总RNA,实时荧光定量PCR技术对80例卵巢恶性肿瘤、40例卵巢良性病变及20例正常卵巢组织中CXCL1基因表达进行定量分析,并分析其与临床病理的相关性。结果：CXCL1 mRNA在卵巢肿瘤组织中表达量比在卵巢良性病变组织中明显升高,P=0.000;卵巢恶性肿瘤晚期（Ⅲ~Ⅳ期）患者组织CXCL1表达量显著高于早期（Ⅰ~Ⅱ期）患者,P=0.005。但Kaplan-Meier生存曲线显示,肿瘤组织中CXCL1基因表达与其预后无关。Cox比例风险模型分析未显示CXCL1表达量是独立判断卵巢恶性肿瘤患者预后的因素。结论：卵巢癌患者肿瘤组织CXCL1 mRNA高表达可能与恶性肿瘤的发生、发展有关。
- 黄宁王琪张玮黄敏阳志军李力
- 关键词：卵巢肿瘤聚合酶链反应
- 不同IL-8亚型的原核表达
- 2011年
- 目的构建一种精确表达小分子蛋白的技术平台,原核表达IL-8的3种不同亚型,使产物仅为研究对象本身,以避免大分子载体片段对下游研究的干扰。方法采用PCR方法扩增仅仅编码IL-8(1-77aa)I、L-8(6-77aa)和IL-8(9-77aa)成熟肽片段的基因,分别TA克隆到载体PET SUMO。测序验证后的重组质粒转化至表达菌BL21(DE3)中诱导表达,融合蛋白用基质辅助解吸电离飞行时间质谱仪进行串联质谱鉴定(MALDI-T0F-MS/MS),通过特异性的SUMO蛋白酶酶解载体SUMO蛋白,利用SUMO蛋白和其蛋白酶带6×His标签的性质,经镍螯合柱亲和层析将二者去除,以MALDI-T0F-MS/MS验证不同IL-8亚型,即IL-8(1-77aa)I、L-8(6-77aa)和IL-8(9-77aa)成熟肽片段的获得。结果产物经肽指纹图谱(PMF)分析,结果分别在NCBI和Swissport蛋白数据库搜索,证实蛋白片段属于IL-8且分子量大小与IL-8(1-77aa)I、L-8(6-77aa)和IL-8(9-77aa)成熟肽片段相符。结论本研究成功地构建了一种精确表达小分子蛋白的技术平台,并获得目的产物,为基因工程精确表达小分子蛋白提供了有效的方案,为深入研究不同IL-8亚型在卵巢恶性肿瘤中的作用机制打下实验基础。
- 周怡王琪黎丹戎李力
- 关键词：TA克隆
- 白介素8的3种亚型对卵巢癌SKOV_3细胞生物学活性的影响被引量：1
- 2013年
- 背景与目的:卵巢癌的进展是一种多因素、多环节、多阶段的过程,近来研究表明卵巢癌患者白介素8(IL-8)水平显著高于良性肿瘤患者及健康人群,卵巢癌的生长和转移可能与过度表达的IL-8有关,但尚无报道表明IL-8主要亚型在卵巢癌中的作用。本研究探讨IL-8的3种亚型IL-8(1-77)、IL-8(5-77)和IL-8(9-77)对卵巢癌SKOV3细胞的增殖、生长、迁移和侵袭能力的影响及其作用机理。方法:确认分别获得IL-8的3种亚型稳定转染的SKOV3细胞后,应用MTT比色测定法比较各细胞的生长曲线;采用流式细胞仪比较各细胞的细胞生长周期;采用集落形成实验比较各组细胞的克隆率;运用Transwell小室比较各细胞体外迁移和侵袭能力。结果:IL-8(1-77)-pwpi-SKOV3细胞和IL-8(5-77)-pwpi-SKOV3在G2期的比率明显高于SKOV3(P=0.017,P=0.020);IL-8(1-77)-pwpi-SKOV3和IL-8(5-77)-pwpi-SKOV3细胞克隆率明显高于SKOV3(P=0.000,P=0.001),IL-8(9-77)-pwpi-SKOV3细胞克隆率明显低于SKOV3(P=0.013);细胞体外迁移能力多组间差异无统计学意义(P>0.05),但细胞体外侵袭能力IL-8(1-77)-pwpi-SKOV3和IL-8(5-77)-pwpi-SKOV3明显强于SKOV3(P=0.000,P=0.002),IL-8(9-77)-pwpi-SKOV3明显弱于SKOV3(P=0.067)。结论:IL-8(1-77)和IL-8(5-77)可能促进卵巢癌SKOV3细胞的生长和增殖,并增强其侵袭能力,而IL-8(9-77)对卵巢癌SKOV3细胞增殖可能有抑制作用。
- 王爱萍王琪张玮尹巧云李力
- 关键词：卵巢上皮癌生物学功能
