国家自然科学基金(70071040)
- 作品数：32 被引量：71H指数：5
- 相关作者：李洪何涛刘友平代荣阳丁慧荣更多>>
- 相关机构：泸州医学院泸州医学院附属医院四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术文化科学更多>>
- 小鼠肝细胞表皮生长因子信号转导相关磷蛋白的动力学研究
- 2008年
- 目的探讨小鼠肝细胞中表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)信号转导相关磷蛋白的动力学改变及其对信号转导最终生理效应的影响。方法采用双向电泳及放射性同位素标记技术,并结合相关数据库资源,分析小鼠肝细胞在饱和浓度EGF持续刺激不同时间得到的EGF信号相关磷蛋白磷酸化水平的动力学变化。结果小鼠肝细胞内EGF信号转导途径中,大多数的磷蛋白都表现为激活后很快恢复到未刺激状态;个别磷蛋白则表现为持续活化状态,如Eps15和ERK2。结论在细胞整体水平上,EGF信号途径中磷蛋白表现的动力学行为是受到整个信号转导系统整合后的动力学行为;个别磷蛋白表现为持续活化状态,这些改变可能与肿瘤的发生、发展有密切关系。
- 刘友平姚富丽杨烨李洪
- 关键词：小鼠肝细胞表皮生长因子磷蛋白细胞信号转导动力学
- 小鼠肝癌细胞H22膜蛋白组的双向电泳被引量：2
- 2009年
- 目的运用双向电泳及生物信息学技术，对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的膜垡白进行比较和鉴定，以期为探索膜蛋白在肝癌发生、发展及侵袭转移过程中的作用提供实验依据。方法运用顺序抽提法结合与双向电泳兼容的膜蛋白抽提试剂盒提取小鼠肝癌细胞H22和小常小鼠肝细胞膜蛋白，用考马斯亮蓝法定量，经舣向凝胶电泳分离、银染，Image Master 2D Platinum软件分析，切取差异蛋白点，采用蔡质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术检测，Aldente软件检索Swiss-Prot数据库进行匹配鉴定。结果与正常小鼠肝纠胞膜蛋白双向电泳图谱对比分析鉴定了8个在小鼠肝癌细胞H22中表达明晁增强的膜赁白，分别为硫酸酯酶修饰因子2，蛋白激酶C和肌酸激酶Ⅱ底物蛋白3，序列装配结构组件50同系物，巨噬细胞清道人受体Ⅰ／Ⅱ，非特异生白C9或f135同系物，紧密结合蛋白ZO-2，3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶，空泡蛋由序列相关蛋白52同系物。结论已鉴定的8个膜蛋白的生理功能涉及细胞代谢、细胞增殖、细胞信号转导、细胞骨架等，且在肝癌细胞H22中表达明显增强，提示小鼠肝癌细胞H22发牛发聪及侵袭转移可能涉及相关膜蛋白生理功能的改变。
- 刘秋均李洪严冬梅刘友平杨烨
- 关键词：肝细胞电泳膜蛋白质类
- 构建小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组分析鉴定的方法模型被引量：1
- 2008年
- 背景：磷酸化蛋白质组的分析鉴定是目前蛋白质组学技术研究的主要目标之一，然而以质谱为核心的鉴定技术尚不完善。目的：建立一种简便易行、适于在一般实验室普及的分析鉴定磷酸化蛋白质组的方法并应用于小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的模型。设计、时间及地点：观察对比实验，于2003-07／2004-06在泸州医学院生物化学教研室及医学分子生物学实验室完成。材料：封闭群乳昆明小鼠100只，年龄1-3d，体质量3-6g，雌雄各半；^32P-NaH2PO4由中国北京原子能研究所提供。方法：将长势相当的体外培养的乳小鼠肝细胞随机分成两组。一组作同位素^32P标记后液氮终止反应，裂解细胞，收集蛋白并定量，双向电泳分离蛋白，干胶及放射自显影，建立小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的放射自显影图谱，初步确定6种靶标磷酸化蛋白EPs15等；另一组直接裂解细胞，收集蛋白并定量，双向电泳分离蛋白后半干式电转移至PVDF膜，根据靶标蛋白EPs15等的理论等电点和分子量剪下6张小膜。主要观察指标：采用持久性化学发光检测技术确证初步鉴定的6种靶标蛋白EPs15等。结果：①小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的放射自显影图谱显示约100个蛋白质斑点，经PDQuest 2D软件结合蛋白质数据库初步鉴定出已知的6种磷酸化蛋白EPs15等。②6种靶标蛋白的免疫印迹-化学发光图谱上均只出现了1个特异蛋白质斑点，与放射自显影图谱上的斑点基本匹配。结论：实验建立的同位素标记结合免疫印迹-化学发光的方法分析鉴定磷酸化蛋白质组简单、实用、灵敏、高效。
- 姚富丽刘友平尹康杨文理李洪
- 关键词：同位素标记双向电泳免疫印迹化学发光磷酸化蛋白质组
- 细胞信号网络稳定性的计算机仿真分析被引量：1
- 2006年
- 许多疾病的发生、发展与细胞内信号转导密切相关,众多的信号转导途径之间因交互作用和交叉调节而形成了庞大复杂的信号网络,研究这一网络的结构属性、内在组织机制以及信号转导整合的特征,对于认识和理解系统复杂性、生物自适应以及疾病的发病机制,设计与开发新型治疗药物都具有重要的意义。该文根据构建的信号网络模型,采用计算机仿真技术对细胞信号网络对外界攻击的承受能力进行了动力学模拟,仿真结果表明该网络对不同类型的节点所受攻击的承受能力不同。
- 代荣阳李洪周志远
- 关键词：细胞信号转导数学模型计算机仿真
- 节点干预对无尺度细胞信号转导网络的影响
- 2007年
- 在数学建模的基础上研究了无尺度细胞信号转导网络的拓扑结构属性及节点干预对信号网络的影响。结果表明不同类型节点干扰所导致的网络紊乱的范围和程度具有明显的差异。此研究不仅对于认识和理解细胞信号系统复杂性、结构与功能的关系具有重要意义,而且也为复杂系统的研究提供了一种新思路。
- 代荣阳李洪周志远
- 关键词：细胞信号转导网络拓扑结构计算机模拟动力学
- 不同细胞裂解液对肝细胞蛋白提取影响的研究被引量：2
- 2005年
- 目的 寻找一种更适合肝细胞蛋白质提取的细胞裂解液配方。方法 配制不同组成和不同浓度的细胞裂解液 ,分别对相同条件下培养的肝细胞进行裂解并进行蛋白定量及十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)佐证。结果 不同组成及不同浓度的细胞裂解液对肝细胞裂解作用存在显著差异。结论 去污剂用 4 % 3 [(3 胆酰胺丙基 ) 二乙胺 ] 丙磺酸 (CHAPS)的细胞裂解液对肝细胞裂解效果最好。
- 刘友平丁慧荣肖斌罗文炽李洪
- 关键词：肝细胞蛋白质提取聚丙烯酰胺凝胶电泳去污剂SDS-PAGE
- 乳小鼠培养肝细胞蛋白质双向电泳技术的建立
- 2004年
- 目的 :建立培养乳小鼠肝细胞蛋白质的双向电泳技术。方法 :取乳小鼠肝脏组织 ,进行肝细胞原代培养 ,提取肝细胞蛋白 ,以固相pH梯度 (IPG)等点聚焦为第一向 ,垂直SDS -PAGE为第二向进行双向电泳 ,并对样品处理方式、蛋白上样量、IPG等电聚焦和SDS -PAGE电泳参数设置、凝胶浓度等关键因素和环节进行了比较研究。结果 :通过实验条件的筛选和优化获得了较满意的双向电泳图谱。结论 :本文建立乳小鼠双向电泳分离技术 ,具有较高的分辨率和重复性 。
- 宋杰何涛谢华福李娟杨文理甘淋段承刚刘晓燕
- 关键词：肝细胞蛋白质组双向电泳技术细胞培养
- 细胞信号转导网络的无尺度属性及其意义被引量：9
- 2004年
- 近年来 ,对细胞信号转导网络复杂性的研究日益受到众多生物科学及复杂性科学研究者的重视 ,研究这一网络结构的无尺度属性、内在组织机制以及信号转导整合的特征 ,对于认识和理解系统复杂性、生物自适应性以及疾病的发病机制 。
- 代荣阳李洪周志远
- 关键词：细胞信号转导治疗药物发病机制疾病生物科学
- 神经元胰岛素信号转导磷酸化蛋白质组的初步分析
- 2006年
- 目的:采用同位素标记、双向电泳、放射自显影结合生物信息学技术对胰岛素(insulin,Ins)在神经元中信号转导的磷酸化蛋白质组进行分析,从蛋白质磷酸化修饰的角度深入探讨Ins在神经元中的信号转导。方法:取新生乳小鼠脑组织,进行神经元原代培养7天,用32P-NaH2PO4标记,分别加入胰岛素和培养基,分别作用0、5、20、60、120min后提取神经元蛋白。进行双向电泳,放射自显影。通过采用PDQuest2D分析软件进行图象分析,并在Swiss-Prot蛋白质数据库和PPDB磷蛋白数据库中查询,对小鼠神经元Ins信号转导磷酸化蛋白质组进行初步分析。结果:①放射双向电泳自显影图谱显示:刺激后60min、120min蛋白质磷酸化状态发生明显改变。②采用PDQuest2D分析软件对图谱差异分析及SWISSPROT蛋白质数据库和PPDB磷蛋白数据库进行查询,提示Ins在神经元的信号传递涉及到多种不同的信号途径和效应分子。结论:采用同位素标记、双向电泳、放射自显影结合生物信息技术可对Ins刺激神经元中的蛋白质可逆磷酸化修饰进行较为全面、动态的分析,寻找出相应的差异蛋白,并可进行初步的定性分析。
- 宋杰段承刚甘淋李娟谢华福刘晓燕何涛李洪刘佳佳
- 关键词：胰岛素磷酸化修饰蛋白质组双向电泳放射自显影细胞信号转导
- 表皮生长因子信号转导的复杂性与生物学效应多样性被引量：1
- 2006年
- 刘友平李洪
- 关键词：表皮生长因子生物学效应信号转导多样性诺贝尔奖获得者COHEN
