国家自然科学基金(30760235)
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
- 相关作者：李鸿斌铁宁施琳苏燕肖镇更多>>
- 相关机构：内蒙古医科大学附属医院内蒙古科技大学内蒙古医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“春晖计划”内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗环胍氨酸肽单链噬菌体抗体库的建立
- 2013年
- 【目的】拟构建并鉴定抗环胍氨酸肽（cyclic citrutlinated peptide，CCP）单链片段V（Single chain Fragment V，ScFv）噬菌体抗体库，为进一步可溶性表达和检测类风湿性关节炎（RA）关节滑膜的CCP表达情况，揭示CCP及其抗体在RA发病中作用奠定基础。【方法】①分离抗CCP抗体阳性患者外周血单个核细胞，提取mRNA并反转录cDNA。扩增免疫球蛋白重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）。通过重叠聚合酶链反应（PCR）用连接片段将VH和Vκ／Vλ体外连接成单链抗体基因；SfiⅠ和NotⅠ酶切并与噬菌粒PHEN2连接；将pHEN2ScFv电转至感受态大肠杆菌TG1，建立抗CCp-ScFv噬茵体抗体库；②检测抗CCP-ScFvPHEN2噬菌体的库容、插入效率；【结果】抗CCP-ScFv噬菌体抗体库库容8．76×10^8CFUcfu／mL，插入频率83．3％；插入率83．33％。所插入DNA片断约1180bp。MSPⅠ酶切指纹图谱鉴定也显示多样性。【结论】所构建抗环胍氨酸肽单链噬茵体抗体库库容可满足进一步可溶性表达的要求。
- 铁宁王勇张桂枝赵静李鸿斌
- 关键词：细菌噬菌体抗体肽类
- 类风湿关节炎患者滑膜抗环瓜氨酸肽表位表达与Thl7／调节性T细胞的失衡和滑膜炎症的相关性分析被引量：12
- 2012年
- 目的分析类风湿关节炎（RA）患者滑膜抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体表位的表达情况与Thl7／调节性T细胞的失衡、滑膜炎症和临床表现的相关性。方法抗CCP抗体单链抗体（ScFv）通过噬菌体蛋白展示技术构建。以6xHisoTag免疫组织化学法检测39例RA患者和35例对照组关节滑膜抗CCP抗体的表达情况。流式细胞术（FCM）检测外周血单个核细胞（PBMCs）中Thl7闹节性T细胞的百分比，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测Thl7／调节性T细胞相关细胞因子。RA滑膜病理及临床病情活动性评分纳入分析。主要采用，检验、单因素方差分析进行统计学处理。结果①抗CCP抗体表位在RA组与对照组表达率分别为76．9％和11．4％，差异有统计学意义X^2=31．9，P〈0．01）；②滑膜抗CCP抗体表位表达阳性的RA组患者外周血Thl7细胞，Thl7／i）~节性T细胞比值，Thl7相关细胞因子白细胞介素（IL）－6，IL．17a，IL．23，肿瘤坏死因子（TNF）α，调节性T细胞相关细胞因子转化生长因子（TGF）-β_1，以及外周血和滑液中抗CCP抗体水平均高于滑膜抗CCP抗体表位表达阴性的RA组；③滑膜抗CCP抗体表达阳性RA患者病情活动性DAS28以及病理滑膜细胞增生、淋巴细胞聚集和弥漫性淋巴细胞浸润评分高于抗CCP抗体表达阴性的RA患者。结论抗CCP抗体表位表达与Thl7／调节性T细胞的失衡和滑膜炎症存在密切联系，可能在RA发病机制中发挥作用。
- 李鸿斌铁宁贾永峰施琳苏燕张桂芝王勇白丽杰赵静王静肖镇
- 关键词：环瓜氨酸肽调节性T细胞
- 自噬与骨关节炎的研究进展被引量：2
- 2019年
- OA是慢性进展性关节软骨的退化性疾病,软骨细胞的自噬缺失被认为是OA进展的关键因素。自噬是细胞在应激条件下降解细胞内成分循环利用产生三磷酸腺苷(ATP)来维持必需功能的适应性反应。自噬保护软骨细胞免受各种因素影响而阻止其退化。本文就自噬在软骨细胞退化中的作用及以自噬为靶点的临床治疗方法进行综述。
- 王芳芳李鸿斌
- 关键词：骨关节炎软骨细胞自噬
- 2，3，7，8-四氯二苯-对-二噁英调节辅助性T细胞17／调节性T细胞平衡治疗类风湿关节炎的实验研究被引量：2
- 2016年
- 目的探索2，3，7，8-四氯二苯-对-二噁英（TcDD）为芳香烃受体激活剂，诱导naiveT定向分化为调节性T细胞，纠正CIA-RA大鼠模型中辅助性T细胞]7（Th17）闹节性T细胞失衡，为TCDD临床治疗RA提供实验依据。方法①牛Ⅱ型胶原建立CIA大鼠动物模型。分别设对照组（N组）；CIA模型组（c组）；TCDD治疗组（T组）各10只。②流式细胞术（FCM）检测PBMCs中Th17细胞，调节性T细胞的百分数及二者比值。ELISA检测Th17细胞相关因子（IL-1β、IL-6、IL．17a、IL-23、TNF-α）和调节性T细胞相关细胞因子（TCF-β）含量。③评估关节炎指数积分及SPECT扫描下9Tcm3P4-RGD2在体内分布情况，计算大鼠四肢关节放射性核素平均计数率靶区摄取计数／纵隔摄取计数。④治疗2周后将大鼠处死行肿胀关节病理切片评价关节炎病理损伤评分。数据统计采用单因素方差分析和配对t检验。结果c组治疗前后Th17细胞百分比显著上升，分别为[（2．99±0．16）％、（4．02＋0．33）％，t=-6．82，P=O．001]，调节性T细胞百分比显著下降，分别为[（2．67±0．57）％、（1．79±0．39）％，t=3．11，P〈0．01]，Th17/调节性T细胞比值上升，分别为（1．14±0．14、2．27±0．39，t=-4．53，P=0．039）；T组治疗前后Th17细胞百分比显著下降分别为[（2．69±0．24）％、（1．21±0．25）％，t=5．12，P〈0.01]，调节性T细胞百分比0显著上升分别为[（2．76±0．36）％、（3．78±0．22）％，t=-6．24，P〈0．01]，Th17／调节性T细胞比值下降分别为（t．08±0．07、0．21±0．05，t=-11．92，P=-0．027）。C组治疗前后Th17相关因子明显上升，其值分别为IL-1β[（96±12）pg/ml、（153±18）pg／ml，t=-13．24，P〈0.01]，IL-6[（246±14）pg／ml、（295±15）pg／ml，t=-9．41，P=0．007]，IL-17（76±14）pg／ml、（99±16）pg／ml，t=-5．78，P=0．000]，IL-23[（85±9）pg／ml、（102±11）
- 索欣李鸿斌
- 关键词：辅助性T细胞T淋巴细胞调节性
- 类风湿关节炎患者滑膜CCP表位表达与HLA—DRB1等位基因、PADI4单核苷酸多态性的相关性分析被引量：3
- 2012年
- 目的分析类风湿关节炎（RA）患者滑膜环瓜氨酸肽（CCP）表位表达情况与HIA—DRB1共同表位（SE）等位基因、肽酰基精氨酸脱亚氨酶4（PADI4）基因单核苷酸多态性（SNPs）的相关性。方法对象为2008年10月至2011年12月对内蒙古医学院附属医院风湿免疫科和骨科的53例RA患者和42例对照组患者（外伤者26例，骨关节炎16例）。抗CCP单链抗体（ScFv）通过噬菌体蛋白展示技术构建。以6×His·Tag免疫组化法检测RA关节滑膜的CCP表达情况。PADI4基因SNP通过逆转录合成cDNA测序，杂合子TA载体克隆测序。序列特异性引物PCR（SSP—PCR）法检测HLA—DRB1等位基因型。结果CCP表位在RA组与对照组表达率分别为77．4％和9．5％，差异有统计学意义（P〈0．01）。RA组2个PADI4SNP基因型（PADI4_89G^＋和PADI4_104T^＋）的频率与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。携带这2个少见基因型者较常见基因型发生RA的危险性为3．67和2．53倍。携带SE^＋等位基因型者较SE^-者发生RA的危险性为5．57倍。RA滑膜CCP表位表达仅与SE^＋等位基因型和PADI4_89G^＋、PADI4_104T^＋以及两者同时阳性相关。血清CCP滴度与SE^＋、PADI4_104T^＋G^＋，SE^＋／PADI4_89G^＋和SE^＋／PADI4_104T^＋等基因型相关。结论RA患者滑膜CCP表位表达和抗CCP抗体的产生与特定的SE等位基因型和PADI4基因SNP密切相关。
- 李鸿斌铁宁贾永峰施琳苏燕张桂芝王勇白丽杰赵静王静肖镇
- 关键词：HLA抗原精氨酸酶
- 透明质酸诱导骨髓间充质干细胞治疗骨性关节炎软骨分化研究进展被引量：3
- 2013年
- 骨关节炎(OA)是以关节软骨变性、骨质增生为特征的退行性关节病,患病率、致残率高。目前缺乏有效的治疗措施,对患者生活质量和社会经济有很大的影响。骨髓间充质干细胞(MSCs)属于多能干细胞,易从体外提取,增殖能力强,免疫源性低,已经成为一个再生医学重要的细胞来源,特别是对于软骨修复。OA滑膜存在MSCs归巢有关黏附因子,提示MSCs在OA软骨修复中有重要作用。体外透明质酸(HA)和自体滑膜液培养诱导间充质干细胞获得了与TGF-β相似的分化软骨细胞结果,为在体试验奠定基础。亦有报道MSCs治疗OA会加重骨赘的形成。
- 于洋李鸿斌
- 关键词：骨关节炎骨髓间充质干细胞透明质酸
