国家自然科学基金(30760236)
- 作品数：12 被引量：38H指数：4
- 相关作者：谢小梅刘金辉罗闳丹饶振华石青更多>>
- 相关机构：江西中医药大学南昌大学江西中医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠侵袭性肺曲霉病发病过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活被引量：8
- 2010年
- 目的:研究小鼠侵袭性肺曲霉病(IPA)发生过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活,探讨IPA的发病机理。方法:小鼠随机分为正常组(N)、正常接菌组(N+Af)和IPA模型组(IPA),经鼻吸入烟曲霉(Af)孢子后在不同时相点处死小鼠,无菌取肺组织行病理切片、Af菌落计数,RT-PCR法检测TLR2和TLR4 mRNA、蛋白印迹法检测NF-κBp65、IL-1β的表达。结果:(1)鼻吸入Af后72小时时,IPA组肺组织出现严重炎症反应,并有大量的菌丝生成,同时各时相点的菌负荷均高于N+Af组;(2)与N+Af组比较,IPA组TLR2 mRNA后期异常高表达,TLR4 mRNA持续低表达,NF-κBp65早期骤然升高后又持续下降,IL-1β一直呈低表达状态。结论:TLRs的异常激活导致宿主下游信号的低反应性,宿主不能清除Af促使了IPA的发生发展。
- 李祥罗闳丹石青谢小梅刘金辉
- 关键词：侵袭性肺曲霉病AF天然免疫模式识别受体
- MPO及TNF-α在小鼠侵袭性肺曲霉病中的作用
- 2009年
- 烟曲霉菌是自然界广泛存在的腐生致病菌，易导致免疫力低下患者发生严重且致死性的侵袭性肺曲霉病（IPA）。通过建立小鼠侵袭IPA模型，探讨髓过氧化物酶（MPO）及TNF—α在侵袭IPA中的作用，为阐明IPA的发病机制提供资料。
- 罗闳丹谢卫华李祥石青刘金辉谢小梅
- 关键词：侵袭性肺曲霉病TNF-Α小鼠MPOIPA烟曲霉菌
- NODs信号通路在RAW264.7细胞抗烟曲霉菌刺激中的作用被引量：2
- 2012年
- 【目的】通过培养RAW264.7细胞,并运用siRNA沉默NOD2基因来研究NODs信号通路在体外抗烟曲霉中的作用。【方法】体外培养RAW264.7细胞,接种2×105个/孔细胞于六孔板中,分为正常对照组(N)和正常沉默组[NOD2(RNAi),正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af)和正常沉默+烟曲霉孢子刺激组[NOD2(RNAi)+Af],每组三复孔。通过RT-PCR法检测细胞中NOD1、NOD2、RIP2 mRNA表达;Western blot法检测细胞中分泌蛋白TNF-α表达。【结果】与N组比较,N+Af组NOD1、NOD2 mRNA和TNF-α蛋白表达显著上升。与阴性对照组(Nctrol)相比,NOD2(RNAi)组NOD2 mRNA表达明显受到抑制,沉默效果达到80%以上,说明RAW264.7细胞中NOD2基因被成功沉默。与NOD2(RNAi)组比较,NOD2(RNAi)+Af组NOD1、RIP2 mRNA和TNF-α蛋白表达小幅上升,但无显著性差异(P>0.05)。与NOD2基因沉默前比较发现:与N组比较,NOD2(RNAi)组,TNF-α蛋白表达显著性升高(P<0.05)。与N+Af组比较,NOD2(RNAi)+Af组,TNF-α蛋白显著性降低(P<0.05);NOD1、RIP2 mRNA在各组中表达均未见显著性差异。【结论】NODs信号通路在RAW264.7细胞抗烟曲霉中发挥作用,尤以NOD2的作用较突出。
- 罗闳丹张海红苏明声梁永红饶振华谢小梅
- 关键词：烟曲霉菌RAW264.7细胞SIRNA
- TLR4基因的沉默下调了NOD1信号通路在RAW264．7细胞中抗烟曲霉孢子刺激作用被引量：3
- 2012年
- 为研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时NOD1和TLR4信号通路在细胞处于正常状态和免疫抑制状态时发挥的作用,以及沉默TLR4基因后对NOD1信号通路的影响,通过建立细胞免疫抑制模型,利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,运用RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后NOD1,TLR4,RIP2,MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达变化.研究发现:(1)给予RAW264.7细胞含免疫抑制剂甲泼尼龙琥珀酸钠浓度为0.04mg/mL的RPMI1640培养液培养12h后,细胞抑制效果最佳,存活率约为90%.(2)正常RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,NOD1和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用,当细胞处于免疫抑制状态时,NOD1和TLR4信号通路不能激发其有效的免疫应答.(3)TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞,沉默效率达83%.(4)TLR4基因的沉默,使NOD1信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,表明沉默TLR4基因下调了NOD1信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用.
- 饶振华谢卫华苏明声龙凯罗闳丹谢小梅
- TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究单核巨噬细胞RAW264．7受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路发挥的作用，以及沉默TLR4基因后，对TLR2信号通路的影响。方法利用RNAi技术将11LR4-siRNA转染RAW264．7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h，将细胞随机分为正常组（N组）、正常＋烟曲霉孢子刺激组（N＋Af组）、正常＋TLR4-siRNA组[TLR4（RNAi）组]、正常＋TLR4-siRNA＋烟曲霉孢子刺激组[TLR4（RNAi）＋Af组]，RT-PCR和Westernblot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88mRNA及TNF-α蛋白的表达变化。结果（1）TLR4基因沉默前：与N组比较，N＋Af组TLR2、TLR4、MyD88mRNA及TNF．Ot蛋白表达量均显著升高（P〈0．05）。（2）TLR4-siRNA（100nmol／L）转染RAW264．7细胞，沉默效率达83％。（3）TLR4基因沉默后：与N组比较，TLR4（RNAi）组TLR2、MyD88mRNA的表达量均显著降低（P〈0．05）；与N＋缈组比较，rrLR4（RNAi）＋4厂组的TLR2、MyD88mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低（P〈0．05）；与TLR4（RNAi）组比较，TLR4（RNAi）＋A厂组MyD88mRNA表达量显著升高（P〈0．05），而TLR2mRNA及TNF．仪蛋白表达量却无显著变化（P〉0．05）。结论RAW264．7细胞受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路被激活，通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用；当沉默TLR4基因后，TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用，沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用，可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用。
- 饶振华朱根华谢卫华苏明声龙凯罗闳丹谢小梅
- 四君子汤对烟曲霉菌体外生长的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨中药方剂四君子汤是否可以抑制体外培养的烟曲霉菌的生长。方法一定剂量的四君子汤和氟康唑处理的103个烟曲霉菌孢子涂布在沙氏固体培养基培养4d,计算并比较烟曲霉菌生长形成的菌落数量、菌落大小、镜下计数孢子柄与孢子的数量。结果与对照组相比,四君子汤和氟康唑可以显著降低烟曲霉菌的菌落数量和菌落大小、抑制孢子柄与孢子的的形成(P<0.05),结果呈现剂量-效应关系。与氟康唑处理组相比,300μl四君子汤处理的分生孢子形成的菌落数、菌落大小、孢子柄和产生的分生孢子数均显著低于氟康唑处理组(P<0.05)。结论中药方剂四君子汤可以明显地抑制烟曲霉菌的体外生长,提示四君子汤在治疗烟曲霉菌所致的肺部感染具有潜在的应用价值。
- 余克花王鹏刘金辉谢小梅汪雁
- 关键词：四君子汤烟曲霉菌分生孢子
- 侵袭性肺曲霉病发生发展过程中TLRs／NF—κB信号通路的激活和不同功能细胞因子的产生被引量：4
- 2011年
- 目的 研究小鼠侵袭性肺曲霉病（IPA）发生过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活和不同功能细胞因子的产生情况,探讨IPA的发病机制.方法 小鼠随机分为正常组、正常＋接种烟曲霉菌组（正常接菌组）和免疫抑制＋接种烟曲霉菌组（IPA模型组）,经鼻吸入烟曲霉孢子后在不同时相点处死小鼠,无菌取肺组织分别进行病理切片,烟曲霉菌落计数,RT-PCR法、Western blot法动态检测小鼠感染烟曲霉菌过程中肺组织TLR2、TLR4 mRNA表达、NF-κB p65蛋白、促炎细胞因子TNF-α、IL-1β及抗炎细胞凶子IL-10含量的变化规律.结果 （1）鼻吸入烟曲霉菌后72 h,IPA模型组肺组织出现严重炎症反应,并有大昔的菌丝生成,同时各时相点的烟曲霉菌负倚均高于正常接菌组;（2）与正常接菌组比较,IPA组TLR2 mRNA感染早期（24 h）低表达,感染后期（120 h、144 h）高表达;而TLR4mRNA则在感染过程中一直处于低表达状态;NF-κB p65感染早期（24 h）骤然升高后持续下降.（3）正常小鼠感染烟曲霉菌后,肺组织巾促炎细胞因子TNF-α、IL-1β在感染早期皆呈高表达,且最高表达量均出现在48 h或72 h,随后下降并恢复至正常水平.同时感染后期抗炎细胞因子IL-10表达水平升高;而IPA小鼠在感染甲.期抗炎症细胞因子IL-10大量释放,后期显著降低,促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β缓慢且低水平释放.结论 TLRs/NF-κB信号通路的异常激活,引起促炎细胞因子和抗炎细胞因子之间失去动态平衡,可能是导致侵袭性肺曲霉病发生发展的原因之一.
- 谢小梅李祥罗闳丹石青张海红饶振华
- 关键词：侵袭性肺曲霉病细胞因子
- NF-κB启动的炎症反应在小鼠侵袭性肺曲霉病肺损伤中的作用被引量：9
- 2008年
- 为了探讨NF-κB启动的炎症反应在小鼠侵袭性肺曲霉病肺损伤中的作用,将小鼠分3组:正常组、正常+烟曲霉菌接种组、IPA模型组,小鼠鼻吸入烟曲霉菌第4天处死,取肺组织,肺组织切片经HE染色观察病理损伤;比色法测定肺组织MPO活性;免疫组化法评价肺组织NF-κB p65蛋白的活化;RT-PCR法检测肺组织TNF-α、IFN-γ和β-tublin mRNA的表达。结果显示,正常健康组小鼠肺组织结构正常,未见炎症发生;正常+烟曲霉菌接种组小鼠肺组织有炎症细胞浸润,未见孢子萌芽;IPA模型组小鼠的肺组织病理损伤严重,可见炎症细胞浸润,孢子萌芽生成菌丝。正常+烟曲霉菌接种组和IPA模型组小鼠肺组织的TNF-α和IFN-γmRNA的相对表达水平、NF-κB p65免疫组化评分和MPO活性均高于正常组小鼠(P<0.05);并且IPA模型组小鼠肺组织NF-κB p65免疫组化评分值和MPO活性均高于正常+烟曲霉菌接种组(P<0.05)。结果提示,烟曲霉菌感染可激活小鼠肺组织NF-κB介导的炎症信号通路,诱导下游TNF-α和IFN-γ的表达,募集大量的中性粒细胞于感染组织,是导致IPA小鼠肺组织严重病理损伤的因素之一。
- 刘金辉杨芬罗闳丹陈志平谢小梅
- 关键词：烟曲霉菌侵袭性肺曲霉病NF-ΚBTNF-Α
- NOD1和NOD2：介导天然免疫的两种胞浆蛋白被引量：5
- 2009年
- NOD1和NOD2是新发现的一类参与天然免疫的胞浆蛋白质家族—核苷酸结合寡聚域样受体（the nucleotide bindingolig omerization domain-like receptor，NLRs）中的两个重要蛋白受体，它们通过识别外源病原菌的模式抗原分子而激活NF-κB等核转录因子，启动相关细胞因子的基因表达，释放炎性因子和抗菌肽等，其介导的信号通路在宿主抵御病原体感染的天然免疫中发挥着重要作用。
- 石青李祥刘金辉谢小梅
- 关键词：NOD2天然免疫
- 烟曲霉菌感染激活小鼠肺组织TLR3信号通路的研究被引量：4
- 2013年
- 目的 TLR3介导的天然免疫通路是抗感染重要的天然免疫机制,本文研究鼻感染烟曲霉菌是否能激活小鼠肺组织TLR3天然免疫信号通路。方法小鼠分正常组和感染组,感染组经鼻感染烟曲霉菌孢子,正常组经鼻滴入等量的生理盐水,8 h、24 h和48 h后处死小鼠,分离肺组织,取100 mg肺组织RT-PCR检测TLR3、TRIF及IFN-βmRNA水平、Western blot检测胞核IRF3的含量。取24 h、48 h和72 h小鼠肺组织制作病理切片,100 mg肺组织碾碎接种蔡氏培养基平板以检测肺组织烟曲霉菌载荷。结果感染组小鼠肺组织烟曲霉菌负荷72 h时显著下降,正常组烟曲霉菌培养阴性;正常组小鼠肺组织结构正常,感染组小鼠24 h时肺组织可见严重的炎症反应及出血,72 h时肺组织炎症反应减轻;RT-PCR及Western blot结果显示:感染组小鼠肺组织各时相点TLR3 mRNA、TRIF mRNA、IRF3和IFN-βmRNA的表达量均显著高于正常对照组(P<0.05),均在24 h达到最高峰(P<0.05)。结论烟曲霉菌感染的小鼠肺组织中TLR3信号通路得以激活,其介导的天然免疫对感染烟曲霉菌的清除和保护小鼠肺组织起了一定的作用。
- 应颖王鹏周艳邹淑彗刘金辉谢小梅
- 关键词：天然免疫IFN烟曲霉菌
