博士科研启动基金(2012RCB43)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：尹杰超吴云舟李德山任桂萍孙田更多>>
- 相关机构：东北农业大学吉林和元生物工程有限公司哈尔滨工业大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金黑龙江省青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学更多>>
- 鞭毛蛋白及鸡GM-CSF重组新城疫病毒对鸡的免疫增强作用被引量：1
- 2015年
- 为评价鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC)以及鸡GM-CSF(chGM-CSF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫增强效果,本实验通过PCR扩增fliC,并合成chGM-CSF编码基因,分别构建重组质粒pBrClone30-fliC和pBrClone30-GM-CSF,拯救获得重组病毒rClone30-fliC和rClone30-GM-CSF。RT-PCR和ELISA检测结果表明:fliC和chGM-CSF基因正确插入重组病毒,并获得稳定表达;重组病毒免疫7 d后重组NDV HI抗体效价检测显示,实验组平均HI效价分别达到4.5 log2和4.8 log2,而r Clone30组和空白组HI效价仅为3 log2和1 log2;免疫7 d后攻毒,空白组SPF鸡均死亡,rClone30组有两例发病,实验组SPF鸡全部存活并且无任何临床症状。本研究结果表明,FliC和chGM-CSF作为佐剂能够有效提高弱毒疫苗的免疫效果。
- 王卉张天援吕政孙田尹杰超吴云舟刘云野吴金任桂萍李德山
- 关键词：鞭毛蛋白新城疫病毒反向遗传操作技术
- 课堂讨论在生物制药课程教学中的应用被引量：3
- 2013年
- 生物制药是21世纪的"朝阳产业",高校中生物制药教学也应"与时俱进",探索新的教学方法和教学模式,以培养适应社会发展需要的生物制药相关领域创新人才。为了提高学生对知识的理解程度,培养学生的表达能力、科研精神,全面增强学生的综合素质和能力,笔者在生物制药课程综合教学改革过程中尝试开展课堂讨论,收到了较好的效果。文章从课堂讨论的方式、内容以及课堂讨论中存在的主要问题等方面论述了课堂讨论在生物制药教学中的应用,为相关课堂教学改革提供借鉴和参考。
- 吴云舟尹杰超齐云峰苍晶
- 关键词：生物制药课堂讨论教学方法
- 表达鸡IL2和IL15重组新城疫病毒的免疫增强作用研究被引量：1
- 2014年
- 为提高新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫保护效果,本研究选取鸡IL2(chIL2)和chIL15两个细胞因子作为分子佐剂,通过反向遗传操作技术分别将这两个基因克隆于NDV Clone30株中,构建表达chIL2和chIL15的重组病毒rClone30-chIL2和rClone30-ch IL15。ELISA法检测结果表明两种细胞因子在重组病毒中均能够稳定表达。将重组病毒免疫雏鸡,以NDV强毒BJ株进行攻毒试验,测定其抗体产生情况和保护效果。结果表明,两种重组病毒均可以诱导雏鸡产生较高水平抗体;而且两种重组病毒保护率可达100%,具有较好的保护效果。本研究为进一步提高NDV重组基因工程疫苗的效果提供了新思路。
- 张天援吕政王卉朱升龙刘云野孙田尹杰超吴云舟吴金任桂萍李德山
- 关键词：反向遗传操作技术新城疫病毒
- 新城疫病毒疫苗株F蛋白裂解位点改造对诱导HepG2细胞发生自噬的影响被引量：1
- 2013年
- 新城疫病毒(NDV)通过启动不依赖p53的内源性凋亡通路特异性诱导肿瘤细胞凋亡。最新研究表明NDV可以引起U251肿瘤细胞发生自噬,并在后期导致细胞凋亡,但其机理尚不清楚。本研究通过反向遗传操作技术对NDV Clone30疫苗株F蛋白的碱性裂解位点进行突变,将F蛋白的裂解位点由弱毒株的GGRQGR↓L突变为强毒株的GRRQRR↓F基序,并成功拯救出突变改造病毒rC30-FmF。分别将Clone30野生型病毒株rC30-wt与rC30-FmF感染HepG2肝癌细胞,通过透射电镜检测细胞超微结构显示,rC30-FmF感染4 h后细胞内出现大量自噬小体及自噬溶酶体。通过western blot检测自噬标志蛋白LC-3 II表明,rC30-FmF感染4 h后LC3II表达量显著上调,与rC30-wt对照组相比差异极显著(p<0.01)。研究表明,rC30-FmF可以在感染早期增加HepG2细胞自噬程度。从而初步证明F蛋白的裂解位点在诱导HepG2细胞自噬过程中具有关键作用。
- 吴云舟安莹孙田何金娇王卉朱升龙田贵游尹杰超张天援牛泽杉倪霁曲素素刘畅李德山
- 关键词：重组新城疫病毒F蛋白自噬
- 基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达IBDV VP2基因的研究被引量：4
- 2013年
- 为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)H LJ07株V P2双拷贝基因的重组NDV(rClone30-V P2-IRES-V P2),同时构建表达单拷贝V P2基因的重组NDV(rClone30-V P2)作为对照。间接免疫荧光试验表明V P2蛋白在感染两种重组病毒的鸡胚成纤维细胞(DF-1)中得到表达。Real-time PCR检测结果表明rClone30-VP2-IRES-V P2中VP2 mRNA转录水平明显高于rClone30-VP2。生长曲线分析表明,两株重组病毒株与亲本NDV LaSota(Clone30)株在细胞培养中可以同样稳定复制。重组病毒株在鸡胚中多次传代之后仍稳定表达VP2蛋白。本研究通过建立NDV的反向遗传操作系统构建了独立表达IBD V双拷贝V P2基因的重组NDV,并证明双拷贝基因的表达水平优于单拷贝基因,为提高重组NDV外源基因的表达量提供了新的思路。
- 何金娇刘雪莹吴云舟郭茉韩晓辉尹杰超安莹任桂萍李德山
- 关键词：重组新城疫病毒VVIBDVVP2基因IRES
