国家自然科学基金(30030140)
- 作品数：24 被引量：144H指数：8
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- 人核糖体蛋白S13编码基因的克隆及其正反义真核表达载体的构建被引量：2
- 2002年
- 目的 :克隆人核糖体蛋白S13(RPS13)cDNA片编码区全长序列 ,构建其正、反义真核表达载体 ,以进一步研究RPS13基因与胃癌多药耐药的关系。方法 :采用RT -PCR法扩增RPS13cDNA片段编码区全长序列 ,DNA重组技术构建其正、反义真核表达载体。结果 :RT -PCR法成功扩增了RPS13cDNA片段编码区全长序列 ,经DNA序列分析 ,证实与文献报道的人RPS13编码区序列一致。目的基因分别按正、反两个方向亚克隆至真核表达载体pcDNA3 1(+) ,并经酶切鉴定证实。结论 :成功克隆了人RPS13编码区全长基因序列 ,并构建了正。
- 翟惠虹郭新宁时永全杨力胡建国樊代明
- 关键词：编码基因克隆真核表达载体反转录PCR
- 锌带基因ZNRD1在胃癌耐药细胞中的表达和功能被引量：7
- 2003年
- 目的 探讨锌带基因ZNRD1在多药耐药胃癌细胞中的表达和作用。方法 应用Northernblot和半定量RT PCR ,观察锌带基因ZNRD1在胃癌细胞SGC790 1及其长春新碱 (VCR)诱导的耐药细胞SGC790 1/VCR中的表达 ;将反义核酸转染SGC790 1/VCR细胞 ,通过免疫组化检测转导细胞与非转导细胞ZNRD1蛋白的表达 ;以流式细胞仪检测细胞周期的变化 ,以MTT实验检测细胞生长曲线和对VCR、阿霉素 (ADM)的药敏性。结果 胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR与非耐药细胞相比 ,ZNRD1基因的表达明显增高。转导株antiZNRD1 SGC790 1/VCR细胞的ZNRD1蛋白水平明显低于非转导株 ,G1期细胞比例增加而S期比例减少 ,生长受到抑制 ,且对VCR、ADM的敏感性明显增高。结论 胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比 ,ZNRD1基因处于高表达状态。反义核酸转染可有效阻断ZNRD1蛋白的表达 ,在一定程度上逆转人胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR的多药耐药性。
- 张宇梅赵燕秋严泉剑潘阳林易辉樊代明
- 关键词：胃癌多药耐药性反义核酸SGC7901细胞
- 人层粘连蛋白受体调节胃癌细胞多药耐药性的实验研究被引量：9
- 2002年
- 目的 探讨相对分子质量为 6 70 0 0的人层粘连蛋白受体 (LR)对胃癌细胞多药耐药性(MDR)的调节作用及其机制。方法 应用DNA重组技术构建LR前体蛋白 (LRP)的反义RNA表达载体 ,并借助脂质体将其导入胃癌MDR细胞SGC790 1 VCR中。用Western印迹法检测LR在胃癌细胞中的表达 ,MTT法测定细胞对化疗药物的敏感性 ,流式细胞仪测定细胞周期以及阿霉素在细胞内的蓄积和潴留。结果 转染LRP反义RNA表达载体显著降低了LR在SGC790 1 VCR细胞中的表达。转染细胞 (SGC790 1 VCR anLRP)对长春新碱、阿霉素、5 氟尿嘧啶和顺铂的敏感性明显升高 ,细胞内蓄积和潴留的阿霉素也明显增多。细胞周期分析表明 ,SGC790 1 VCR anLRP细胞发生了G1期阻滞 ,并出现了自发性凋亡。结论 LR可能通过影响药物蓄积和细胞凋亡参与对胃癌细胞MDR的调节。
- 时永全翟惠虹王新宁晓暄赵燕秋樊代明
- 关键词：层粘连蛋白受体多药抗药性胃肿瘤
- 人核糖体蛋白S13与胃癌细胞多药耐药性的实验研究被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨人核糖体蛋白S13(RPS13)在胃癌多药耐药 (MDR)机制中的作用。方法 采用RT PCR法扩增RPS13cDNA片段编码区序列全长 ,DNA重组技术构建正反义真核表达载体 ,经脂质体介导转染胃癌细胞SGC790 1及胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR ,斑点杂交检测转染细胞mRNA水平的变化 ;MTT法测定细胞对化疗药物的敏感性 ,流式细胞仪检测细胞周期。结果 RT PCR法成功扩增出RPS13cDNA片段编码区序列全长 ,并构建正反义真核表达载体 ;斑点杂交试验证实 :正义转染细胞RPS13mRNA水平上调 ,反义转染细胞其mRNA水平下调。RPS13正义核酸转染SGC790 1细胞后 ,细胞对阿霉素、5 氟尿嘧啶和长春新碱的敏感性降低 ;转染反义核酸后 ,耐药细胞对丝裂霉素和长春新碱的敏感性增加。细胞周期测定表明高表达RPS13后 ,G1期、S期和G2期细胞的比例分别为 4 7.0 %、33.2 %和 19.8% ;低表达RPS13后 ,G1期、S期和G2期细胞的比例分别为 6 2 .9%、1.0 %和 36 .1%。结论 RPS13参与胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR的多药耐药。
- 翟惠虹郭新宁时永全胡建国杨力王新兰梅樊代明
- 关键词：胃癌多药耐药性RT-PCR法脂质体基因转染克隆
- 人钙周期素结合蛋白 (hCacyBP)基因的原核表达及其鼠抗血清的制备被引量：2
- 2004年
- 目的 :原核表达hCacyBP并制备小鼠抗hCacyBP多克隆抗体。观察该蛋白组织分布情况 ,研究其可能在胃癌多药耐药形成中的作用。方法 :将hCacyBP基因的全编码区克隆进原核表达载体pET2 8a中 ,转化E .coli,以IPTG诱导重组目的蛋白的表达。以纯化的重组目的蛋白作为免疫原免疫小鼠 ,制备相应的多克隆抗体。以Westernblot法检测hCacyBP在兔 10种组织的表达情况 ;以Westernblot和免疫组化染色法检测hCa cyBP在胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR及其亲本药敏细胞SGC790 1中的表达和分布。结果 :成功地表达重组目的蛋白并制备了小鼠抗hCacyBP的多克隆抗体 ,Westernblot分析显示 ,hCacyBP在兔的 10种组织中均有表达 ,在脑和肝组织中表达略高 ;hCacyBP在胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR及其亲本药敏细胞SGC790 1中的表达未见明显差异。结论 :CacyBP是在多种组织中广泛表达的一种蛋白质。制备的小鼠抗hCa cyBP多克隆抗体特异性较高 ,为进一步研究hCacyBP的功能提供了工具。
- 程翌严鹏飞乔泰东樊代明
- 关键词：多药耐药性
- 人核糖体蛋白S13(RPS13)编码基因的克隆及其正反义核酸转染胃癌细胞的初步研究被引量：3
- 2002年
- 目的:扩增人核糖体蛋白S13(RPS13)编码基因序列,构建其正、反义真核表达载体,分别转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,以进一步研究RPS13基因与胃癌多药耐药的关系。方法:采用RT-PCR法扩增RPS13cDNA片段编码区全长序列,利用DNA重组技术构建正、反义真核表达载体,经脂质体介导转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,筛选正、反义基因稳定转染细胞,RNA斑点杂交法检测正、反义稳定转染细胞mRNA水平的变化。结果:从高表达RPS13的SGC7901/VCR耐药细胞中提取细胞总RNA,RT-PCR法成功扩增了RPS13cDNA片段编码区全长序列,并经测序证实;目的基因按正、反两个方向亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),并经酶切鉴定证实;经脂质体介导将正义真核表达载体转染SGC7901细胞,反义真核表达载体转染SGC7901/VCR细胞,G418筛选获得稳定转染细胞;RNA斑点杂交试验证实:正义稳定转染细胞RPS13mRNA水平上调,反义稳定转染细胞RPS13mRNA水平下调。结论:成功克隆了人RPS13编码基因序列,并构建了其正、反义真核表达载体。在胃癌细胞系SGC7901及长春新碱耐药细胞SGC7901/VCR中得到稳定转染细胞株,正义转染细胞中RPS13mRNA表达明显增加,反义转染细胞中表达明显受抑。
- 翟惠虹郭新宁时永全王新兰梅杨力樊代明
- 关键词：反转录PCR基因转染胃癌基因克隆
- 肿胀激活状态下蛋白激酶C同工酶亚型在胃癌耐药细胞系的亚细胞分布变化及其意义被引量：8
- 2001年
- 目的 探讨肿胀激活状态下 ,传统型蛋白激酶C(cPKC)同工酶亚型在胃癌SGC790 1及其耐药细胞系SGC790 1/VCR的表达、亚细胞分布变化及其意义。方法 采用免疫荧光及免疫印迹方法 ,观察正常状态及持续低渗灌流不同时间cPKC同工酶亚型的亚细胞分布变化。利用免疫荧光双标记及共聚焦显微镜技术观察PKCα与P 糖蛋白 (Pgp)的共表达。结果 在正常状态下 ,cPKC的 4种同工酶亚型在胃癌SGC790 1及其耐药细胞SGC790 1/VCR细胞质及细胞膜均有表达 :PKCα在耐药细胞表达呈强阳性 ,在药敏细胞表达呈阳性 ,PKCβⅠ 、PKCβⅡ 在耐药细胞及药敏细胞表达均呈阳性 ,PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均呈强阳性。持续低渗灌流 ,在耐药细胞系 10min已发现有PKCα、PKCγ的移位及细胞体积的增大 ;30minPKCα几乎全部移位至细胞膜上 ,PKCγ部分移位至细胞核内 ,细胞体积较前增大 1～ 2倍 ;6 0min时PKCα及PKCγ基本恢复至正常位置 ,细胞体积也恢复正常 ;在药敏细胞系 10～ 2 0minPKCα几乎全部移位至细胞膜上 ,PKCγ部分移位至细胞核内 ,细胞体积较前增大 1～ 2倍 ;40minPKCα及PKCγ基本恢复至正常位置 ,细胞体积也恢复正常 ;而PKCβⅠ 及PKCβⅡ 在耐药细胞及药敏细胞的亚细胞分布无明显变化。共聚焦显微镜提示PKCα与Pgp在耐?
- 韩英时永全张宏博张淼利王春梅樊代明
- 关键词：蛋白激酶C同工酶胃癌
- 不同mRNA差异显示法筛选胃癌细胞耐药相关基因的研究被引量：9
- 2002年
- 目的 比较银染和放射自显影mRNA差异展示方法在分离、克隆胃癌细胞耐药相关基因过程中的优缺点。方法 长春新硷诱导人胃癌SGC790 1细胞 ,建立稳定的耐药细胞亚系SGC790 1/VCR。同时应用银染和放射自显影的mRNA差异展示方法筛选胃癌SGC790 1细胞和耐药细胞亚系SGC790 1/VCR之间mRNA表达的差异。结果 显示银染法省时 ,花费少 ,操作方便 ;在获得差异条带方面放射自显影法明显优于银染法 ,且其能得到较多低丰度的差异表达基因 ;而两者在二次PCR扩增 ,克隆 ,测序 ,杂交鉴定及假阳性率方面无明显差异。结论 银染mRNA差异展示法适合于高丰度差异表达基因的快速筛选 。
- 王新兰梅吴汉平时永全金建平樊代明
- 关键词：MRNA差异显示法银染放射自显影胃癌多药耐药性
- 蛋白激酶C的激活剂及抑制剂对胃癌耐药细胞系P-糖蛋白功能及表达的影响被引量：9
- 2001年
- 目的 探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)的激活剂及抑制剂对胃癌耐药细胞系P 糖蛋白 (P glycoprotein ,Pgp)功能及表达的影响。 方法 用免疫细胞化学及流式细胞仪方法检测Pgp在胃癌耐药细胞系SGC790 1/VCR及其药敏细胞系SGC790 1的表达 ,并观察了PKC的激活剂佛波酯 (phor bol 12 myristate 13 acctate ,PMA)和抑制剂H 7作用不同时间Pgp表达的变化。用免疫荧光双标记及共聚焦显微镜技术观察PKC α及Pgp在胃癌耐药细胞系及其药敏细胞系的共同表达。用罗丹明 12 3(Rohdamin 12 3,R12 3)作为荧光探针检测PMA及H 7对细胞内药物浓度的影响。结果 Pgp在耐药细胞系SGC790 1/VCR表达呈阳性 ,在药敏细胞系SGC790 1表达呈弱阳性。PKC α与Pgp在SGC790 1/VCR及SGC790 1细胞系细胞膜均有共同表达 ,以SGC790 1/VCR细胞系共同表达明显。PMA处理细胞 ,细胞内R12 3的平均荧光强度明显减低 ,Pgp的功能增强而表达减少 ,且有时间依赖性 ;H 7处理细胞 ,细胞内R12 3的平均荧光强度明显增加 ,Pgp的功能减弱而表达增加 ,也有时间依赖性。 结论 PKC可能通过调节Pgp的功能与表达而参与胃癌细胞多药耐药的形成。
- 韩英时永全曹云新樊代明
- 关键词：蛋白激酶CP-糖蛋白胃癌
- ZNRD1的抗体制备及在胃癌耐药细胞的蛋白表达被引量：1
- 2003年
- 张宇梅时永全金晓航赵燕秋樊代明
- 关键词：ZNRD1抗体胃癌耐药细胞蛋白表达
