国家自然科学基金(20876120) 作品数:6 被引量:15 H指数:3 相关作者: 张佑红 苏腾甲 徐智鹏 靖志强 陈龙 更多>> 相关机构: 武汉工程大学 河南省科学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 武汉市科技攻关计划项目 更多>> 相关领域: 生物学 理学 轻工技术与工程 化学工程 更多>>
重组杆状病毒感染悬浮昆虫细胞感染策略优化及放大试验 昆虫细胞—杆状病毒表达系统已经广泛应用于生物杀虫剂及重组蛋白的大规模生产。在昆虫细胞—杆状病毒表达系统中,采用低感染复数进行重组病毒的大规模生产是一个很好的选择,但感染策略中的感染复数(MOI)、感染时间(TOI)、细胞... 靖志强 张佑红关键词:杆状病毒 昆虫细胞 文献传递 粘质沙雷氏菌代谢产物灵菌红素的鉴定 被引量:5 2012年 从柠檬酸厂糖化车间酸性土壤中筛选得到一株产红色素的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)ZSG,菌株发酵液经酸性甲醇萃取、浓缩、硅胶柱层析、薄层色谱和柱色谱等分离纯化后,得到灵菌红素纯品,并采用紫外可见吸收光谱、红外光谱、液质联用分析对其结构进行了表征。 朱雄伟 徐智鹏 张楠 苏腾甲 陈杏洲 邢彦君 李卫朋关键词:粘质沙雷氏菌 灵菌红素 紫外可见吸收光谱 红外光谱 液质联用 杆状病毒在气升式反应器中感染策略优化 2012年 为了得到杆状病毒感染悬浮昆虫细胞最佳条件,利用正交实验探讨了气升式反应器中感染复数(MOI)、感染时间(TOI)、细胞初始浓度(ICD)及体系中的溶氧值(DO)的相互作用关系以及对包涵体病毒(OV)和非包涵体病毒(BV)产量的影响.结果表明:最佳感染条件为MOI为0.1,TOI为细胞处于对数生长期晚期,ICD为2×105cell·mL-1,DO为10%,最大BV病毒滴度为7.943×106TCID50·mL-1,最大OV病毒滴度为1.68×106OVs·mL-1. 张佑红 杨文 危威 徐智鹏 苏腾甲关键词:杆状病毒 昆虫细胞 人转铁蛋白偶联交联聚乙烯亚胺体外靶向转染肿瘤细胞 被引量:3 2013年 为了提高聚乙烯亚胺(Polythylenimine,PEI)类载体对肿瘤细胞的靶向性同时降低其细胞毒性,先用1800DaPEI制备了交联低分子量PEI,然后将人转铁蛋白与之偶联,得到了新型肿瘤靶向性人转铁蛋白偶联交联聚乙烯亚胺基因载体(TCP)。对所得的TCP的理化特性经行了表征,并检测了其细胞毒性。采用TCP介导pGL-3和pEGFP分别对293T、HepG2和Hela细胞系进行体外转染实验。结果表明:TCP是一种低毒高效的基因载体,在肿瘤细胞中的转染效率显著增强,因为其二硫键可在细胞内还原降解,而且通过偶联的转铁蛋白配体与肿瘤细胞表达的转铁蛋白受体间的相互作用,可增强该载体对肿瘤细胞的转染效率和靶向性。 朱雄伟 苏腾甲 张佑红 徐智鹏 张凯 刘玉兰关键词:基因载体 肿瘤靶向 聚乙烯亚胺 重组杆状病毒感染悬浮昆虫细胞感染策略优化及扩大试验 被引量:2 2010年 昆虫细胞-杆状病毒表达系统已经广泛应用于生物杀虫剂及重组蛋白的大规模生产。在昆虫细胞-杆状病毒表达系统中,感染策略中的感染复数(MOI)、感染时间(TOI)、细胞初始浓度(ICD)的相互关系还不是很清楚,而且相关报道也很少。本研究在摇瓶中利用正交实验探讨了MOI、TOI及ICD的相互作用关系以及对包涵体病毒(OV)和非包涵体病毒(BV)产量的影响。结果表明,感染复数对OV和BV产量有显著的影响;最佳感染条件为MOI为0.1,TOI为细胞处于对数生长期初期,ICD为2×105cells.ml-1;最大BV病毒滴度为2.0×107TCID50.ml-1。将在摇瓶中获得的最佳条件在气升式反应器进行扩大试验,获得最大病毒滴度为2.13×107TCID50.ml-1。 张佑红 靖志强 马静 徐鹏 陈龙关键词:杆状病毒 昆虫细胞 流式细胞术快速检测杆状病毒滴度 被引量:4 2010年 为了快速而准确的测定杆状病毒的滴度,采用流式细胞术对经SYBR Green I染色后的杆状病毒直接计数.考察固定、破膜和染色等因素对检测结果的影响,并验证改进后的方法的重复性和线性性.杆状病毒最佳染色条件:质量分数为0.1%的多聚甲醛固定病毒30min后,加入一定量的SYBR Green I在80℃下孵育10min.测量结果CV值为2.4%(n=8),R^2为0.9998.整个测量过程由原来终点稀释法的7~10d缩短到1h. 徐鹏 张佑红 杨益 彭继明 陈龙 靖志强 危威 马静 秦琴关键词:流式细胞术 杆状病毒 SYBR I 不同周期Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活的研究 被引量:2 2009年 为了研究不同周期Sf9细胞线粒体琥珀酸脱氢酶酶活的差异,首先使用TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法将Sf9细胞同步化于G1/S期,恢复生长分别得到S、G2/M、G1期的细胞,然后利用MTT法检测不同细胞周期的Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活,发现处于G1期的细胞酶活比S、G2/M期的细胞酶活大.跟踪细胞成长,在不同的时间点采样,以MTT法检测琥珀酸脱氢酶酶活,发现接种后48 h的Sf9细胞酶活最大,此时与其他时刻相比的Sf9细胞处于G1、S期所占的比例最大. 张佑红 陈龙 靖志强 郑伟 陈林 秦琴关键词:细胞周期 琥珀酸脱氢酶 MTT法