国家自然科学基金(81160335)
- 作品数：42 被引量：156H指数：7
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- 慢性氟中毒对大鼠神经细胞线粒体分裂蛋白Drp1表达的影响被引量：5
- 2013年
- 目的研究慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞线粒体分裂基因动态相关蛋白1（Drp1）表达的改变。方法将120只sD大鼠（1月龄、体重100—120g）以单纯随机法分为3组（对照组、低氟组和高氟组），每组40只，各组染毒剂量以饮水中加入氟剂量计算：分别为0、10和50mS／L；染毒3个月和6个月时，每组分别处死20只。采用免疫组织化学方法和免疫蛋白印迹法（western—blotting）检测线粒体分裂蛋白Drp1表达。结果3个月时，Drpl的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞个数发生了改变，与对照组[（36．3±5．8）个]相比较，低氟组[（34．7±4．1）个]的改变无统计学意义（t=1．5，P〉0．05），而高氟组[（45．0±d．7）个]表达增加（t=8．8，P〈0．05）；western—blotting法蛋白印迹平均灰度值也具有相同的改变，与对照组（0．59-t-O．03）相比，低氟组（0．62±0．03）和高氟组（0．71±0．02）的水平升高（t值分别为0．02、0．11，P值均〈0．05）。6个月时，Drpl的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞个数发生了改变，与对照组[（33．2±4．4）个]相比较，低氟组[（36．6±3．8）个]和高氟组[（39．4±4．2）个]升高（t值分别为3．5，6．3，P值均〈0．05）；western—blotting法蛋白印迹平均值也有改变，与对照组（0．65-t-O．06）相比，低氟组（0．804-0．09）和高氟组（0．764-0．08）的水平升高（t值分别为0．1、0．1，P值均〈0．05）。结论高剂量染氟可造成分裂基因Drp1表达改变，慢性氟中毒神经细胞损伤可能与线粒体分裂亢进有关。
- 楼迪栋张凯琳潘际刚秦双立刘燕斐于燕妮官志忠
- 关键词：氟中毒神经元
- 燃煤污染型氟中毒大鼠脑组织ERK/p-90RSK信号转导通路研究被引量：3
- 2013年
- 目的复制燃煤污染型氟中毒大鼠模型,检测其细胞外信号调节激酶/90ku核小体S6激酶(ERK/p-90RSK)信号通路的变化,探讨燃煤污染型氟中毒中枢神经系统损害的发病机制。方法以贵州省地方性燃煤污染型氟中毒重病区燃煤烘烤的玉米为主要饲料,复制不同摄氟剂量的慢性氟中毒大鼠模型,实验期为6个月。Western-blotting法检测ERK/p-90RSK信号通路相关磷酸化蛋白的表达水平。结果成功建造燃煤污染型氟中毒大鼠模型。检测结果显示,染氟组中大鼠脑组织中p-ERK1/2和p-90RSK蛋白的表达均高于对照组,且高剂量染氟组高于低剂量染氟组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论燃煤污染型氟中毒可引起大鼠脑组织中ERK信号转导通路的过度激活,而p-90RSK的激活可能是氟中毒大鼠的反馈性保护机制。
- 冉龙艳桂传枝黄昕官志忠
- 关键词：氟中毒脑组织细胞外信号调节激酶
- 慢性氟中毒大鼠脑组织中核因子E2相关因子2和胞质蛋白伴侣分子表达改变及其与氧化应激的关系被引量：2
- 2015年
- 目的观察慢性氟中毒大鼠脑组织中核因子E2相关因子2（NF—E2-related factor 2，Nrf2）和胞质蛋白伴，吕分子（Kelch-like ECH-associated protein-1，Keapl）表达水平的改变，探讨其在慢性氟中毒脑损伤机制中的作用。方法SD大鼠90只，雌雄各半，按体质量采用随机数字表法分为3组（每组30只，雌雄各半），即对照组、染氟组（饮水氟含量50mg／L）、维生素E拮抗组（饮水氟含量50mg／L，同时给予维生素E5mg／kg灌胃），实验周期为10个月。染氟结束后，观察各组大鼠氟斑牙情况并收集24h尿样，处死大鼠，心尖取血并取后肢股骨及脑组织。采用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及骨氟含量；实时荧光定量PCR及蛋白印迹方法分别检测脑组织中Nrf2和Keapl的mRNA和蛋白表达；生化方法测定超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙。各组间大鼠尿氟和骨氟比较差异均有统计学意义（F=6．87、182．87，P均〈0．05）。其中染氟组和维生素E拮抗组大鼠尿氟[（2．164-0．39）、（2．074-0．15）mg／L]和骨氟[（211．07±40．52）、（82．09±28．60）mg／kg]含量均高于对照组尿氟[（1．70±0．24）mg／L，P均〈0．05]和骨氟[（34．67±11．15）mg／kg，P均〈0．05]。各组间大鼠脑组织中Nrf2和Keapl的mRNA和蛋白表达水平、SOD活性、MDA含量比较差异均有统计学意义（F=654．33、432．87、447．45、398．88、68．34、68．34，P均〈0．05）。其中染氟组Nr￡2和KeaplmRNA[（320．18±6．83）％、（267．37±7．22）％]均高于对照组[（100．00±3．00）％、（100．00±2．75）％，P均〈0．05]，Nff2和Keapl蛋白表达水平[（283．28±6．89）％、（196．32±5．57）％]均高于对照组[（100．00±8．71）％、（100．00±9．23）％，P均〈0．05]；染氟组SOD活性[（22．10±2．10）μmol／kg]明显低于对照组[（35．05�
- 王娅董阳婷魏娜官志忠
- 关键词：氟中毒氧化应激
- 慢性氟中毒对大鼠神经细胞线粒体融合基因表达及线粒体形态的影响被引量：5
- 2013年
- 目的研究慢性氟中毒对大鼠神经细胞线粒体融合基因Mfnl表达及线粒体形态的影响。方法将60只1月龄清洁级SD大鼠以单纯随机法分为3组，每组20只，雌雄各半，分笼喂养。以饮水中加入氟剂量的不同，将大鼠分为对照组、低氟组、高氟组，染毒剂量分别为0、10和50mg／L，分别在饲养3、6个月后，观察氟斑牙程度。采用透射扫描电子显微镜观察线粒体形态。用western—blotting和免疫组织化学方法检测线粒体融合基因Mfnl表达。结果染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙，3个月时低氟组以I度氟斑牙为主（16只），高氟组发生I度、Ⅱ度氟斑牙分别为11、9只；6个月时低氟组发生I度、Ⅱ度、Ⅲ度氟斑牙分别为14、6、0只，高氟组为6、13、1只；对照组均未出现。低氟组、高氟组在3个月时尿氟分别为（3．30±1．18）、（5．10±0．35）mg／L（F=3．18，P〈0．05）；6个月时分别为（4．16±1．39）、（5．70±1．70）mg／L（F=3．17，P〈0．05）。3个月时，对照组大鼠大脑皮质神经细胞线粒体形态变化不明显，染氟组大鼠神经细胞线粒体均出现球状空泡状改变。Mfnl的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞数发生了改变，与对照组[（53．0±4．54）个]相比较，低氟组[（51．09±6．25）个]的改变无统计学意义（t=1．7，／9〉0．05），而高氟组[（59．71±5．64）个]增加，差异有统计学意义（t=2．1，P〈0．05）；weste．Flq-blotting法测得蛋白印迹平均吸光度值也具有相同的改变，与对照组（1．21±0．18）相比，低氟组（1．22±0．26）的改变无统计学意义（t=1．1，P〉0．05），高氟组（1．66±0．20）的水平升高，差异有统计学意义（t=2．1，P〈0．05）。6个月时低氟组、高氟组大鼠大脑皮质神经细胞线粒体出现嵴消失、球状空泡状改变，对照组无明显改变。Mfnl的蛋白免疫组织化学强阳性�
- 楼迪栋潘际刚张凯琳秦双立刘燕斐于燕妮官志忠
- 关键词：氟中毒
- 慢性氟中毒子代大鼠大脑胆碱能毒蕈碱受体的表达被引量：3
- 2015年
- 目的 观察饮水型慢性氟中毒子代大鼠学习记忆能力及大脑胆碱能毒蕈碱受体（Muscarinic acetylcholine receptors,mAChRs,简称M受体）mRNA和蛋白表达,探讨慢性氟中毒子代大鼠中枢神经系统损伤发生机制.方法 健康纯系SD大鼠40只,按体质量采用随机数字表法分为2组,每组20只,雌雄各半.对照组：自由饮用自来水（含氟量＜ 0.5 mg/L）;染氟组：自由饮用加入氟化钠（NaF）的自来水（含氟量为50.0 mg/L）.2组大鼠给予标准饲料（含氟量为6.2 mg/kg）喂养.6个月后2组大鼠分别交配,每组新生仔鼠由母乳喂养.采集出生第1、7、14、21、28天仔鼠脑组织（各时间点每组10只）,采用实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测M1 、M3受体mRNA及蛋白表达水平;采用Morris水迷宫方法检测出生第28天仔鼠行为学变化,并分析第28天仔鼠学习记忆能力与M1、M3受体蛋白表达的相关性.结果 染氟组第28天仔鼠逃避潜伏期时间[（35.61±9.00）s]较对照组显著延长[（8.46±3.09）s,P＜0.05],空间探索次数及逗留平台象限时间[（5.00±2.90）次,（16.66±2.79）s]较对照组明显减少[（15.17±3.66）次,（22.51±2.66）s,P均＜0.05].第1、7、14、21、28天染氟组仔鼠脑组织M1、M3受体mRNA、蛋白表达水平均低于对照组[对照组M1 mRNA：（100.00± 11.00）％、（100.00±17.57）％、（100.00±9.14）％、（100.00±7.52）％、（100.00±15.78）％;染氟组M1 mRNA：（20.47±8.07）％、（14.00±4.53）％、（16.57±7.62）％、（25.56±12.78）％、（16.27±4.82）％;对照组M3 mRNA：（100.00±16.30）％、（100.00±14.40）％、（100.00±7.20）％、（100.00±14.31）％、（100.00±13.16）％;染氟组M3 mRNA：（29.17±8.00）％、（12.77±2.22）％、（26.40±7.20）％、（15.74±3.55）％、（28.14±7.53）％;对照组M1蛋白：（100.00±2.24）％、（100.00±8.30）％、（100.00±4.61）％、（100.00±13.78）％、（100.00±11.72）％;染氟�
- 董阳婷王娅魏娜官志忠
- 关键词：氟化物
- 内质网应激在氟化物诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨内质网应激在氟化物诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制中的作用.方法 体外培养HepG2细胞24h,分别采用1、3、6、9 mmol/L氟化物（NaF）处理细胞24h,对照组细胞正常培养.流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;提取3 mmol/L NaF处理组细胞RNA和蛋白,实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹方法检测HepG2细胞中内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白GRP78、GRP94和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP） mRNA和蛋白的表达.结果 NaF处理HepG2细胞24 h,对照组及1、3、6、9 mmol/L NaF处理组细胞凋亡率分别为（6.25±1.27）％、（13.48±1.00）％、（24.08±1.88）％、（30.19±3.07）％、（37.72±4.43）％,各组间细胞凋亡率比较差异有统计学意义（F=65.828,P＜0.01）.3 mmol/L NaF处理HepG2细胞24 h,GRP78、GRP94和CHOP mRNA表达[（1 172.41±459.60）％、（946.95±635.85）％、（7 846.97±1 670.01）％]均高于对照组[（100.00±1.77）％、（100.00±2.08）％、（100.00±0.74）％,t=12.77、4.67、11.50,P均＜0.01];GRP78和CHOP蛋白表达[（159.99±67.59）％、（155.15±94.24）％]均高于对照组[（100.00±30.68）％、（100.00±41.44）％,t=-3.27、-1.99,P均＜0.05],GRP94蛋白表达[（46.40±41.46）％]低于对照组[（100.00±68.86）％,t=4.02,P＜0.05].结论 内质网应激反应参与了氟化物诱导HepG2细胞凋亡发生的病理过程.
- 刘咏妍禹文峰官志忠
- 关键词：应激氟化物细胞凋亡
- 凋亡诱导因子在慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡中的作用被引量：10
- 2015年
- 目的了解凋亡诱导因子（apoptosis—inducing factor，AIF）介导的非凋亡经典途径在慢性氟中毒大鼠大脑神经细胞凋亡过程中的作用。方法清洁级SD大鼠60只，体质量100～120g，按体质量采用随机数字表法分为对照组与染氟组，每组30只，雌雄各半，均饲以标准营养动物饲料（含氟量〈0．5mg／kg）。对照组自由饮用自来水（含氟量〈0．5mg／L）；染氟组自由饮用含氟水，氟含量[用氟化钠（NaF）配制]为50．0mg／L，复制慢性氟中毒大鼠模型。10个月后，采用磷酸盐缓冲液经心脏灌流处死动物，断头并取脑组织备用。采用免疫组织化学方法检测大脑皮质及海马AIF分布；蛋白免疫印迹方法检测脑组织中AIF、具有活性的已剪切的（cl）-caspase-3及cl—caspase-9的蛋白表达水平；流式细胞术检测大鼠脑组织细胞凋亡率。结果免疫组织化学结果：染氟组大鼠海马（CAI．CA2、CA3）及皮质顶叶神经细胞AIF阳性表达（7．50±2．17、9．00±1．63、8．00±0．82、10．24±1．80）明显高于对照组（5．18±1．66、6．27±1．42、6．36±1．96、6．96±2．62），差异有统计学意义（t=2．76、4．09、2．45和5．77，P均〈0．05）。蛋白免疫印迹结果：染氟组大鼠脑组织神经细胞线粒体内AIF的蛋白表达水平[（89．46±8．47）％]明显低于对照组[（100．00±7．12）％，t=3．16，P〈0．01]，而细胞核中AIF的蛋白表达水平[（112．80±7．10）％]明显高于对照组[（100．00±8．20）％，t=3．75，P〈0．01]；染氟组大鼠脑组织神经细胞cl—caspase-3、cl-caspase-9蛋白表达[海马与皮质分别为（132．14±18．66）％、（107．31±2．58）％。（121．33±14．86）％、（112．97±7．97）％]明显高于对照组[（100．00±11．99）％、（100．00±3．74）％，（100．00±16．87）％、（100．00±8．04）％，t=3．55、3．94、2．32、2．81，P〈0．01或〈0．05]。�
- 魏露莎禹文峰詹赞琳周冰峰吴忠琴官志忠
- 关键词：氟中毒凋亡诱导因子细胞凋亡
- 继续开展地方性氟中毒的研究和防治被引量：25
- 2012年
- 目前，随着我国在地方性氟中毒（简称地氟病）病区采取改水、改灶、改变饮茶方式等系列降氟措施和对病区群众进行健康教育、提高病区经济水平等综合防治工作的全面开展．地氟病病情得到较大程度的控制，病区人群健康状况得到极大改善[”。尽管防治工作已经取得了很大的成绩，但要完成有关地方病“十二五”规划中提出的“基本消除地氟病危害”的目标。任务仍然十分艰巨。
- 官志忠刘艳洁
- 关键词：氟化物中毒地方病
- 蛋白激酶Cβ抑制剂LY333531对氟诱导人神经母瘤细胞SH—SY5Y氧化损伤及凋亡的影响
- 2017年
- 目的探讨蛋白激酶Cβ（protein kinase Cβ，PKCβ）抑制剂LY333531对氟诱导人神经母瘤细胞SH—SY5Y氧化损伤及凋亡的影响。方法建立氟中毒SH—SY5Y细胞模型，分为对照组[0．0mmol／L氟化钠（NaF）、0．0μmol／LLY333531]、染氟组（0．5mmol／L NaF、0．0μmol／L LY333531）、PKC13抑制组（0．5mmol／L NaF、0．2μmol／L LY333531）。n=3。流式细胞仪检测各组作用48h后细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）及细胞凋亡率，荧光探针法检测线粒体膜电位。结果与对照组[（3．32±0．29）×10^3，0．60±0．09，（7．58±1．20）％]比较，染氟组ROS水平[（5．99±0．32）×10^3]升高，线粒体膜电位（0．28±0．06）降低，细胞凋亡率[（18．00±2．32）％]增加（P均〈0．05）；与染氟组比较，PKCβ抑制组ROS水平[（5．12±0．25）×10^3]降低，线粒体膜电位（0．42±0．03）升高，细胞凋亡率[（11．79±0．70）％]减少（P均〈0．05）。结论过量氟会导致细胞发生氧化损伤及凋亡。而PKCβ抑制剂LY333531可能对氟诱导的细胞氧化损伤及凋亡有一定的保护作用。
- 邓成敏赵亮谭龙春官志忠
- 关键词：氟活性氧细胞凋亡
- 慢性氟中毒大鼠大脑和血清氧化应激水平改变及维生素E的拮抗作用被引量：6
- 2016年
- 目的观察慢性氟中毒大鼠大脑及血清氧化应激水平改变及维生素E（VitaminE，VE）的拮抗作用，探讨慢性氟中毒脑损伤机制。方法健康纯系SD大鼠30只，按体质量采用随机数字表法分为3组，每组10只，雌雄各半。对照组自由饮用自来水，含氟量〈0．5mg／L；染氟组饮水中加入氟化钠，含氟量为50．0mg／L；染氟-VE拮抗组饮水含氟量为50．0mg／L，同时给予VE50．0mg／kg灌胃，每天1次。各组大鼠均给予标准饲料，含氟量6．2mg／kg。实验周期为10个月，处死大鼠，氟离子选择电极法测定骨氟含量；取脑组织和血清，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性、比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH．Px）活性、硫代巴比妥酸荧光法测定丙二醛（MDA）含量以及比色法测定脑组织匀浆中羟自由基（OH-）、过氧化氢（H：02）、超氧阴离子自由基（咙）水平。结果染氟组大鼠骨氟含量明显高于对照组[（211．07±48．52）比（33．40±9．26）mg／kg，P〈0．01]。染氟组大鼠脑组织中SOD及GSH-P）【活性[（20．10±1．98）kU／g、（28．70±19．35）kU／L]均低于对照组[（37．05±3．13）kU／g、（59．63±12．83）kU／L，P均〈0．01]，而染氟．VE拮抗组SOD活性[（26．27±1．74）kU／g]高于染氟组（P〈0．01）；染氟组大鼠血清SOD及GSH—Px活性[（11．55±1．75）kU／L、（79．50±19．18）U／L]均低于对照组[（20．79±2．43）kU／L、（170．00±14．68）U／L，P均〈0．01]，而染氟一VE拮抗组SOD活性[（17．23±0．68）kU／L]高于染氟组（P〈0．01）；染氟组大鼠脑组织及血清MDA含量[（8．84±0．69）μmol／L、（1．46±0．11）nmol／L]均高于对照组[（1．27±0．74）μmol／L、（0．834-0．10）nmolL，P均〈0．01]，而染氟．VE拮抗组MDA含量[（4．51±1．13）μmol／L、（1．29±0．02）nmol／L]均低于染氟组（P均〈0．01）；染氟组
- 董阳婷王娅魏娜官志忠
- 关键词：氟中毒氧化应激维生素E
