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血红素氧合酶-1基因转染对大鼠心肌缺血／再灌注损伤诱导心肌细胞凋亡的影响被引量：4: 2009年; 目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素氧合酶-1（rHO—1）基因转染对心肌缺血／再灌注（I／R）损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法95只体重225～250g的雄性SD大鼠随机分为假手术组（SO组，n-8）、生理盐水组（NS组，n=29）、rAAV-荧光蛋白组（rAAV—EGFP组，n=29）及rAAV—rHO-1组n=29）。NS组、rAAV—EGFP组和rAAV—rHO-1组分别于大鼠左心室前后壁共取4点分别注入生理盐水、rAAv—EGFP或rAAV—rHO-1病毒液共600μl。在基因转染后3个月，各组处死3只大鼠，取注射部位心肌，荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达并计算转染率；用免疫组化染色和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测HO-1的蛋白和mRNA表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min、再灌注120min建立心肌I／R模型；成模后处死大鼠测定其心肌梗死面积及心肌细胞凋亡指数（AI），光镜下观察心肌组织病理学改变。结果荧光显微镜下仅rAAV—EGFP组可见心肌有荧光蛋白表达，转染率为（53．54±2．0）％。与SO组比较，NS组、rAAV—EGFP组和rAAV—rHO-1组AI增加（P均〈0．01）；与NS组和rAAV—EGFP组比较，rAAV—rHO-1组HO—1的蛋白及mRNA表达增加，心肌梗死面积减小，AI减少（P均〈0．01）；NS组及rAAV—EGFP组心肌组织病理学损伤较SO组和rAAV—rHO-1组为重。NS组与rAAV—EGFP组间上述指标比较无统计学意义。结论rAAV介导的rHO-1基因转染大鼠心肌细胞后，能够显著减少心肌细胞凋亡，从而减轻心肌I／R损伤。; 李娜王焱林王成天何祥虎代乐; 关键词：血红素氧合酶心肌基因转染腺病毒科

大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响被引量：6: 2008年; 目的观察重组腺相关病毒介导大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法雄性sD大鼠30只随机分成3组，对照组（C组，n=6），缺血再灌注组（I／R组，n=12），腺相关病毒介导血红素加氧酶-1基因组（A-r组，n=12）。基因转染3个月后，建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型，C组持续灌注100min，其他各组均平衡15rain，停灌40min与再灌注45min，记录冠脉流量（CF），测定冠脉流出液肌酸激酶（CK）活性，测定再灌注后45min时的心肌心肌组织超氧化物岐化酶（SOD）活性活性及丙二醛（MDA）含量，同时取每组大鼠心肌检测梗死面积、心肌细胞凋亡率以及心肌组织bax、bcl-2蛋白表达量。结果离体心肌Langendorff灌注后，与IYR组比较，A-r组在复灌后冠脉流出液CK活性降低（P〈0．01），复灌后45min后心肌MDA含量降低（P〈O．01），SOD活性增高（P〈0．01），梗死面积较小（P〈0．01），心肌组织bax表达量、心肌细胞凋亡率均显著下降，心肌组织bcl-2表达量明显增加（P〈0．01）。结论重组腺相关病毒血红素加氧酶1基因转染心肌后，可抑制离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和增强心肌抗氧化能力。对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有显著保护作用。; 颜学滔王焱林王成天何祥虎周立文; 关键词：基因转染血红素加氧酶缺血再灌注

大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响被引量：5: 2007年; 目的评价重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素加氧酶-1（rHO-1）基因转染在大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法健康雄性SD大鼠81只，体重220～280g，随机分为4组：假手术组（SH组，n=9）、生理盐水组（NS组，n=24）、重组腺相关病毒-荧光蛋白组（rAAV—EGFP组，n=24）和重组腺相关病毒-HO-1组（rAAV-HO-1组，n=24）。NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-HO-1组分别心肌注射600μl生理盐水、rAAV-EGFP（1．5×10^11v．g．）或rAAV-HO-1（1．5×10^11v．g．）。在基因转染后3个月，NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-HO-1组各处死3只大鼠，取注射部位心肌，通过测定心肌细胞荧光蛋白的表达，计算转染率，并通过免疫组化染色和RT-PCR法检测HO-1蛋白和HO-1 mRNA的表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min，再灌注120min的方法建立心肌缺血再灌注模型；再灌注120min后，处死大鼠，测定心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果心肌细胞转染率为（53．5±2．0）％。与NS组比较，rAAV-HO-1组HO-1蛋白及HO-1 mRNA表达增加（P〈0．01）；与rAAV-EGFP组比较，rAAV-HO-1组HO-1蛋白及HO-1 mRNA表达增加（P〈0．01）；与SH组比较，NS组和rAAV-EGFP组SOD活性下降，MDA含量升高（P〈0．01）；与NS组和rAAV-EGFP组比较，rAAV-HO-1组SOD活性升高，MDA含量降低（P〈0.01）。NS组及rAAV-EGFP组心肌细胞超微结构损伤较SH组和rAAV-HO-1组重。结论腺相关病毒介导的血红素加氧酶-1基因转染大鼠心肌细胞后，可减轻心肌缺血再灌注损伤，其机制与抗氧化有关。; 王成夭代乐王焱林何祥虎李娜; 关键词：心肌再灌注损伤腺病毒科

大鼠血红素加氧酶-1基因转染对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎性因子的影响: 2007年; 目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素加氧酶-1（HO-1）基因转染对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎性因子的影响。方法雄性SD大鼠93只，体重225．275g，随机分为4组：假手术组（SH组，n=12）、生理盐水组（NS组，n=27）、重组腺相关病毒．荧光蛋白组（rAAv-EGFP组。n=27）及重组腺相关病毒．血红素加氧酶-1组（rAAV-rHO-1组，n=27）。NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-rHO-1组分别于左心室前后壁共取4点注入600μl生理盐水、rAAV-EGFP或rAAV-HO-1病毒液。在基因转染后3个月，通过RT-PCR和Westernblot法检测HO-1mRNA和蛋白的表达，荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min、再灌注120min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注模型，再灌注120min后，处死大鼠，测定心肌梗死面积及血清TNF-α、IL-6水平，电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果rAAV-rHO-1组HO-1表达明显高于NS组和rAAV-EGFP组（P〈0．01），仅rAAV-EGFP组心肌观察到荧光蛋白的表达；与SH组比较，NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-rHO-1组心肌梗死面积增加，血清TNF-α、IL-6水平明显升高（P〈0．05），心肌结构紊乱；与NS组和rAAV-EGFP组比较，rAAV-rHO-1组心肌梗死面积减少（P〈0．01），血清TNF-α、IL-6水平明显降低（P〈0．05），心肌结构破坏程度较轻。结论重组腺相关病毒介导大鼠血红素加氧酶-1基因转染大鼠心肌细胞后，降低炎性因子的产生，从而减轻心肌缺血再灌注损伤。; 何祥虎王焱林王成夭吴小兵代乐李娜; 关键词：心肌再灌注损伤转染腺病毒科

携带血红素加氧酶1基因的重组腺相关病毒的制备被引量：4: 2007年; 目的:制备携带大鼠血红素加氧酶1(rHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)。方法:通过RT-PCR的方法,从大鼠脾脏组织中扩增rHO-1基因,克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV中构建重组质粒pSNAV-rHO-1,通过酶切和测序鉴定。利用Lipofectamine将pSNAV-rHO-1转染BHK-21细胞,G418筛选得到表达外源基因的细胞系BHK/rHO-1。用具有能表达Rap和Cap及包装重组AAV功能的一种重组单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2分别感染这株细胞系后收获并纯化病毒,DNA斑点杂交检测重组病毒滴度。结果:扩增了rHO-1基因,测序证实与GenBank中的一致,病毒滴度为1.5×1015v.g/L。结论:成功获得了高滴度、高纯度的重组AAV-rHO-1,这为以后心血管系统疾病的基因治疗研究奠定了基础。; 何祥虎王焱林王成夭吴小兵代乐李娜; 关键词：血红素加氧酶1 腺相关病毒斑点杂交

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湖北省自然科学基金(2004ABA162)

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