江苏省中医药管理局计划项目(HZ07089)
- 作品数：9 被引量：51H指数：6
- 相关作者：孟祥奇姜宏孙书龙黄桂成汤晓晨更多>>
- 相关机构：南京中医药大学苏州市中医医院苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省中医药管理局计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达的影响被引量：11
- 2012年
- 目的：观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法：原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）、蛋白多糖基因（ACAN）的mRNA表达。结果：黄芪甲苷浓度为25~75mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24~72h时,软骨细胞Col Ⅱ和ACAN mRNA的表达量均较对照组显著增加。结论：黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,促进软骨细胞ColⅡ及ACAN mRNA的表达可能是其作用机制之一。
- 孟祥奇黄桂成惠礽华姜宏孙书龙陈咏真曹莉
- 关键词：膝骨关节炎黄芪甲苷关节软骨细胞蛋白多糖
- 祛痰除湿剂对离体培养的骨关节炎患者膝关节软骨细胞TNF-α、IL-1、IL-6 mRNA表达的影响被引量：12
- 2012年
- 目的探讨祛痰除湿剂在骨关节炎治疗中的作用及机制。方法取人膝关节软骨,将软骨细胞分离传代后取第三代细胞,分为A、B、C、D、E、F、G组,分别加用DMEM、5%祛痰除湿剂血清、5%NS血清、10%祛痰除湿剂血清、10%NS血清、20%祛痰除湿剂血清、20%NS血清培养;分别于4、8、24、48、72 h五个时间点采用Real Time-PCR法检测IL-1、IL-6、TNF-αmRNA表达。结果 B、D、F组IL-1、IL-6、TNF-αmRNA表达均降低,以D组为著,IL-1、IL-6、TNF-αmRNA分别于10%祛痰除湿剂含药血清作用8、24、48 h后降至最低。结论 10%祛痰除湿剂含药血清可用于骨关节炎的治疗,其可能通过影响膝关节软骨中IL-1、IL-6、TNF-α及相关代谢酶mRNA表达而及降低炎症反应,延缓关节软骨细胞退变。
- 孟祥奇黄桂成
- 关键词：骨关节炎关节软骨细胞
- 化痰祛湿剂对兔膝骨性关节炎软骨及滑膜的影响被引量：6
- 2012年
- 目的：观察化痰祛湿剂膝痹康对兔实验性膝骨性关节炎模型关节软骨及滑膜病理学变化的影响。方法：健康家兔40只,体重2.8~3.2kg,随机分为模型组、膝痹康组（为本院制剂,批号050411,主要由制南星、制川乌、薏苡仁、刺五加、丹参、地龙等组成,含生药2.0g/mL的合剂,功效化痰祛湿、消肿止痛）、阳性药（美洛昔康）对照组、假手术对照组,每组家兔10只。模型组、膝痹康组、阳性药（美洛昔康）对照组家兔通过改良的Hulth法复制兔膝关节炎动物模型,假手术组仅切开膝关节表面的皮肤,膝痹康组、阳性药对照组家兔于造模成功后开始用药,连续用药8周,4组家兔于造模后全部处死,切除患侧胫骨全层关节软骨及滑膜进行肉眼、光镜组织学检查,并对关节软骨进行透射电镜检查。结果：显示模型组兔患侧关节软骨表面粗糙,变暗呈灰黄色,并有裂纹、糜烂及溃疡形成;滑膜存在不同程度增生、粘连,关节液量增多,且呈泡沫状、浑浊,Mankin＇s评分显著高于假手术对照组;膝痹康组关节软骨及滑膜虽未能恢复到正常状态,但Mankin＇s评分较模型组显著降低。结论：膝痹康可明显减轻膝骨性关节炎兔关节软骨及滑膜的病理损伤,对软骨及滑膜的退变有较好的延缓趋势。
- 孟祥奇惠礽华姜宏陈咏真曹莉
- 关键词：膝骨性关节炎造模方法
- 内固定术治疗复杂胫骨平台骨折临床观察被引量：2
- 2013年
- 目的:观察复杂胫骨平台骨折内固定治疗的临床效果。方法:对26例复杂胫骨平台骨折采用手术内固定治疗。结果:26例患者优15例,良8例,可2例,差1例,优良率为88.5%。结论:内固定术治疗复杂胫骨平台骨折是临床有效的方法,术中植骨可减少术后胫骨平台再次塌陷,早期屈膝及负重功能锻炼,可促进骨折愈合及功能恢复。
- 俞峰孙书龙汤晓晨姜宏
- 关键词：复杂胫骨平台骨折内固定术植骨术
- 黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-3mRNA表达的影响被引量：9
- 2012年
- 目的:研究黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-3mRNA表达的影响。方法:取膝骨关节炎患者膝关节软骨进行细胞培养,将培养的软骨细胞分离传代后取第3代细胞,通过HE染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定,并进行基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3免疫荧光染色。观察软骨细胞退变情况后将其分为6组,A组不进行干预;B组加入25 mmol.L-1黄芪甲苷;C组加入50 mmol.L-1黄芪甲苷;D组加入75 mmol.L-1黄芪甲苷;E组加入100 mmol.L-1黄芪甲苷;F组加入500 mmol.L-1黄芪甲苷。分别于培养开始后4 h、8 h、24 h、48 h、72 h 5个时间点,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组退变软骨细胞内基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3mRNA表达的情况。结果:①形态观察。原代细胞中梭形细胞和多角形细胞并存,细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜,细胞纤丝较长。HE染色细胞质为红色,胞膜呈蓝色;甲苯胺蓝染色细胞质和胞膜均呈深蓝色;Ⅱ型胶原染色阳性为绿色荧光,细胞核采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚复染,在不同波段荧光激发下,胞浆和胞膜可见清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光,证明培养细胞表达特征性基因Ⅱ型胶原,主要分布在胞浆和细胞膜上,证明所培养的细胞为软骨细胞。基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3免疫荧光染色可见清晰绿色荧光,软骨细胞以多角形多见。②基质金属蛋白酶-1mRNA表达。不同时间点间软骨细胞基质金属蛋白酶-1mRNA表达水平有差异(F=11.027,P=0.000);不同组间软骨细胞基质金属蛋白酶-1mRNA表达水平有差异(F=102.345,P=0.000),A组高于B组、C组、D组、E组(P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000),F组高于A组、B组、C组、D组、E组(P=0.009;P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000);时间因素和组间因素存在交互效应(F=8.258,P=0.000)。③�
- 孙书龙姜宏汤晓晨孟祥奇龚正丰王拥军莫文
- 关键词：软骨细胞黄芪甲苷基质金属蛋白酶1基质金属蛋白酶3
- 骨关节炎患者膝关节软骨细胞的离体培养及形态学特征观察被引量：1
- 2012年
- 目的建立膝关节患者关节软骨细胞体外培养体系,为其相关研究奠定基础。方法取15例人工膝关节置换术患者的软骨组织,采用组织原代培养法获得膝关节软骨细胞,传代培养。倒置相差显微镜观察细胞形态,绘制生长曲线,苏木素伊红染色、甲苯胺蓝染色及Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、X型胶原、MMP-1、MMP-13、TNF-α免疫荧光染色对细胞进行鉴定。结果原代培养的人软骨细胞大量呈梭形、短梭形,少部分呈多角形,传代3次后出现树突生长细胞。形态学、免疫荧光染色显示细胞培养3代以内可保持表型稳定,多数软骨细胞维持梭形、短梭形,核为圆形或椭圆形。苏木精伊红阳性染色为细胞核呈紫蓝色,软骨细胞基质呈红色,周围胞浆呈紫红色、阿利新蓝染色后,胞质和胞膜呈深蓝色、Ⅱ型胶原免疫荧光染色可见胞质和胞膜清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光。结论成功建立了的软骨细胞分离、培养体系,且3代以内细胞生长良好。
- 孟祥奇黄桂成
- 关键词：关节软骨软骨细胞细胞分离
- 黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨VEGF表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:研究黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨VEGF表达的影响。方法:取人手术后的退变膝关节软骨,进行细胞培养,将培养的软骨细胞分离传代后,取第三代细胞,通过HE、Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定,并进行VEGF免疫荧光染色。观察软骨细胞退变情况后分为6组(A组:软骨细胞+DMEM对照组;B组:软骨细胞+25mmol/L黄芪甲苷;C组:软骨细胞+50 mmol/L黄芪甲苷;D组:软骨细胞+75 mmol/L黄芪甲苷;E组:软骨细胞+100mmol/L黄芪甲苷;F组:软骨细胞+500 mmol/L黄芪甲苷),取4 h、8 h、24 h、48 h、72 h采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测各组退变软骨内VEGF表达mRN A的表达情况。结果:培养的细胞为退变的软骨细胞;实时荧光定量PCR结果显示,不同浓度黄芪甲苷有上调退变膝关节软骨细胞VEGF的作用,且75 mmol/L黄芪甲苷在48 h时上调作用最好;在24 h、48 h、72 h不同浓度(50～100 mmol/l)黄芪甲苷膝关节软骨细胞VEGF表达量高于对照组(F=21.304,P<0.001)。结论:黄芪甲苷可通过调节退变软骨细胞合成VEGF延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变。
- 汤晓晨俞峰孙书龙姜宏龚正丰王拥军
- 关键词：膝骨关节炎退变黄芪甲苷软骨细胞
- 人骨关节炎退变软骨组织的细胞体外培养及形态特征观察被引量：6
- 2011年
- 目的探索人骨关节炎(OA)退变软骨细胞的原代培养方法并观察其形态学特征及传代特点。方法采用组织块法培养,待原代细胞长满皿底,用2.5 g/L的胰蛋白酶溶液对细胞进行消化,传代爬片10 d,用4%的多聚甲醛固定15 min,进行HE、甲苯胺蓝、Ⅰ型胶原免疫荧光、Ⅱ型胶原免疫荧光、Ⅹ型胶原免疫荧光染色观察。结果原代培养2周左右可见少量细胞散在分布于组织块周围,3周出现细胞自融,4～5周基本长满皿底,观察发现软骨细胞大多呈梭形或短梭形,少部分呈多角形,细胞核为圆形或椭圆形,偏于细胞的一侧而贴近细胞膜;Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原免疫荧光均有一定的表达,Ⅹ型胶原免疫荧光表达较高。结论通过组织块细胞培养法能获得一定数量的退变软骨细胞,可成功地进行传代及形态特征观察,证明退变软骨组织细胞主要为成纤维样软骨细胞及肥大软骨样细胞。
- 孙书龙孟祥奇汤晓晨李具宝周泉赵永见莫文姜宏
- 关键词：骨关节炎软骨细胞
- 黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞MMP-1和MMP-3 mRNA表达的影响被引量：9
- 2012年
- 目的：观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的金属蛋白酶-1和金属蛋白酶-3mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法：原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中金属蛋白酶-1（MMP-1）和金属蛋白酶-3（MMP-3）的mRNA表达。结果：黄芪甲苷浓度为25~100mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24-72h时,软骨细胞MMP-1 mRNA的表达量与对照组比较显著降低。黄芪甲苷浓度为50~100mmol/L,作用于退变关节软骨细胞48~72h时,软骨细胞MMP-3 mRNA的表达量显著低于对照组。结论：黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,抑制软骨细胞MMP-1和MMP-3mRNA的表达可能是其作用机制之一。
- 孟祥奇黄桂成惠礽华姜宏陈咏真曹莉
- 关键词：膝骨关节炎黄芪甲苷关节软骨细胞金属蛋白酶
