江苏省高校自然科学研究项目(Q2134605)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：姚辉华顾永平王守立邓敏孙茂民更多>>
- 相关机构：苏州大学附属第二医院苏州大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂质体介导TGF-β1 shRNA转染的方法被引量：4
- 2008年
- 目的探讨脂质体介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)在人肿瘤细胞株的转入效率,为研究TGF-β1信号转导在肿瘤微环境中的作用机制提供方法依据。方法化学合成TGF-β1小干扰RNA(siRNA),与脂质体转染介质混合制备转染复合物(Lip-shRNA),处理细胞24h后用流式细胞术(FCM)及人工计数法测定RD细胞的转入率;免疫荧光技术检测细胞TGF-β1蛋白表达水平。结果荧光显微镜观察硫代磷酸化修饰的寡核苷酸转入4h后,shRNA主要定位在细胞浆,8h后细胞核中有较多的shRNA;FCM测得转入细胞转入率与Lip-shRNA复合物呈剂量依赖关系,人工测得shRNA的转入率与转入复合物在低剂量呈剂量依赖关系,但在高剂量时增高不明显。转入6d后各组细胞TGF-β1蛋白表达量较转入3d时明显减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂质体介导的TGF-β1shRNA在常见肿瘤细胞株中的转入效率与寡核苷酸的稳定性、Lip-shRNA复合物剂量、转入时间密切相关,该转染技术可以作为RNA干扰手段研究TGF-β1信号转导的病理学机制。
- 王守立姚辉华董亮邓敏顾永平孙茂民
- 关键词：RNA干扰TGF-Β1肿瘤微环境
- 转化生长因子-β1反义寡核苷酸对人横纹肌肉瘤细胞RD增殖的影响
- 2007年
- 目的研究转化生长因子(TGF)-β1反义寡核苷酸(ASON)对人胚胎性横纹肌肉瘤细胞系RD增殖的影响。方法采用反义寡核苷酸技术,以阳离子脂质体为载体,将人工合成的TGF-β1 ASON转染RD细胞,阻碍内源性TGF-β1/Smad信号的转导,以未转染的RD细胞组作对照。免疫荧光技术检测RD细胞TGF-β1蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐实验(MTT)检测RD细胞的增殖情况;流式细胞术(FCM)检测细胞周期。结果转染4 d后RD细胞TGF-β1蛋白表达量较转入2 d时明显减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);RD细胞活力明显降低,合成期(S期)细胞减少。结论TGF-β1 ASON可有效阻碍TGF-β1/Smad信号通路,在一定程度上可促进RD细胞退出细胞周期,并抑制RD细胞增殖。
- 王守立李世刚顾永平姚辉华秦正红
- 关键词：转化生长因子Β1横纹肌肉瘤反义寡核苷酸技术
