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大豆种子特异性启动子的克隆及功能分析被引量：19: 2009年; 【目的】从大豆中克隆得到β-伴球蛋白α亚基基因的启动子序列7αP,并对其进行功能分析。【方法】利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离β-伴球蛋白α亚基基因启动子序列7αP,将其与GUS基因融合,构建种子特异性表达载体p7αP-GUS,通过根癌农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89,对再生植株进行PCR、Southern blot检测和GUS组织化学分析。【结果】序列分析表明,7αP长度为1 382 bp,其中含有多种种子特异性启动子的序列元件,如RY重复序列元件、E-box、SEF1-motif、SEF4-motif(、CA)n、Dc3启动子结合因子和ACGT序列元件及一些诱导物应答元件。转基因植株的PCR和Southern blot结果显示,成功地获得了转基因阳性植株;GUS活性检测表明,仅能在种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶等其他组织中均未检测到GUS活性。【结论】大豆β-伴球蛋白α亚基基因上游1 382 bp片段具有种子特异性启动子功能,7αP为种子特异性启动子。; 付永平周海涛王丕武; 关键词：大豆功能分析 GUS染色烟草

大豆抗营养因子及其消除方法的研究进展被引量：2: 2009年; 大豆中含有胰蛋白酶抑制因子和脂肪氧化酶等多种抗营养因子,它们直接影响大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性,降低了大豆的利用率。本文综述了胰蛋白酶抑制剂和脂肪氧化酶的抗营养作用以及消除方法的研究进展。; 付永平周海涛宋冰马建王丕武; 关键词：胰蛋白酶抑制剂脂肪氧化酶抗营养作用

大豆根部特异性启动子的克隆及功能分析被引量：7: 2009年; 利用PCR技术从大豆品种吉农17基因组DNA中分离得到大豆根部特异性启动子片段RSP,长度约为2.5kb。序列分析表明RSP与报道序列同源性达97%以上。将其与GUS基因融合,构建植物表达载体pRSP-GUS后,转化到EHA105根癌农杆菌中,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89。转基因植株的GUS活性检测表明,仅能在根中检测到GUS活性,而在茎、叶和种子等其它组织中都未检测到GUS活性,证实RSP片段具有根部特异性表达功能。; 王丹王丕武付永平厉志; 关键词：大豆功能分析 GUS染色

应用重组PCR技术构建大豆脂肪氧化酶基因RNA干扰表达载体被引量：11: 2008年; RNA干扰是近年来生物技术领域新兴的研究热点之一。在作物的研究中,RNA干扰被认为在作物品质改良中具有重要的应用价值,并已在水稻、小麦、玉米等作物中得到成功应用,但在大豆的研究中尚鲜有报道。在研究植物RNA干扰的实验中,构建相应的RNA干扰表达载体是常用手段,但传统构建方法较费时费力。重组PCR是一种利用重叠延伸的方法进行高效和快速的体外基因片段拼接的PCR技术。研究将重组PCR技术应用于构建大豆脂肪氧化酶基因ihpRNA干扰表达载体,一方面探索一条更简便、快捷、适应范围更广泛的大豆基因RNA干扰表达载体构建方法,另一方面所构建的载体为进一步研究RNA干扰在大豆脂肪氧化酶改良中的应用奠定了基础。结果显示应用重组PCR技术构建大豆脂肪氧化酶基因RNA干扰表达载体是可行的,相比与常规方法此方法更简便、快捷、效率更高。; 马建厉志刘艺苓王丕武; 关键词：重组PCR RNA干扰脂肪氧化酶

大豆C_2H_2型锌指蛋白基因SCTF-1的克隆及功能分析被引量：11: 2012年; 锌指蛋白是一类具有手指型结构的蛋白质,其中一些锌指蛋白是转录因子,对真核生物的生长发育及非生物逆境胁迫的耐受能力都有着重要作用。文章从大豆(Glycine max(L.)Merr.)中克隆了一个新的C2H2型锌指蛋白基因SCTF-1(GenBank登录号:JQ692081),该基因包含一个699 bp的开放阅读框,编码233个氨基酸,无内含子,有两个典型的C2H2型锌指结构。锌指结构中有植物锌指蛋白特有的保守氨基酸序列QALGGH。经软件预测分析,其等电点pI=8.33,分子量24.9 kDa。农杆菌介导的洋葱表皮细胞GFP瞬时表达实验结果表明,SCTF-1蛋白能够定位到细胞核中。通过RT-PCR检测发现该基因在大豆叶和花中的表达量较高,在茎和根的表达量相对较低。在对大豆幼苗的低温胁迫中,SCTF-1基因的表达量明显增加。将SCTF-1基因转入烟草(Nicotiana tabacum L.)中,发现SCTF-1基因的过量表达能够明显提高转基因烟草的耐冷能力。; 宋冰王丕武付永平范旭红夏海峰高玮洪洋王贺张卓马建; 关键词：大豆锌指蛋白亚细胞定位

大豆杂交种及其亲本苗期叶片基因差异表达与杂种优势的关系被引量：1: 2010年; 【目的】通过基因差异表达分析揭示大豆杂种优势产生的原因,为探明大豆杂种优势的分子机理提供理论基础。【方法】采用4×5 NCⅡ设计,配制20个大豆杂交种,以大豆苗期叶片为试验材料,应用mRNA差异显示技术,分析杂交种及亲本之间的基因差异表达模式,并分析其与杂种优势的相关性。【结果】大豆杂交种和亲本之间存在着明显的基因差异表达,差异表达模式可分为单亲表达一致一型(110型)、单亲表达一致二型(011型)、双亲共沉默型(101型)、单亲表达沉默一型(100型)、单亲表达沉默二型(001型)和杂种特异表达类型(010型)6种,其中单亲表达一致一型所占比例最高(13.25%)。差异表达模式与杂种表现的相关分析结果显示,百粒质量与011型呈显著负相关,与101型呈显著正相关;节数、脂肪含量与100型呈显著正相关;差异表达模式与中亲优势(MPH)的相关分析结果显示,分枝数、单株荚数、单株粒数的MPH与110型呈显著负相关,单株粒质量的MPH与110型呈极显著负相关;差异表达模式与超亲优势(BPH)的相关分析结果显示,单株荚数的BPH与110型呈显著负相关,单株粒数和单株粒质量的BPH与110型、虫食粒率的BPH与101型均呈极显著负相关。【结论】大豆基因差异表达与杂种优势的形成存在一定程度的相关性。; 张君王丕武闫冬生杨祥波关淑艳马建姚丹孙丽芳; 关键词：大豆杂种优势 MRNA差异显示

大豆根部特异性启动子的克隆及功能分析: 根部特异性启动子(root specific promoter,RSP)是具有根部特异性表达功能的一类特异启动子。在采用分子生物学手段对农作物进行遗传改良的过程中,常希望插入的外源基因能够限定在特定的组织中表达,从而使植...; 王丹厉志王丕武; 文献传递

大豆种皮特异性启动子的克隆及功能分析被引量：3: 2010年; 采用PCR技术从大豆品种吉农17基因组DNA中分离得到大豆种皮特异性启动子片段SCSP,长度约为1268bp。序列分析表明SCSP与报道序列同源性达97%以上。将其与GUS基因融合,构建植物表达载体pSCSP-GUS后,转化到EHA105根癌农杆菌中,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89。转基因植株的GUS活性检测表明,仅能在种皮检测到GUS活性,而在茎、叶和花等其它组织中都未检测到GUS活性,证实SCSP片段具有种皮特异性表达功能。; 魏雯雯王丕武付永平张卓; 关键词：大豆功能分析 GUS染色

Reconstruction of a Food-grade Expression Vector in Lactococcus Lactis被引量：3: 2010年; [Objective]In order to improve expression vector of L.lactis at food grade and widen application range of original system.[Method] Taking pNZ8149 as basis,the promoter PnisA of pNZ8149 was inserted L.lactis MG1363 and SPusp45 of unknown secretory protein in downstream.Through PCR technology,specific primers were used to delete restriction sites between promoter sequence and signal peptide gene sequence and ensure better distance between SD sequence and start codon to construct secreting expression vector pNZS.The reporter gene gus was recombined into multiple cloning site of pNZS to construct pNZS-gus and L.lactis was transformed by electroporation.10 ng/ml nisin was used for induction culture,then culture solution was conducted GUS staining test.[Result]The new constructed L.lactis N3900/pNZS-gus system could express active GUS protein and GUS protein could be secreted out of cell.[Conclusion]The successful construction of this system lays foundation for secretion expression study of protein and oral vaccine research.; 马超王丕武付永平张卓刘宏禹; 关键词：GUS

含35S启动子的粟酒裂殖酵母表达载体的构建及功能鉴定被引量：3: 2011年; 利用PCR技术从植物表达载体pBI121上先后克隆出GUS基因和35S-GUS-NOS基因序列,分别构建粟酒裂殖酵母重组表达载体pESP-2-GUS和pESP-2-35S.GUS.NOS,并将它们转化到粟酒裂殖酵母菌体中。通过对不同液体培养基中两种转化子的不同启动子启动GUS基因表达产物的GUS染色分析与比较,证明连入的35S启动子能够替代pESP-2自身受维生素B1浓度调控的启动子,从而降低了培养基的成本,为今后工业上利用粟酒裂殖酵母发酵生产产品,提高经济效益,奠定了基础。; 王贺王丕武洪洋宋冰; 关键词：粟酒裂殖酵母 GUS染色

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国家教育部博士点基金(20070193005)

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