北京市自然科学基金(7012010)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 人甲状旁腺激素多肽抗体制备及纯化方法研究被引量：2
- 2006年
- 赵丹慧王娜张艳袁越李成文
- 关键词：人甲状旁腺激素抗体制备活性片段免疫活性基因工程表达
- 人甲状旁腺激素N端肽中一个含有B细胞新表位的hPTH^(13-27)片段的研究
- 2006年
- 目的研究并证明人甲状旁腺激素(hPTH)N端肽内的hPTH13-27片段是一个新的B细胞抗原表位。方法计算机辅助分析预测hPTH1-37和hPTH1-84多肽片段内hPTH13-27抗原表位的特征;制备大鼠抗hPTH13-27-KLH多克隆抗体;酶联免疫测定(ELISA)研究hPTH13-27抗原表位和抗体的免疫特征。结果蛋白质结构分析预测在hPTH13-27区域含有B细胞抗原表位。hPTH13-27单表位多克隆抗体制备成功。ELISA分析证明hPTH13-27片段含有B细胞抗原表位,与抗体的结合效果依次为:抗hPTH13-27抗体>抗hPTH1-84抗体>抗hPTH1-37抗体。hPTH13-27片段与固相板结合对免疫原性影响不大。抗hPTH13-27抗体与含hPTH13-27讲片段的多肽结合良好;与不含hPTH13-27片段的多肽无交叉反应。结论hPTH13-27可能是制备hPTH N端肽抗体的核心表位片段。
- 赵丹慧张艳王娜袁越王芊李成文
- 关键词：B细胞抗原表位ELISA
- ELISA法分析人甲状旁腺激素的抗原表位分布
- 2006年
- 目的分析人甲状旁腺激素(hPTH)的抗原表位分布,为制备表位特异性抗体和建立hPTH测定方法提供理论依据,为研究hPTH结构和生理功能间的关系提供理论基础。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA),研究多肽片段hPTH(1-4)、(1-10)、(1-34)、(1-37)、(13-27)、(24-37)、(44-68)、(54-84)及(1-84)与抗全段hPTH(1-84)和抗N端hPTH(1-37)抗体的反应,抗多肽片段hPTH(1-37)、(44-68)、(54-84)及(1-84)抗体与完整hPTH(1-84)抗原的反应,对hPTH尤其是其N端肽抗原表位进行分析。结果hPTH(1-34)、(1-37)、(13-27)与抗hPTH(1-84)及抗hPTH(1-37)抗体,hPTH(44-68)、(54-84)与抗hPTH(1-84)抗体,hPTH(24-37)与抗hPTH(1-37)抗体,以及抗hPTH(54-84)、抗hPTH(44-68)、抗hPTH(1-37)抗体与hPTH(1-84)之间均有较好结合。hPTH(1-4)、(1-10)与抗hPTH(1-37)抗体也呈现出结合梯度。结论在hPTH(1-4)、(1-10)、(1-34)、(1-37)、(13-27)、(24-37)、(44-68)和(54-84)内均存在抗原表位,其中hPTH(13-27)和(24-37)区域是制备特异抗体建立全段或N端hPTH检测方法的两个有价值的抗原表位。
- 王娜赵丹慧袁越李成文
- 关键词：甲状旁腺激素抗原表位ELISA
- MBS和戊二醛连接hPTH载体特异抗体及载体抗体的比较研究被引量：1
- 2007年
- 目的:比较间-马来酰亚胺苯甲酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)和戊二醛连接人甲状旁腺激素(hPTH)载体后抗体的产生效果。方法:MBS法和戊二醛一步法分别将hPTH(1-84)与载体牛血清白蛋白(BSA)连接后作为免疫原免疫家兔;间接ELISA法比较两组兔中特异性hPTH(1-84)抗体和BSA抗体的产生,并使用免疫吸收和亲和层析吸附清除BSA抗体,对清除情况进行比较。结果:MBS组抗hPTH(1-84)抗体效价总体上高于戊二醛组,抗载体BSA抗体效价低于戊二醛组;MBS组在同一时间hPTH(1-84)抗体效价高于BSA抗体,戊二醛组获取的抗血清中BSA抗体效价则明显高于hPTH(1-84)抗体。MBS组经亲和层析吸附BSA抗体被清除完全,戊二醛组经免疫吸收和亲和层析吸附仍有残留BSA抗体。结论:采用MBS法连接半抗原载体制备hPTH(1-84)抗体,降低了载体抗体的影响,提高了hPTH(1-84)抗体的特异性,可应用于hPTH药理作用和代谢途径等研究工作中。
- 王娜赵丹慧袁越李成文
- 关键词：甲状旁腺激素半抗原戊二醛
