国家自然科学基金(30871365)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：李桂源向波李小玲李文娟曾朝阳更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅医院中南大学湘雅二医院更多>>
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- TSC-22基因的研究进展被引量：1
- 2011年
- 转化生长因子β诱导基因22(transforming growth factor β-inducible gene 22,TSC-22)是一个候选的负性生长调控和肿瘤抑制基因。能与其他转录因子相结合,参与细胞生长、凋亡等重要生命活动调控,在多种肿瘤中低表达,可能与多种肿瘤的发生、发展有关。
- 谭世明李桂源
- 关键词：亮氨酸拉链转录因子抑瘤基因
- 鼻咽癌抑瘤基因NOR1第2外显子选择性剪切异构体在组织和细胞中的分布规律(英文)被引量：1
- 2011年
- 目的:研究NOR1基因全长及第2外显子选择性剪切异构体在人细胞系和组织中的分布规律以及NOR1蛋白全长及剪切异构体的亚细胞定位模式。方法:以人胎脑cDNA文库质粒为模板,PCR扩增NOR1基因开放阅读框(open reading frame,ORF),酶切后连接pCMV/myc载体。以pCMV/myc-NOR1(isoform 1)质粒为标准品,采用Real-time RT-PCR方法检测NOR1 mRNA在人胚胎组织和成人睾丸组织中的表达。用RT-PCR方法扩增NOR1基因第2外显子两侧序列片段,测序分析NOR1 isoform 1和isoform 2 mRNA在细胞和组织中的分布;PCR方法扩增细胞系NOR1第2外显子基因组序列,测序检测第2外显子gDNA序列。将pCMV/myc-NOR1(isoform 1)和pCMV/myc-NOR1(isoform 2)质粒转染细胞,采用免疫荧光方法观察两种异构体在细胞内定位模式。结果:从人胎脑cDNA文库克隆得到NOR1基因全长ORF(isoform 1)和遗漏第2外显子的剪切异构体(isoform 2)。Real-time RT-PCR检测发现成人睾丸组织NOR1 mRNA表达水平最高,胚胎鼻咽、气管、脑、肾组织有中等水平表达,其他组织表达较低。RT-PCR结合测序检测发现表明睾丸、鼻咽、气管、肾等16种组织仅表达isoform 2;而脑组织同时检测到NOR1 isoform 1和isoform 2 mRNA,以isoform 2为主。NP69,HNE1等细胞系仅表达遗漏第2外显子的isoform 2,所有检测的细胞系基因组DNA无第2外显子缺失。免疫荧光检测发现NOR1 isoform 1和isoform 2编码蛋白在细胞内定位模式相似。结论:克隆得到NOR1基因全长和遗漏第2外显子的剪切本。Isoform 2是NOR1基因在组织和细胞系中的主要表达形式,NOR1 iso-form 1仅表达于脑组织。第2外显子对NOR1蛋白的细胞内定位模式没有影响。
- 向波王卫易梅李文娟周鸣李小玲李桂源
- 关键词：鼻咽癌选择性剪切亚细胞定位
- 抗癌蛋白NOR1基因工程重组蛋白表达条件的优化和纯化被引量：2
- 2011年
- 目的:构建NOR1基因原核表达载体,并在大肠杆菌中原核表达NOR1重组蛋白,对其诱导条件进行优化,并纯化NOR1蛋白。方法:PCR扩增人NOR1基因全长开放阅读框,克隆入原核表达载体pET28b。重组质粒转化大肠杆菌,采用不同温度、不同抗生素浓度、不同IPTG浓度诱导NOR1蛋白表达。选择最佳条件大量诱导NOR1蛋白表达,采用Ni-IDE树脂纯化NOR1重组蛋白,并通过SDS-PAGE凝胶电泳检测重组蛋白的纯度。结果:成功构建了pET28b-NOR1基因原核表达载体,并转化E.coli Rosettablue(DE3)。利用IPTG诱导His-NOR1蛋白表达,结果发现IPTG浓度、温度、抗生素浓度均可影响NOR1重组蛋白的表达效率。0.25mmol/L IPTG即可诱导NOR1融合蛋白的表达,分子质量为43 kD;随着IPTG浓度提高,重组蛋白表达量增加。温度对NOR1蛋白原核表达有重要影响,低温条件(30℃)无法诱导NOR1蛋白表达。提高卡那霉素筛选浓度可以提高NOR1蛋白表达量。原核表达的NOR1重组蛋白绝大部分形成包涵体,采用6 mol/L盐酸胍溶解包涵体,通过Ni-IDE树脂纯化得到高纯度的His-NOR1重组蛋白。结论:构建了pET28b-NOR1原核表达载体。研究发现在37℃条件下,采用1 mmol/L IPTG,200μg/mL卡那霉素可以高效诱导NOR1蛋白表达。纯化得到高纯度的NOR1重组蛋白。
- 向波王理王卫李文娟易梅李小玲曾朝阳李桂源
- 关键词：鼻咽癌原核表达重组蛋白纯化
- CSPG4基因在鼻咽癌中的表达分析被引量：1
- 2012年
- 目的:研究硫酸软骨素多糖蛋白4(CSPG4)基因在鼻咽癌及对照组织中的表达。方法:采用实时荧光定量PCR测定CSPG4基因在4例正常鼻咽上皮和18例鼻咽癌组织(其中Ⅱ期6例,Ⅲ期5例,Ⅳ期7例)中的表达情况;通过构建包含92例对照和187例鼻咽癌的组织芯片,应用免疫组织化学检测CSPG4蛋白的表达和分布。结果:正常鼻咽上皮中CSPG4基因mRNA表达水平较低,在鼻咽癌中CSPG4表达上调且与临床分期呈正相关,差异具有统计学意义(P=0.017)。免疫组织化学结果表明鼻咽癌中CSPG4蛋白表达水平高于对照组,91.98%的鼻咽癌组织中CSPG4为强阳性表达,而对照组的强阳性率为76.09%(P=0.001)结论:CSPG4在鼻咽癌中随着临床进展表达逐渐上调,可能参与了鼻咽癌的发生发展,具体机制及临床应用前景值得进一步深入研究。
- 宋亚莉李小玲黄丽丽李俏孙梦熙张文玲石磊范松青龚朝建喻正源向波彭淑平熊炜阳剑波曾朝阳李桂源
- 关键词：鼻咽癌组织芯片
