国家自然科学基金(30570476)
- 作品数：11 被引量：27H指数：3
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- 抗体的选择——从传统免疫分析到蛋白质芯片被引量：3
- 2007年
- 吕林莉刘必成张春秀
- 关键词：蛋白质芯片免疫分析抗体
- 抗体芯片在慢性肾脏病患者尿中多种细胞因子同步检测中的初步应用被引量：17
- 2006年
- 目的应用抗体芯片技术检测慢性肾脏病(CKD)患者尿液中细胞因子的水平,并探讨其临床意义。方法研究对象共10例,7例为CKD患者,全部符合K／DOQI指南中CKD的诊断标准,并且有肾脏病理诊断。依据GFR水平以及CKD分期,将7例患者分为两组:I组: GFR≥80 ml·min-1·(1．73 m2)-1(CKD1—2期)共4例; Ⅱ组:GFR≤40 ml·min-1·(1．73 m2)-1 (CKD3—5期)共3例。另选取3例性别、年龄相匹配的健康人作为正常对照。应用Raybiotech人类细胞因子抗体芯片,同时检测各组尿液中20种细胞因子水平的变化。结果与正常对照组相比, CKD患者共有15种因子的水平发生了显著变化。单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、RENTES、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、血管内皮生长因子(VEGF)、E-选择素 (seletin)、Fas、细胞间黏附分子(ICAM)-1、白细胞介素(IL)-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、转化生长因子(TGF)-β和血小板源生长因子(PDGF)-BB的水平同正常对照组相比升高了2—5倍,其中尿MCP-1,RANTES,TIMP-1,TNF-α和VEGF的水平随着GFR的下降而进一步升高。VCAM-1 和PDGF-BB的水平同正常对照组相比有所下降。在芯片所包含的20种细胞因子中,MMP-9的水平变化尤其显著,同正常对照组相比,CKD I组是正常对照组的492．8倍,CKDⅡ组是正常对照组的198．7倍。结论首次应用抗体芯片技术,证实CKD患者尿液中细胞因子表达水平同正常对照组有明显差异,并且与疾病所处阶段有一定的关系。
- 张露刘必成王艳丽张晓良吕林莉刘殿阁
- 关键词：蛋白质阵列分析细胞因子类
- 慢性肾脏病生物标志物及其检测研究进展被引量：2
- 2009年
- 一、生物标志物的定义
生物标志物首先是在1989年作为医学主题词被提出来的，当时定义为“可测量和定量的生物学参数”。2001年，美国国立卫生研究院（NIH）对生物标志物的定义进行了规范，定义为通过客观检测和评价能够预示正常生理、病理过程或机体对药物治疗反应的所有生物学特性川。能够从患者身上检测到的任何参数都可以成为生物标志物，比如mRNA表达谱、各种蛋白质、蛋白质组、脂类、影像学检查或者电信号。
- 王丽梅吕林莉刘必成
- 关键词：生物标志物慢性肾脏病药物治疗反应蛋白质组生物学参数生物学特性
- 基于无细胞蛋白表达的蛋白质微阵列技术被引量：3
- 2010年
- 高密度蛋白质微阵列构建的主要瓶颈之一是蛋白质的来源和蛋白质在载体表面的稳定性问题。传统的蛋白质微阵列构建依赖于对大量蛋白的分别表达、纯化和固定,这种方法费时费力,且不易维持蛋白质的稳定性。无细胞蛋白表达技术在蛋白质微阵列构建中的应用,使得目标蛋白可以在载体表面直接从固定的DNA和RNA模板合成,克服了传统构建方法的局限。本文简要介绍无细胞蛋白表达的蛋白质微阵列技术及其应用研究进展。
- 吕林莉刘必成
- 关键词：蛋白质微阵列蛋白质组学蛋白质芯片生物标志物
- 构建抗体微阵列过程中抗体固定的策略被引量：2
- 2006年
- 抗体微阵列作为蛋白组学研究的一个技术平台,可以高通量并行检测多种蛋白质。由于抗体结构的特殊性,将抗体固定于固相载体表面已成为构建抗体微阵列构成中的关键步骤。本文就近年来用于构建抗体微阵列的几种抗体固定的方式及其优缺点进行综述。
- 张露刘必成
- 关键词：抗体
- 抗体芯片技术及在肾脏疾病研究中的应用进展
- 2010年
- 倪杰刘必成吕林莉
- 关键词：抗体芯片蛋白质组学肾脏病生物标记物
- 基于直接标记法尿微量白蛋白检测抗体微阵列的构建
- 2009年
- 目的探讨基于直接标记法的尿微量白蛋白检测抗体微阵列（也称抗体芯片）构建方法，并评价其技术可行性。方法通过玻片处理、活化、固定等程序构建白蛋白抗体芯片。摸索用生物素标记标准品白蛋白及尿液样本的最佳条件。经封闭后加入生物素标记的标准品白蛋白，孵育，洗涤后加入链酶亲和素-Cy3，再经过孵育、洗涤后，用共聚焦激光扫描仪获取荧光强度值。根据不同浓度标准品白蛋白的荧光信号强度值做出浓度-信号强度曲线，并评价其检测灵敏度、特异性、重复性。收集临床糖尿病患者尿液标本，对尿液样本同时行免疫比浊法和抗体芯片法检测白蛋白值。结果生物素标记标准品白蛋白和样本的最佳总蛋白／生物素质量比为2：1。根据标准品白蛋白所做出的标准曲线其R^2〉0．99；捕获抗体浓度为1g／L时，最低白蛋白检测浓度为0．0617mg／L。阵列内变异系数为3．35％～7．59％；阵列间变异系数为6．78％～9．22％。抗体芯片检测值与免疫比浊法检测值呈正相关（R^2=0．9199，P〈0．01）。结论成功构建基于直接标记法的抗体芯片，其具有简单、快速、高效、高灵敏度和重复性好等特点；具有开发应用于微量白蛋白尿大规模人群筛查的潜力。
- 王丽梅刘必成吕林莉朱颖蔡珂丹郑敏
- 关键词：白蛋白尿芯片分析技术抗体免疫比浊法
- 基于夹心免疫分析的抗体微阵列的构建
- 2008年
- 目的:建立一种基于夹心免疫分析的抗体微阵列构建的优化方法。方法:将MCP-1的捕获抗体点样于修饰后的玻片,标准抗原加样覆盖所点阵列,生物素标记抗体和链酶亲和素-cy3依次加样孵育,激光共聚焦扫描仪获取图象并进行数据分析。对捕获抗体浓度、封闭液种类、系统可重复性和定量检测能力、两种因子平行性检测对信号分析的影响及点样后玻片稳定性进行分析和评价。结果:随着捕获抗体浓度的升高,信号强度逐渐增加;2%BSA/PBS和5%酪蛋白可作为本系统的封闭液;所构建系统具有较好的可重复性(组内变异1.3%,组间变异8.7%)和定量分析能力(所建立的抗原浓度-相对信号强度标准曲线相关系数达0.9995);并实现了两因子的平行性分析和点样后玻片的稳定性。结论:确立了基于夹心免疫分析的抗体微阵列构建的优化方法,为进一步构建多因子定量检测抗体微阵列奠定了基础。
- 吕林莉刘必成朱颖陆祖宏
- 关键词：蛋白质芯片免疫分析
- 基于直接标记法抗体微阵列的初步构建被引量：1
- 2009年
- 目的:初步构建基于直接标记法的抗体微阵列,并评价其应用于临床的可能性。方法:选择白蛋白作为目标蛋白,通过琼脂糖铺片、玻片活化、机器点样、点样后固定等步骤构建抗体微阵列,经封闭非特异位点、标记抗原、加样后对白蛋白进行检测,对关键步骤——抗原标记进行最佳条件摸索,通过对临床标本的检测评价其潜在应用价值。结果:应用BCA蛋白定量试剂盒测定尿液样本总蛋白浓度做出的标准曲线,其R2均大于0.99;温度为37℃时抗原标记效果最佳;标记后抗原存放1周对信号的影响无统计学意义(P<0.01);本方法能够检测出临床检测为阴性的尿微量白蛋白浓度。结论:本研究构建了基于直接标记法的抗体微阵列,并对关键的抗原标记环节进行了最佳工作条件优化,有应用于临床检测的潜力。
- 王丽梅刘必成吕林莉郑敏
- 临床蛋白质组学研究中值得注意的问题
- 2008年
- 后基因组时代的到来使临床蛋白质组学成为各种疾病的研究热点。然而，由于研究过程中一些共识性规范的缺乏，研究设计缺乏合理性和科学性，尤其是在研究分组设计、样本量、样本处理、数据质量控制、统计学评价以及独立的结果验证等环节，导致研究结果难以充分解释或重复性较差。本文针对目前临床蛋白质组学研究存在的问题结合文献进行综述。
- 吕林莉王丽梅刘必成
- 关键词：临床蛋白质组学后基因组时代数据质量控制样本量
