国家自然科学基金(40406029)
- 作品数：10 被引量：89H指数：5
- 相关作者：曾润颖张金伟杨祥胜林曦赵晶更多>>
- 相关机构：国家海洋局第三海洋研究所厦门大学国家海洋局更多>>
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- 相关领域：生物学天文地球轻工技术与工程化学工程更多>>
- 南极产低温脂肪酶菌株Psychrobacter sp.7195的选育、发酵条件及酶学性质研究被引量：26
- 2006年
- 从南极普里兹湾深海沉积物中筛选到一株产低温脂肪酶的菌株7195,细菌学形态鉴定及16SrDNA序列分析表明该菌株属于嗜冷杆菌属(Psychrobacter)。生长特性研究表明该菌株属于耐冷菌,其最适生长温度范围为5～15°C,7195菌株能利用多种碳、氮源产酶。粗酶液经硫酸铵盐析、DEAEcellulose-52柱层析进行初步分离纯化后进行酶学性质的研究。该菌株所分泌的脂肪酶最适作用温度为30°C,最适pH值为9.0,对热敏感,60°C热处理10min剩余酶活为30%,是典型的低温酶。Ca2+、Mn2+、Cu2+对该酶有较为明显的激活作用,而Co2+、Zn2+、Hg2+、Rb2+、Cd2+、Fe3+、EDTA则能抑制酶活,此外该脂肪酶能在高浓度的SDS、CHAPS、TritonX-100、Tween80、Tween20等变性剂中表现出较好的稳定性。
- 张金伟曾润颖
- 关键词：低温酶碱性脂肪酶耐冷菌
- 南极耐冷Pseudomonas sp.7323低温脂肪酶的性质及基因克隆被引量：12
- 2007年
- 南极微生物是筛选低温酶的良好来源,但尚未得到充分的研究与开发.低温脂肪酶具有广阔的应用前景,其基因结构特征也具有重要的研究意义.本文对南极微生物开展了低温脂肪酶产生菌的筛选、基因克隆及特征分析.采用功能筛选的方法,从南极普里兹湾深海沉积物中获得一株产低温脂肪酶的菌株7323,其最适温度和最高生长温度分别为20℃和30℃,属于耐冷菌.16S rDNA序列分析表明,该菌属于假单胞菌属(Pseudomonas).通过设计引物扩增出的脂肪酶基因全长为1 854 bp,该基因编码一个由617氨基酸、分子量预计为64 466的蛋白质.氨基酸序列分析表明,该酶与Pseudomonassp.UB48的脂肪酶有89%的相似性,在催化区和C末端信号肽中存在高度保守的序列.纯化后的酶学性质研究表明,该脂肪酶的最适温度为35℃,最适pH值为9.0,为碱性低温酶.
- 王水琦曾润颖张金伟
- 关键词：耐冷菌假单胞菌低温脂肪酶
- 南极嗜冷假单胞菌7197的分离和无机焦磷酸酯酶（PPase）基因ppa的克隆被引量：1
- 2007年
- 从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株耐冷菌株7197。16S rDNA序列分析表明,该菌株属于假单胞菌属（Pseudomonas）。从该菌的全基因组DNA中克隆到编码无机焦磷酸酯酶（PPase）的ppa基因完整的开放阅读框（ORF）,其全长为531bp。该基因编码一个由176AA残基组成的分子量预计为19631 Da的PPase蛋白质,其氨基酸序列与Psy-chrobacter sp.273-4的PPase有97%的相似性,与Neisseria meningitidisZ2491的PPase有79%的相似性,与Mannheimia succiniciproducens MBEL55E的PPase有75%的相似性。
- 张金伟曾润颖
- 关键词：耐冷菌假单胞菌属
- 产复合酶菌株Pseudomonas sp．NJ197产酶发酵条件的研究被引量：5
- 2005年
- 从南极普利兹湾深海900m的沉积物中筛选到一株同时产多种低温复合酶的菌 株NJ197,作者对其进行碳源、氮源、无机盐、起始pH值、培养时间、接种量等发酵条 件的优化实验．实验结果证明,在以0．5％可溶性淀粉为碳源,以0．5％豆饼粉为氮 源,无机盐:0．424％NH4H2PO4、0．075％K2HPO4、0．02％MgSO4、0．5％CaCO3,起始 pH值8．5,接种36h种龄的种子10％,20℃、250r／min的条件下在旋转摇床中培养 72h,产复合酶菌株产脂肪酶和淀粉酶活性最高．最佳的生理条件下复合酶中的碱性 脂肪酶和淀粉酶的产量分别提高到22．4U／cm3和30．9U／cm3,该产复合酶菌株可以 作为诱变育种、基因工程菌改造的出发菌株,在洗涤和制革工业中有良好的应用前 景．
- 张金伟曾润颖
- 关键词：生物工程假单胞菌碱性脂肪酶碱性淀粉酶
- 南极中山站排污口土壤中微生物群落的DGGE分析被引量：7
- 2008年
- 以南极中山站排污口土壤为研究对象,提取样品中微生物宏基因组DNA,用变性梯度凝胶电泳(DGGE)对宏基因组DNA中的16SrRNA基因V3可变区进行分析,测定了31个不同条带所代表的序列.比较结果显示,排污口土壤样品与相同生境对照样品中的微生物类群组成均以CFB(Cytophaga-Flexibacteria-Bacteroides)类群和γ-变形菌纲(γ-Proteobacteria)为主,另外还有少量的α-,β-,δ-变形菌纲,和一些原核的藻类和革兰氏阳性细菌(G+).但在排污口土壤样品中检出了传染性微生物毛球菌属(Trichococcus)和狡诈菌属(Dolosigranulum),以及丰富的小球藻(Chlorella),说明污水的排放已经对该地微生物群落造成明显的影响.
- 林曦曾润颖
- 关键词：南极中山站排污口DGGE微生物群落
- 南极深海沉积物宏基因组DNA中低温脂肪酶基因的克隆、表达及性质分析被引量：23
- 2006年
- 从南极普利兹湾深海900米深的沉积物中提取获得宏基因组DNA,并通过设计引物,从中克隆到全长为948bp的低温脂肪酶(lip3)开放阅读框完整序列,该基因编码一个由315个氨基酸残基组成、预计分子质量为34.557ku酶蛋白(Lip3);氨基酸序列上的GFGNS(GXGXS)和G-N-S-M-G(GXSXG)在许多脂肪酶中有很高的保守性,它们是水解机制所必需的序列,也是丝氨酸水解酶中最保守的序列.构建了lip3基因重组表达载体,并在大肠杆菌中获得表达,采用镍离子亲和层析柱对表达的酶蛋白Lip3进行纯化,得到约35ku蛋白条带,酶学性质的分析表明,该酶的最适作用温度为25℃,在0℃时表现为最高活力的22%,最适pH值为8.0,对热敏感,35℃热处理60min剩余酶活为10%,以硝基苯棕榈酸酯为底物,Lip3的酶促反应常数Km值随着反应温度的升高而升高,是典型的低温酶.
- 张金伟曾润颖
- 关键词：宏基因组低温脂肪酶
- 南极土壤微生物宏基因组文库构建及其抗肿瘤活性初探被引量：13
- 2007年
- 微生物代谢产物是药物的重要来源之一,然而采用传统的分离培养筛选的手段仅能对不到1％的微生物资源进行研究开发．通过构建环境样品微生物宏基因组文库能突破人工培养的瓶颈,直接克隆到完整的次级代谢产物合成基因簇,并从中寻找新的药物和活性次生代谢产物．实验直接提取南极中山站排污口土壤样品中微生物总基因组DNA,以黏粒(SuperCos 1)为载体,构建了宏基因组文库,获得了约27 000个克隆子,平均插入片段在35 kb以上,覆盖了至少946 Mb的微生物基因组信息．通过差异性DNA修复试验(DDRT)法对该文库进行筛选,获得13个具有抗肿瘤活性的克隆子,并采用MTT法对其中活性较高的克隆子进行细胞毒活性测定,表明克隆子AE-3对卵巢癌细胞具有明显的生长抑制作用．
- 赵晶杨祥胜曾润颖
- 关键词：宏基因组文库抗肿瘤活性次生代谢产物
- 南极嗜冷假单胞菌7197S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2006年
- 从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株耐冷菌株7197,其16S rDNA序列分析表明该菌株属于假单胞菌属(Pseu-domonas)。作者通过设计引物,从该菌的全基因组DNA中克隆到编码S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAHH)的完整ORF,全长为1424bp。使用DNAMAN(5.1)软件对全长ORF为1424bp的SAHH基因进行分析,SAHH基因编码一个由474AA残基组成、分子量预计为52523 Da的SAHH蛋白质,与Psychrobacter sp.273-4的SAHH有96.84%的相似性;与Acinetobacter sp.ADP1的SAHH有79%的相似性;与Pseudomonas fluorescens Pf-5的SAHH有75%的相似性。
- 张金伟曾润颖
- 关键词：克隆
- 北极深海沉积物中嗜冷细菌的系统发育分析被引量：4
- 2007年
- 从北极白令海深海沉积物中分离得到19株嗜冷细菌,通过测定16S rDNA序列对它们进行了分类鉴定及系统发育分析,并且与从热带西太平洋“暖池”区沉积物中分离的嗜冷细菌进行了比较.结果表明,由北极海底沉积物中分离得到的细菌主要属于γ-变形菌(γ-Proteobacteria),此外还有少量的α-变形菌和革兰氏阳性菌.在γ-变形菌中主要的菌属为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas),假单胞菌属(Pseudomonas)和希瓦氏菌属(Shewanella).与西太平洋“暖池”区沉积物中的嗜冷细菌的比较分析表明,假交替单胞菌属和假单胞菌属在两个海域中普遍存在,而希瓦氏菌属的分布则表现出一定的地域性.系统发育分析表明,相同菌属但来自北极和西太平洋海域两个不同环境的嗜冷细菌在系统发育树中的位置都相对独立,有的还形成了独立的分支,说明其分子进化过程可能受到生存环境条件的影响.
- 林曦杨祥胜曾润颖
- 关键词：沉积物嗜冷细菌系统发育分析
- 产冷适应复合酶菌株Pseudomonas sp.NJ197的选育、发酵条件及酶学性质被引量：5
- 2006年
- 从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株同时产多种冷适应酶的菌株NJ197，细菌学形态鉴定及16SrDNA序列分析表明，该菌株属于假单胞菌属（Pseudomonas）．生长特性研究表明，该菌株属于耐冷菌，其最适生长温度为5～15℃．NJ197菌株能利用多种单一的碳、氮源产酶，最适产酶温度为20℃，最高产酶温度为30℃．粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE cellulose-52柱层析初步分离纯化后进行酶学性质的研究．该菌株所分泌复合酶中脂肪酶和淀粉酶的活力最高，它们的最适作用温度分别为30℃和35℃，最适pH值分别为9．0和9．5，对热敏感，是典型的碱性冷适应复合酶．Ca^2＋、Mn^2＋、Cu^2＋、Co^2＋、Fe^3＋对该复合酶有较为明显的激活作用，而Zn^2＋、Hg^2＋、Rb^2＋、Cd^2＋、EDTA则能抑制酶活．其中脂肪酶能在高浓度的SDS、CHAPS等变性剂中表现出较好的稳定性．
- 张金伟连明珠曾润颖
- 关键词：碱性脂肪酶碱性淀粉酶耐冷菌
