云南省自然科学基金(2009CC022)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：田长富张芳任晓丽张钰雯胡月新更多>>
- 相关机构：昆明医科大学中国科学院更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备被引量：1
- 2013年
- 目的优化表达条件后纯化出切除GST标签的Met-PGEX-4T-1蛋白,制备出假单胞菌来源的多克隆抗体.方法将蛋氨酸酶(L-methionine gamma-lyase,Me)t的基因克隆至pBSK载体中,形成重组质粒pBSK-Met,采用基因工程技术将pBSK-Met与PGEX-4T-1载体连接,形成Met-PGEX.利用大肠杆菌表达系统诱导表达出Met-PGEX,采用亲和层析法过柱纯化Met-PGEX,凝血酶切除分子量为26KD的GST标签,免疫新西兰兔制备出蛋氨酸酶多克隆抗体Met PcAb,双向免疫扩散实验测多克隆抗体效价为1:128,间接Elisa法测效价1:1×105.结果成功表达纯化出纯度大于90%的Met-PGEX并制备出多克隆抗体.结论所制备的多克隆抗体可用于检测不同来源重组蛋氨酸酶抗原差异性变化.
- 张芳任晓丽罗得华罗沈强王文举张华堂田长富
- 重组蛋氨酸裂解酶原核体系的表达及纯化被引量：1
- 2012年
- 目的建立L-蛋氨酸γ-裂解酶的原核表达、纯化体系.方法合成Metase基因并构建重组质粒pBSK-Metase.通过分子克隆技术,构建重组表达质粒pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase,并将重组子转化到感受态大肠杆菌Dh5α中.pGEX-4T-1-Metase经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导;pBV220-Metase经42℃温度诱导;并对诱导条件进行优化,获得大量表达;建立蛋氨酸裂解酶纯化体系.结果构建出Metase基因的两种高效原核表达体系pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase,并优化各自的最佳诱导表达条件;建立重组蛋氨酸裂解酶的纯化体系.结论成功建立重组蛋氨酸裂解酶的原核表达、纯化体系;获得高效原核表达重组子pGEX-4T-1-Metase,且获得纯度高达95%的蛋氨酸酶.
- 胡振良张芳田腊梅任晓丽田长富
- 关键词：纯化
- 蛋氨酸酶联合顺铂协同抑制人肺腺癌细胞GLC生长作用被引量：3
- 2014年
- 目的纯化重组蛋氨酸酶并探讨其联合化疗药物顺铂对人肺腺癌GLC细胞生长的协同抑制效应.方法对原核表达体系pGEX-4T-1-Met/Dh5a菌液破碎后上清过纯化柱(GST)纯化后,采用MTT比色法测定重组蛋氨酸酶与顺铂联合应用对GLC细胞增殖的抑制作用,采用金正均法计算q值判断两药合用是否具有协同作用.结果重组蛋氨酸裂解酶浓度为0.22 mg/mL,纯度达95%,活性为0.568 IU/mg.给药72 h后单用顺铂对GLC细胞抑制率为24.80%,单用蛋氨酸酶抑制率为27.49%,两药合用抑制率为66.80%.q=1.47>1.15,表现出明显协同作用.结论蛋氨酸酶及顺铂均有抑制GLC增殖作用,并且两者联合使用存在协同作用.
- 胡月新徐天勇张钰雯赵瑜田长富
- 关键词：顺铂肺腺癌细胞
