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国家高技术研究发展计划(2010AA10A401): 作品数：13 被引量：127H指数：7; 相关作者：张吕平胡超群孔杰田燚常亚青更多>>; 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所大连海洋大学上海海洋大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省海洋渔业科技推广专项项目公益性行业(农业)科研专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学天文地球更多>>

刺参优质苗种繁育技术被引量：4: 2011年; 为探索刺参优质苗种的繁育技术,进行了刺参杂交育种和选择育种试验。从不同地理群体的亲参中选择健壮个体进行群体间杂交,再对杂交后代进行严格挑选和强化培育,获得的参苗品质优良,生长速度快,抗逆性强。采用刺参的高强度选择培育技术可以实现刺参的提前繁殖提早出苗,延长刺参在一年内的有效生长期,从而缩短养殖时间,增加产量,提高养殖经济效益。; 李文东田燚马增艳常亚青; 关键词：刺参繁殖苗种培育杂交育种选择育种

凡纳滨对虾EST微卫星标记初步筛选被引量：13: 2011年; 对161 075条凡纳滨对虾dbEST(database of"Expressed Sequence Tags")的数据进行SSR序列筛选,搜索参数为二～六核苷酸重复6次以上(包括6次),共获得含SSR的EST序列12 600条,占整个凡纳滨对虾dbEST数据库的7.8%,其中二核苷酸重复10 104条,占总EST-SSR序列的80.2%;三核苷酸重复2 036条(16.1%),四核苷酸重复336条(2.7%),五核苷酸重复35条(0.3%),六核苷酸重复89条(0.7%)。大部分发现的微卫星序列为完美型(perfect)的重复序列。在二核苷酸所获得的SSR重复单元中,AG/CT是优势重复单元,共分布4 820条,占二核苷酸各重复单元的47.8%;其次是AC/GT重复,共分布3 584条,占二核苷酸各重复单元的35.4%;最后是AT/TA和CG/GC,分别占二核苷酸各重复单元的16.6%和0.2%。通过对凡纳滨对虾EST序列中SSR位点信息的发掘分析,共设计77对微卫星引物,在10个个体中成功扩增的引物有54对,成功扩增率为70.1%。其中多态性丰富的引物28对,多态率为51.9%。等位基因数为2～5,PCR产物大小为140～600 bp。本研究筛选的EST-SSR标记将为凡纳滨对虾的分子遗传学研究、种质鉴定等提供可靠的工具。; 王艳红胡超群张吕平夏建军任春华; 关键词：凡纳滨对虾表达序列标签微卫星分子标记

3种DNA提取方法对WSSV检测结果的影响被引量：4: 2011年; 比较了酚-氯仿法、煮沸法、试剂盒法3种基因组DNA提取方法对WSSV DNA提取效率、纯度及病毒检测结果的影响。结果表明,3种方法的DNA提取效率平均值分别为101.5、372.6、21.5 ng/μl;OD260/OD280范围分别是1.979~2.175（平均值为2.070）、1.699~1.932（平均值为1.796）、1.784~2.075（平均值为1.951）;OIE巢式PCR阳性率分别为60%、50%、70%;TaqMan定量PCR检测的病毒阳性率均为100%,病毒拷贝含量分别为916.0~2.23×106、63.3~1.78×106、479.7~2.70×106Copies/μl DNA。; 李战军孔杰孟宪红张庆文罗坤栾生肖广侠; 关键词：DNA提取方法 PCR WSSV

中国明对虾FcβGBP-HDL基因和启动子的克隆及序列特征分析被引量：2: 2013年; FcβGBP-HDL是中国明对虾免疫应答中的一种模式识别受体,在白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)侵染后其表达显著上调。为了探讨FcβGBP-HDL在免疫应答中的转录调节机制,实验以FcβGBP-HDL cDNA为基础设计引物,采用染色体步移技术对其基因组DNA和启动子进行克隆,构建一系列缺失表达载体进行启动子活性分析。结果显示,FcβGBP-HDL基因全长6 713 bp,无内含子;启动子区域长1 507 bp,除了1个启动子核心序列、2个SRF、2个TBP、1个CTF和1个CRE等典型的启动子特征外,还有2个GATA-1、3个AP-1、1个c-Ets-1和7个Sp1等参与其它节肢动物免疫基因转录调节的结合位点;同源比对分析表明,FcβGBP-HDL启动子与FcCTL启动子相似度最高(41.4%);不同长度的启动子片段具有不同的启动荧光素酶报告基因表达的活性,其中去除5'端2个AP-1后的启动子片段具有最高的启动活性,去除启动子核心序列的启动子片段启动活性最低。研究表明,FcβGBP-HDL启动子可能在免疫反应中受到调节。; 赖晓芳高焕孔杰王清印王伟继; 关键词：中国明对虾基因组结构启动子

pH胁迫对中国明对虾抗氧化系统酶活力及基因表达的影响被引量：34: 2011年; 研究了pH胁迫对中国明对虾Fenneropenaeus chinens＆）抗氧化系统的影响，将中国明对虾暴露于pH7．0、9．0的水体中148h，于胁迫后0、3、12、24、48、72、96、120、148h测定鳃、肝胰腺、肌肉和血淋巴总抗氧化活力（T-AOC）、抗超氧阴离子活力、过氧化氢酶（CAT）活力和CAT、过氧化物还原酶（Prx）基因表达的影响，以pH8．2作为对照。结果显示，pH胁迫12～24h，对虾各组织T-AOC、抗超氧阴离子、CAT酶活力及CAT基因表达均增加，pH胁迫120~148h上述指标受到抑制。对虾肝胰腺和肌肉P麒基因表达随胁迫时间增加逐渐升高，鳃和血淋巴Prx基因表达随胁迫时间增加呈下降趋势。高pH（9．0）胁迫时，对虾鳃抗氧化系统酶活力及基因表达水平达峰时问较其他3个组织明显缩短；而低pH（7．0）胁迫时，对虾肝胰腺抗氧化系统酶活力比其他组织变化快。实验结果表明，pH胁迫3～24h对中国明对虾抗氧化系统酶活力及相关基因表达有一定的诱导效果，但胁迫120～148h则抑制其抗氧化系统功能，可能会导致中国明对虾机体的氧化损伤；中国明对虾鳃和肝胰腺分别对高、低pH胁迫较敏感。; 王芸李健李吉涛何玉英常志强刘德月; 关键词：中国明对虾 PH胁迫总抗氧化能力

刺参体内RNA干扰方法的初步研究: 2016年; 以刺参溶菌酶基因(lysozyme gene,LYZ)为靶基因探索构建刺参体内RNA干扰体系。构建了3个刺参溶菌酶基因特异性的RNA干扰重组质粒,以刺参体腔液原代培养细胞为靶细胞进行筛选;分别以口腔注射和腹腔注射的方式以及不同的注射剂量对刺参LYZ进行体内RNA干扰,并运用qPCR技术测定刺参LYZ的表达量;最后,对刺参LYZ进行体内RNA干扰,并分别运用qPCR技术和比浊法测定刺参LYZ的表达量及其酶活性。结果显示:3种RNA干扰重组质粒的沉默效率分别为40%、45%、0%;体腔注射RNA干扰重组质粒时,各组织中LYZ的表达量均出现了显著的上升(P<0.05),而从口腔注射时,体腔液和肌肉中LYZ的表达量均出现极为显著的下降(P<0.01),而在管足中未出现明显变化;当其注射剂量为0.5μg和5μg时未对LYZ的表达产生有效的抑制作用;当注射剂量为10μg和25μg时,刺参体内LYZ的表达受到了明显抑制,但是注射剂量为25μg时,部分刺参个体出现吐肠现象;在转染12h后,刺参体腔液、肌肉、体壁、疣足和管足组织中LYZ的表达量开始下降,到第四天后开始回升。表明:只有从口腔注射RNA干扰重组质粒且注射剂量达到10μg时才能有效地抑制靶基因的表达;刺参体内RNA干扰具有系统性,可以在各个组织间相互传导。; 张宇鹏田燚庚宸帆于海龙常亚青; 关键词：刺参溶菌酶基因 RNA干扰

白斑综合征病毒(WSSV)3种PCR检测方法的灵敏度比较被引量：8: 2011年; 为了探讨不同PCR检测方法的灵敏度,分别利用TaqMan实时定量PCR、世界动物卫生组织(OIE)公布的巢式PCR引物(简称OIE)、黄海水产研究所种质资源与工程育种研究室(GB)设计的引物(简称GB)及2种巢式PCR对应的一步法PCR,对具有不同白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)含量的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)样品进行检测。结果显示,当使用已知病毒含量的标准品进行检测时,TaqMan实时定量PCR方法可以检测到10个WSSV拷贝;OIE巢式PCR与GB巢式PCR方法分别可检测到104和103个WSSV拷贝;单独使用OIE巢式PCR的外引物和内引物扩增时,分别可检测到5×104和2.5×104个WSSV拷贝;单独使用GB巢式PCR的外引物和内引物进行一步法PCR扩增时,分别可检测到104和5×103个WSSV拷贝。使用上述PCR方法分别对44份未知WSSV含量的样品进行验证,定量PCR方法检测阳性率为84.09%,OIE巢式PCR与GB巢式PCR方法检测的阳性率分别为18.18%和27.27%;单独使用OIE巢式PCR的外引物和内引物扩增检测的阳性率均为15.91%;单独使用GB巢式PCR的外引物和内引物扩增检测的阳性率分别为18.18%和20.45%。根据以上结果,PCR方法检测WSSV的灵敏度由高到低依次为:定量PCR、巢式PCR、一步法PCR。; 肖广侠李战军孟宪红张庆文罗坤孔杰; 关键词：灵敏度

凡纳滨对虾生长性状的双列杂交分析被引量：12: 2010年; 以来源于两个不同遗传背景群体的凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei为亲本,设置PP(P♀×P♂)、PH(P♀×H♂)、HP(H♀×P♂)、HH(H♀×H♂)4个实验组(P代表进口群体,H代表选育群体),进行进口个体(P♂和P♀)与选育个体(H♂和H♀)间的双列杂交实验,分析比较其子一代的生长与存活情况。结果发现,对虾存活由高到低顺序为HH>HP>PH>PP,PH实验组表现出明显的存活杂种优势,其育苗期间的杂种优势平均值为(27.72±11.88)%,下塘90d后成活率的杂种优势为30.50%。在生长前期(30日龄以前)对虾平均体长和体重的顺序是HP>PH>HH>PP,而在生长后期则为PP>HP>PH>HH。HP实验组在整个养成期(10、30、60和90d)均表现出体长和体重上的杂种优势,杂种优势值分别为24.00%、13.71%、2.55%、2.79%和112.46%、54.06%、8.16%、12.48%。结果表明,选育群体为母本、进口群体为父本的对虾杂交后代的生长和存活性状明显提高。; 林红军沈琪张吕平胡超群梁立清; 关键词：凡纳滨对虾双列杂交杂种优势成活率

不同养殖密度对我国热带地区集约化养殖凡纳滨对虾水质和成活率的影响被引量：22: 2011年; 报道了在我国热带地区集约化养殖凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei不同放养密度下水体pH值、溶解氧(DO)、总碱度(TA)、化学需氧量(COD)、生物化学需氧量(BOD)、硫化氢(H2S)、亚硝酸态氮(NO2-NT)、氨态氮(NH4-NT)及弧菌活菌总浓度(Concentration of Live Vibrio,CLV)的变化特征及其与对虾死亡之间的关系,并比较了70、100、120、150尾.m-2不同养殖密度下的养殖成活率。通过几种主要水质因子变化与对虾死亡数之间的相关性分析,结果表明,DO、H2S、NO2-NT、NH4-NT和CLV等5种水质指标与对虾大量死亡存在显著的线性相关,其中DO为负相关,其余为正相关。而pH、TA、COD、BOD与对虾死亡数无显著相关性。4种养殖密度下的成活率分别为80.44%、75.16%、51.74%和44.43%。建议我国热带地区集约化养殖凡纳滨对虾的合理密度为70—100尾.m-2。; 张吕平胡超群沈琪任春华; 关键词：集约化养殖水质成活率

pH胁迫对日本对虾非特异性免疫因子及RNA/DNA比值的影响被引量：15: 2011年; 研究了pH胁迫对日本对虾血清非特异性免疫因子及对虾肌肉RNA/DNA比值的影响。结果表明,低pH胁迫组(pH 7.2)和高pH胁迫组(pH 9.2)总一氧化氮合成酶(TNOS)活力分别在31、2 h时达到最大;而诱导型一氧化氮合成酶(INOS)活力在3 h时达到最大值,随着胁迫时间的延长,酶活力逐渐降低,至72 h趋于稳定,并表现出高pH变化免疫适应能力较差的现象。两pH胁迫组酚氧化酶(PO)活力呈现峰值变化,在12 h时达到最大值,之后逐渐降低,至72 h后趋于稳定。溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力随着pH胁迫时间的增加而降低,同样表现出高pH变化免疫适应能力较差的现象。另外,pH胁迫条件下日本对虾的肌肉RNA/DNA比值显著低于正常对照组日本对虾肌肉的RNA/DNA比值,这可能是由于pH胁迫影响了对虾体内的物质代谢所致。; 赵先银李健李吉涛何玉英张喆常志强; 关键词：PH胁迫日本对虾非特异性免疫因子 RNA/DNA

国家高技术研究发展计划(2010AA10A401)

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