国家自然科学基金(30270563) 作品数:10 被引量:42 H指数:4 相关作者: 刘正湘 蓝荣芳 宋玉娥 张欣 汪道文 更多>> 相关机构: 华中科技大学 田纳西大学 华中科技大学同济医学院附属同济医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省卫生厅科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
AAV介导的CD151基因促大鼠缺血后肢血管再生和血运重建的实验研究 被引量:4 2006年 目的研究肌肉转染腺相关病毒(AAV)介导的CD151基因在大鼠后肢缺血模型中促血管再生和血运重建的作用。方法分别包装携带有CD151基因和GFP基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-GFP)。将12只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,每组各6只。实验组大鼠左下肢肌肉注射局部转染rAAV-CD151,对照组注射rAAV-GFP(1×1010pfu/只)。基因转染2周后行股动脉切除术建立大鼠后肢缺血模型。通过后肢皮肤温度测定、后肢血管造影和缺血肌肉组织毛细血管密度检测,观察缺血肢体血管再生和评价血运重建情况。Western blot检测两组大鼠缺血肢体局部CD151的表达。结果股动脉切除术4周(基因转染6周)后,实验组大鼠缺血后肢平均皮肤温度为(32.92±0.63)℃,对照组为(31.22±0.87)℃;后肢血管造影结果显示实验组缺血侧血管评分平均为(2.56±0.37),对照组平均为(1.57±0.39);实验组缺血后肢肌肉组织毛细血管密度为(609.00±83.89)/mm2,对照组为(517.00±70.65)/mm2;两组比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示实验组大鼠缺血侧肌肉组织CD151表达为对照组的2.96倍。结论局部高表达CD151基因能够提高缺血组织的血管再生能力,促进缺血器官的血运重建和功能恢复。CD151将为缺血性疾病的血管再生治疗提供新的靶点。 康基顺 刘正湘 蓝荣芳 宋玉娥 刘晓春 张欣 汪道文关键词:重组腺相关病毒 后肢缺血 血管再生 rAAV-CD151基因在大鼠缺血后肢血管再生中的作用及血管造影评分 被引量:3 2005年 目的:研究肌肉转染重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)介导的CD151基因在大鼠后肢缺血模型中促血管再生和血运重建的作用。方法:分别包装携带有CD151基因和GFP基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-GFP)。Wistar大鼠12只,随机分为实验组和对照组,每组各6只。实验组大鼠左下肢肌肉注射局部转染rAAV-CD151,对照组注射rAAV-GFP,基因转染2周后行股动脉切除术建立左侧大鼠后肢缺血模型。通过后肢血管造影和缺血肌肉组织毛细血管密度检测,观察缺血肢体血管再生和评价血运重建情况。Western blot检测两组大鼠局部缺血肢体CD151表达。结果:股动脉切除术4周(基因转染6周)后,后肢血管造影结果显示实验组缺血侧血管评分平均为2.56±0.37,对照组平均为1.57±0.39;实验组缺血后肢肌肉组织毛细血管密度为(609.00±83.89)/mm2,对照组为(517.00±70.65)/mm2;两组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示实验组大鼠缺血侧肌肉组织CD151表达为对照组的2.96倍。结论:局部高表达CD151基因能够提高缺血组织的血管再生能力,促进缺血组织的血运重建;CD151将为缺血性疾病的血管再生治疗提供新的靶点。 黄畦 刘正湘 蓝荣芳 宋玉娥 刘晓春 张欣 汪道文关键词:血管造影术 重组腺相关病毒 血管再生 反义CD151基因转染对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响 被引量:2 2006年 目的观察pcDNA3.1真核表达载体介导的反义CD151基因转染对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响。方法构建携带全长正义和反义CD151的真核表达载体pcDNA3.1-CD151和pcDNA3.1-anti-CD151重组质粒,转染体外培养的VSMCs,以RT-PCR和Western blot方法检测CD151的表达,用Boyden趋化小室方法观察细胞迁移。结果与载体对照组、脂质体对照组和空白对照组3组均值比较,转染48h后,反义CD151组mRNA表达降低58%,蛋白表达降低51%,正义CD151组的VSMCs CD151mRNA表达增加171%,蛋白表达增加133%;趋化迁移的细胞数,反义CD151组为37.9±6.3,正义CD151组为86.5±12.4;载体对照组、脂质体对照组和空白对照组分别为60.3±7.1、61.8±7.6和67.3±9.6。反义CD151组显著低于其余各组(P<0.01),正义CD151组显著高于其余各组(P<0.01)。结论pcDNA3.1真核表达载体介导的反义CD151转染,通过抑制CD151的表达,能够显著抑制大鼠VSMCs的迁移。 杨军 刘正湘 蓝荣芳 汪道文关键词:反义核苷酸 平滑肌细胞 高表达CD151细胞系的构建 被引量:2 2004年 目的构建高表达CD151细胞系Tca8113CD151,为研究CD151在肿瘤细胞迁移及肿瘤转移中的作用和相关机制提供实验模型。方法构建pcDNA31CD151HA重组体,采用磷酸钙共沉淀法转染Tca8113细胞,经G418筛选抗性克隆。通过RTPCR和Westernblot分别检测这些克隆CD151基因的转录和翻译。结果成功构建真核表达重组体pcDNA31CD151HA;Tca8113CD151细胞系在mRNA和蛋白质水平高表达外源CD151。结论构建了稳定高表达CD151的细胞系Tca8113CD151,为探讨CD151基因在肿瘤转移中的作用及其相关机制奠定了实验基础。 蓝荣芳 刘正湘 宋玉娥 刘晓春 张欣关键词:CD15 细胞系 TCA8113 PCDNA3 重组体 CD151基因导入脐静脉内皮细胞对细胞增殖的影响 被引量:1 2007年 目的:研究CD151基因导入脐静脉内皮细胞(HUVEC)对细胞增殖的影响,以进一步研究其生物学作用及其在血管生成中的作用机制。方法:通过构建p-AAV-CD151质粒并瞬时转染HUVEC,Western Blot检测CD151表达,采用MTT法测定HUVEC增殖的变化。结果:p-AAV-CD151组CD151表达明显增加,与正常对照组、p-AAV-GFP组比较表达差异有统计学意义(均P<0.05)。MTT法检测正常对照组、p-AAV-GFP组、p-AAV-CD151组的吸收度值分别为0.1663±0.0095、0.169±0.0085、0.2457±0.0044,p-AAV-CD151组较p-AAV-GFP组和正常对照组细胞增殖能力增强(P<0.05)。结论:CD151具有促进内皮细胞增殖的作用,CD151可能通过促进内皮细胞增殖达到促进血管新生的作用。 郑振中 刘正湘关键词:转染 脐静脉内皮细胞 细胞增殖 CD_(151)对脐静脉内皮细胞PI3K表达及细胞增殖的影响 被引量:2 2006年 目的研究CD151对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及PI3K表达的影响,以进一步研究其生物学作用及其在血管生成中的作用机制。方法通过构建p-AAV-CD151质粒并转染HUVEC,采用MTT法测定HUVEC增殖的变化,W estern B lot检测CD151及PI3K表达。结果p-AAV-CD151转染组CD151表达明显增加,p-AAV-CD151转染组与正常对照组、p-AAV-GFP转染组比较表达差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测正常对照组、p-AAV-GFP转染组、p-AAV-CD151转染组的OD值分别为0.1663±0.0095、0.169±0.0085、0.2457±0.0044,p-AAV-CD151转染组较p-AAV-GFP转染组和正常对照组细胞增殖能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。p-AAV-CD151转染组PI3K表达明显增加,p-AAV-CD151转染组与正常对照组、p-AAV-GFP转染组比较表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD151具有促进内皮细胞增殖的作用,CD151可能通过上调PI3K表达,促进内皮细胞增殖达到促进血管新生的作用。 郑振中 刘正湘关键词:脐静脉 内皮细胞 1-磷脂酰肌醇3-激酶 细胞增殖 CD151对人舌鳞癌细胞Tca8113迁移作用的影响 被引量:17 2005年 背景与目的:CD151在肿瘤组织中的高表达与肿瘤的转移和预后密切相关,但其具体机制尚不清楚。本研究旨在探讨携带全长正义和反义CD151基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-antiCD151)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞迁移的影响。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆CD151基因,分别呈正向和反向插入包装质粒pAAV,并包装成rAAV-CD151,rAAV-antiCD151,斑点杂交测定病毒滴度;rAAV-CD151与rAAV-antiCD151分别转染Tca8113细胞2周后,Westernblot检测CD151表达,通过Boyden趋化小室研究其对Tca8113细胞迁移的影响。结果:斑点杂交结果显示rAAV-CD151和rAAV-antiCD151病毒滴度分别为2.0×1011pfu/ml,1.0×1011pfu/ml;转染rAAV-CD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组增加了108%,细胞迁移数(93.6±11.6)显著高于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(53.0±6.6和46.0±7.0,P<0.05);转染rAAV-antiCD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组减少了79%,细胞迁移数(24.0±4.4)显著低于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(P<0.05)。结论:CD151在肿瘤细胞的迁移中起重要的作用,是肿瘤转移的重要分子基础。携带反义CD151基因的重组腺相关病毒作为一种新的治疗工具,可以特异性阻断肿瘤细胞CD151表达,抑制肿瘤细胞的迁移。 蓝荣芳 刘正湘 宋玉娥 张欣 汪道文关键词:TCA8113细胞 重组腺相关病毒 细胞迁移 CD151对大鼠心肌梗死后血管新生及心功能的影响 被引量:16 2006年 目的观察CD151基因对心肌梗死后大鼠梗死心肌微血管密度和心功能的影响,以明确CD151体内促血管新生作用。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型。构建PAAVCD151重组质粒,分点注射至梗死心肌及周围进行基因转染。另外设置心肌内不转染及转染PAAVGFP心肌梗死对照组。4周后测定心肌微血管密度及心功能。结果心肌注射PAAVCD151转染后心肌中CD151蛋白表达明显高于对照组(P<0.01)。转染CD151组心肌微血管密度[(385.4±79.9)N/MM2]明显高于对照组[(240.8±40.3)N/MM2](P<0.01)。心脏收缩功能指标射血分数、短轴缩短率、左室内压最大上升和下降速率等参数亦明显高于对照组(P<0.01)。结论CD151在体内具有明确的促血管生成作用,通过促进缺血心肌的血运重建起到保护心脏功能的作用。 王丽 杨军 刘正湘 陈斌 刘健 蓝荣芳 秦瑾关键词:心肌梗塞 新生血管化 生理性 CD151 rAAV-CD151基因促大鼠缺血后肢血管再生的功能评价 2006年 目的:观察肌肉转染腺相关病毒(AAV)介导的CD151基因在大鼠后肢缺血模型中促血管再生作用并进行功能评价。方法:实验于2003-01/2005-10在华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管研究室暨基因治疗研究中心完成。①分别包装携带有CD151基因和GFP基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-GFP)。②Wistar大鼠12只,采用随机数字法分为实验组和对照组,每组各6只。③实验组大鼠右下肢肌肉注射局部转染rAAV-CD151,对照组注射rAAV-GFP(1×1010pfu/只)。④基因转染2周后行股动脉切除术建立右侧大鼠后肢缺血模型。心内注入红四氮唑观察大鼠下肢变化,根据组织染色的部位或染色的深浅程度判断后肢缺血模型建立是否成功。⑤于模型建立术前、术后2d、术后1,2,3,4周进行缺血后肢的损伤评分,分为0~3分,3分为患肢爬行托拽,或者肢体有缺血性坏疽;0分为抗牵拉时患侧足底与对侧肢体外观无明显区别。⑥采用Westernblot检测两组大鼠局部缺血肢体CD151的表达。⑦股动脉切除术4周后,采用非致冷红外热成像仪分别检测大鼠后肢皮肤温度、免疫组织化学检测缺血肌肉组织毛细血管密度,观察缺血肢体血管再生情况。结果:12只大鼠全部进入结果分析。①股动脉切除术4周(基因转染6周)后,实验组大鼠缺血后肢平均皮肤温度高于对照组((32.92±0.63),(31.22±0.87)℃,P<0.05)。②Westernblot检测结果显示实验组大鼠缺血侧肌肉组织CD151表达显著高于对照组。③实验组缺血后肢肌肉组织毛细血管密度显著大于对照组(609.00±83.89),(517.00±70.65)/mm2,P<0.05)。④术后4周肢体功能的损伤评分实验组显著低于对照组(0.67±0.21,1.67±0.32,P<0.05)。结论:局部高表达CD151基因能够提高缺血组织的血管再生能力,促进缺血肢体的血运重建和功能恢复。 刘曌宇 刘正湘 宋玉娥 刘晓春 张欣关键词:基因 腺病毒科 CD151对人宫颈癌Hela细胞增殖反应的影响 被引量:5 2006年 目的:探讨CD151对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:利用脂质体分别将pcDNA3.1-CD151、pcD-NA3.1-antiCD151和pcDNA3.1-GFP重组质粒转染Hela细胞。Westernblot分析细胞CD151及核增殖抗原(PCNA)的表达;MTT法检测细胞增殖反应;流式细胞仪分析细胞周期变化。结果:转染pcDNA3.1-CD151与未转染组及转染pcDNA3.1-GFP对照组比较,Hela细胞CD151表达显著上调(P<0.01);细胞增殖反应显著提高(P<0.01);增殖期S+G2/M细胞比例增高(P<0.05);PCNA表达亦明显增强(P<0.01)。而转染pcDNA3.1-antiCD151后,Hela细胞CD151表达明显下调(P<0.01);细胞增殖反应及PCNA表达明显下降(P<0.01);S+G2/M细胞比例降低(P<0.05)。结论:CD151的表达对肿瘤细胞的增殖反应起重要作用,通过反义CD151基因干预,可下调细胞中CD151的表达,抑制肿瘤细胞增殖。 王丽 刘正湘 杨军 蓝荣芳 秦瑾 郑振中关键词:CD151 HELA细胞 肿瘤增殖