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广东省自然科学基金(2012010008914)
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刘宏霞
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固醇调节元件结合蛋白1c激活大鼠Patatin样磷酯酶结构域蛋白3基因转录
2013年
目的探讨固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1e)对Patatin样磷酯酶结构域蛋白3(PNPLA3)基因的转录调控作用。方法构建7周龄雄性体重匹配的禁食(24h)以及禁食后再喂食(48h)SD大鼠(自由饮食组3只,饥饿组3只,再喂食组4只)和高脂及小剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病sD大鼠(正常对照组5只,2型糖尿病组6只)。用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和Western blotting法检测各组大鼠肝脏组织中SREBP一1c和PAPM3的表达水平。将大鼠PⅣP翻3启动子5’端上游-1000bp序列分成3段,分别构建荧光素酶报告载体(R—PⅣPM3.1、R—PM似3—2、R—PNPL43—3),转染人正常肝细胞株L02,比较3个载体基础荧光素酶活性以及SREBP-1e过表达诱导的荧光素酶活性。分析上述实验中荧光素酶活性最高的PNPLA3启动子片段可能的SREBP-1c结合位点(SRE),分别构建野生型和SRE突变型报告载体,比较两个载体荧光素酶活性。多组定量资料比较用方差分析,两组定量资料比较用t检验。结果与自由饮食组相比,饥饿组大鼠肝脏SREBP—lc、PNPLA3和脂肪酸合成酶FAS基因表达均下降,再喂食组三者表达显著升高,差异均有统计学意义(F=114.14,334.11,754.20,均P〈0.05)。与正常对照组相比,2型糖尿病组SREBP-1e、PNPLA3基因(t=-18.39,-30.07,均P〈0.05)及蛋白表达(t=4.58,6.81,均P〈0.05)均显著增高。R—PNPLA3-1报告载体基础荧光素酶活性较对照升高51.13倍(t=-28.93,P〈0.05),R一删PM3—2和R—PNPLA3—3无基础荧光素酶活性;在L02细胞中,转染SREBP-1c表达质粒的R—PⅣPL43—1组荧光比值较转染空质粒的组升高2.63倍(t=-7.64,P〈0.05),而R—PⅣPM3.2组及R—PNPLA3—3组转染SREBP-1e表达质粒荧光比值较转染空质粒组均无变化;PNPLA3启动子-100~-911)p存在SRE,SRE突变的报告载体(MUT—R—PNPL
许婧
梁华
刘宏霞
徐芬
袁丁
严晋华
翁建平
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固醇调节元件结合蛋白1C
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