国家高技术研究发展计划(2014AA021301)
- 作品数：7 被引量：21H指数：2
- 相关作者：吕红周峻岗余垚陈蕾莫文娟更多>>
- 相关机构：复旦大学广州医科大学中国农业科学院饲料研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学电气工程更多>>
- 新型α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶RuAra1的表达与鉴定
- 2014年
- 随着能源问题的日益突出,半纤维素资源的利用逐渐受到人们的重视.α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-Larabinofuranosidase,EC 3.2.1.55)属于半纤维素酶系,能水解以α-1,3、α-1,2或α-1,5键连在木聚糖主链上的阿拉伯糖单体或低聚阿拉伯糖侧支.本实验室将克隆得到的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因RuAral在大肠杆菌中重组表达,得到的重组阿拉伯呋喃糖苷酶RuAral能够水解4-硝基酚-α-L-阿拉伯糖苷(4-Nitrophenyl-α-Larabinofuranoside,pNPA)、4-硝基酚-β-D-吡喃木糖苷(4-Nitrophenyl-β-D-xylopyranoside,pNPX)以及从小麦阿拉伯木聚糖中水解释放阿拉伯单糖.以pNPX为底物时,该酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为50℃.RuAral与瘤胃真菌(Neocallimastix patriciarum)内切木聚糖酶XynCIDBFV、瘤胃细菌木糖苷酶RuXynl的组合使用可以实现对小麦阿拉伯木聚糖的协同降解,且降解效率优于德国AB酶制剂公司的商品酶ROHALASE WP.
- 夏婷颖周峻岗吕红
- 关键词：宏基因组
- CSFV E2蛋白主要抗原区域在马克斯克鲁维酵母中的表达及小鼠免疫被引量：2
- 2019年
- 猪瘟是一种由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的高度接触传染性和致死性疾病.疫苗预防接种是控制猪瘟病毒传播的重要措施,目前我国使用的弱毒疫苗均为1.1亚型猪瘟病毒兔化弱毒株.随着病毒的不断变异,2.1亚型猪瘟病毒已经逐渐成为我国的主要流行毒株.本研究利用马克斯克鲁维酵母研究了2.1b型CSFV E2蛋白及其截短体mE2(690-916aa)在马克斯克鲁维酵母中的重组表达,发现去除E2蛋白跨膜区域可以显著提高E2蛋白表达水平,mE2的表达量在5L发酵罐中达1.25～2.5g/L.经分子筛纯化,mE2蛋白纯度达90%.纯化的mE2作为抗原蛋白,注射免疫小鼠28d后,可诱导小鼠产生抗CSFV的IgG特异性抗体,表明马克斯克鲁维酵母重组表达的mE2蛋白具有较好的免疫原性.
- 朱培霞陈蕾陈蕾刘洋莫文娟刘洋余垚莫文娟
- 关键词：猪瘟病毒马克斯克鲁维酵母E2蛋白
- 犬细小病毒病毒样颗粒在马克斯克鲁维酵母中的表达及免疫原性研究被引量：10
- 2018年
- 犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是目前影响犬类健康的最严重的传染病之一.疫苗免疫是预防并控制CPV传播的重要措施.本研究以马克斯克鲁维酵母作为表达宿主进行犬细小病毒VP2蛋白的重组表达.犬细小病毒VP2蛋白经密码子优化后,在马克斯克鲁维酵母中获得高效表达,表达量可达到2.4g/L.重组表达的VP2蛋白自我组装形成大小为20nm的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),经分子筛凝胶层析纯化的VLPs制成疫苗,注射免疫小鼠进49天后抗体滴度可达10 000以上,并诱导小鼠产生血凝抑制抗体,表明利用马克斯克鲁维酵母制备的VLPs疫苗具有较高的免疫原性.
- 陈蕾陈蕾朱培霞周峻岗余垚周峻岗
- 关键词：犬细小病毒病毒样颗粒衣壳蛋白马克斯克鲁维酵母
- 马克斯克鲁维酵母表达系统菊粉酶启动子的改造及活性研究被引量：1
- 2017年
- 马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)作为一种食品安全级酵母,具有生长快,生物量高等特点,是一种新型的重组蛋白表达的宿主系统.启动子是供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列,调控着转录的起始过程,直接影响基因的表达水平.本文通过易错PCR技术对马克斯克鲁维酵母菊粉酶启动子Pinu进行两轮突变,以阿魏酸酯酶(Est1E)作为报告基因,经筛选、鉴定获得了5个可以显著提高外源蛋白表达量的突变型启动子Pm1D81、Pm1F138、Pm2Q89、Pm2M73、Pm2X47,报告蛋白Est1E的酶活性是启动子改造前的2.31,2.65,5.01,5.40,5.43倍.随后测试了启动子Pm2X47对外源蛋白甘露聚糖酶和赤霉烯酮降解酶表达的影响,结果显示这两种酶的表达量均有提高,分别是启动子改造前的3.57倍和4.13倍.上述结果提示,改造后的菊粉酶启动子在提高外源蛋白表达水平方面具有一定的通用性,可作为新型候选表达元件,以提升马克斯克鲁维酵母重组表达外源蛋白的能力.
- 胡晓悦周峻岗余垚余垚吕红
- 关键词：马克斯克鲁维酵母启动子
- 蓝状菌(Talaromyces leycettanus JCM12802)高温果胶甲酯酶PmeT在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质被引量：1
- 2018年
- 【目的】在毕赤酵母中高水平表达蓝状菌(Talaromyces leycettanus JCM12802)来源的高温果胶甲酯酶,并对其进行酶学性质研究,具有高催化效率的高温果胶甲酯酶有望能广泛应用于低甲氧基果胶的生产,优化生产工艺,提高转化率,降低生产成本。【方法】利用RT-PCR的方法,以蓝状菌(T.leycettanus JCM12802)总RNA为模板,克隆得到果胶甲酯酶基因(Pme T)的cDNA。将其插入表达载体p PIC9K,并转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115,高活性的阳性转化子进行高密度发酵研究。【结果】重组酵母的果胶甲酯酶表达水平达到428 U/m L,并进一步鉴定了重组果胶甲酯酶的酶学性质。该酶的最适反应温度为75°C,且在85°C以下具有较好的热稳定性。最适反应p H为4.0,在p H 2.0-7.0之间有较好的稳定性。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达蓝状菌来源的高温果胶甲酯酶,为其今后在工业上的应用奠定了基础。
- 华婷李雅楠王凯凯涂涛黄火清罗会颖姚斌
- 关键词：果胶果胶甲酯酶毕赤酵母
- 新型高产β-胡萝卜素巴斯德毕赤酵母表达宿主菌的构建被引量：1
- 2018年
- 分泌型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)作为高效表达宿主菌已被广泛应用,通过高密度培养工艺用于多种酶制剂(如植酸酶、甘露聚糖酶等)的规模生产。然而,在生产过程中产生的大量菌体利用率低,多数被废弃掩埋,或只能作为廉价的菌体蛋白,造成大量的资源浪费。为提高酵母发酵副产物的利用率,向毕赤酵母宿主菌GS115中导入来源于红发夫酵母(Xanthophyllomyces dendrorhous)β-胡萝卜素合成途径中的关键基因(idi、crt E、crt YB和crt I),获得了胞内高产β-胡萝卜素的工程菌株P.pastoris GS115-CARO,实现工业生产中的菌体蛋白的高附加值利用。同时以来源于嗜热篮状菌(Talaromyces leycettanus JCM12802)的甘露聚糖酶基因Man5T作为参照,验证了宿主菌P.pastoris GS115和P.pastoris GS115-CARO在表达外源蛋白的差异。结果表明:Man5T基因的导入并没有影响,两株宿主菌的甘露聚糖酶表达量(分别为280 U/m L和286 U/m L,P>0.05),但宿主菌P.pastoris GS115-CARO胞内β-胡萝卜素产量高达到31.27 mg/g(菌体干重dry cell weight,dcw)。构建的工程菌株不仅可以实现外源酶制剂的高效表达,有效地提升酵母菌体资源的利用价值,同时也在一定程度上了解决了发酵菌体对环境的污染问题。
- 张祺珮李雅楠孟昆柏映国黄火清罗会颖
- 关键词：毕赤酵母红发夫酵母Β-胡萝卜素甘露聚糖酶
- 马克斯克鲁维酵母的遗传与生理特征被引量：7
- 2016年
- 马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)广泛存在于酸奶、水果、酸乳酒等环境中,是食品安全级酵母,在一个多世纪前被分离获得.近20年来,由于该酵母表现出的食品安全性、高生长速率、高生物量、耐高温等特征,得到生产应用领域的关注.本文从K.marxianus的基因组遗传特征、分类以及细胞生长、细胞壁组成、糖基化修饰等方面进行了综述,以期系统认识和了解K.marxianus酵母.
- 莫文娟郭超吕红
- 关键词：马克斯克鲁维酵母基因组糖基化
