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烟草曲茎病毒复制蛋白基因的原核表达和免疫定位被引量：2: 2004年; 利用PCR方法从烟草曲茎病毒 (TbCSV)Y35分离物的病株中获得复制蛋白 (Rep)基因 ,将其克隆到原核表达载体pGEX 4T 1上获得重组质粒pGEX Y35Rep。重组质粒导入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中 ,IPTG诱导表达后发现部分Rep融合蛋白以可溶性形式表达。利用GST Sepharose 4B亲和层析柱纯化了Rep的融合蛋白 ,免疫家兔获得Rep蛋白的抗体。对TbCSV侵染烟草中Rep蛋白的亚细胞分布研究发现 ,Rep蛋白主要分布于含有细胞核的组份中。利用免疫胶体金技术对感病烟草中Rep蛋白进行了定位。; 崔晓峰李云琴李桂新周雪平; 关键词：烟草曲茎病毒

病毒诱导的基因沉默及其在植物基因功能研究中的应用被引量：29: 2004年; RNA介导的基因沉默是近年来在生物体中发现的一种基于核酸水平高度保守的特异性降解机制 .病毒诱导的基因沉默 (virusinducedgenesilencing ,VIGS)是指携带植物功能基因cDNA的病毒在侵染植物体后 ,可诱导植物发生基因沉默而出现表型突变 ,进而可以研究该目的基因功能 .至今 ,已经建立了以RNA病毒、DNA病毒、卫星病毒和DNA卫星分子为载体的VIGS体系 ,这些病毒载体能在多种寄主植物 (包括拟南芥、番茄和大麦 )上有效抑制功能基因的表达 .VIGS已开始应用于N基因和Pto基因介导的抗性信号途径中关键基因的功能研究、抗病毒相关的寄主因子研究以及植物代谢和发育调控研究 .在当前植物基因组或EST序列大量测定的情况下。; 陶小荣周雪平崔晓峰钱亚娟; 关键词：基因功能病毒载体

与烟草曲叶病毒伴随的新型DNA分子鉴定被引量：24: 2002年; 根据已报道的两种粉虱传双生病毒DNAβ分子的保守序列设计引物,利用PCR技术从烟草曲叶病毒Y5和Y8分离物中扩增到一类环状DNAβ分子,其全长分别为1333和1338nt.序列分析表明,Y5DNAβ可能编码8个可读框（ORFs）,病毒链和互补链各含有4个ORFs;Y8 DNAβ可能编码7个ORFs,病毒链含有4个ORFs,互补链含有3个ORFs.除茎环结构TAATATTAC外,DNAβ与烟草曲叶病毒Y5和Y8基因组DNA-A序列几乎无同源性.Y5和Y8的DNAβ全长核苷酸序列同源性较高,为85％,而与已报道的胜红蓟黄脉病毒（AYVV）DNAβ及棉花曲叶病毒（CLCuV）的两个DNAβ的同源性为51％～65％.免疫捕获PCR及粉虱传毒实验表明,DNAβ分子包裹在双生病毒粒子中,并伴随病毒由烟粉虱传播.; 谢艳周雪平李正和李桂新张仲凯; 关键词：DNAΒ 烟粉虱双生病毒

广西胜红蓟黄脉病样中发现多种菜豆金色花叶病毒属的病毒被引量：14: 2007年; The diseased sample G7 was collected from Ageratum plants showing yellow vein symptoms in Xialian,Nanning,Guangxi province and tested with primers specific for DNA-A of several geminiviruses by polymerase chain reaction.The results showed that mixed infection of begomoviruses appeared in G7 sample.Partial DNA-A sequence comparison with other geminiviruses showed that G7 sample was infected by 5 dif-ferent begomoviruses,they were Papaya leaf curl China virus(PaLCuCNV),Ageratum yellow vein China virus(AYVCNV),Tomato leaf curl China virus(ToLCCNV),Euphorbia leaf curl virus(EuLCV) and Tobacco leaf curl Yunnan virus(TbLCYNV).; 王向阳; 关键词：菜豆金色花叶病毒属胜红蓟粉虱传双生病毒 DNA病毒基因组大小

黄瓜花叶病毒2a基因上的两个氨基酸共同决定其在豆科植物上引发的过敏反应被引量：9: 2002年; 过敏反应（hypersensitive response,HR）是植物对病原物侵染的一种抗性反应.对黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）在豆科植物上引发HR反应的相关因子进行了研究,证明CMV 2a基因中的243个碱基决定了过敏反应.进一步对该区域进行了分析和点突变研究,用豆科系统侵染株系CMV-P1的631位氨基酸酪氨酸（Tyr）替换豆科局部坏死株系CMV-Fny的相应位点氨基酸苯丙氨酸（Phe）后得到的突变体（Fny-F/Y）在豆科植物上引发HR反应,但过敏枯斑能够向外扩展;用CMV-P1的641位氨基酸丝氨酸（Ser）替换CMV-Fny的相应位点氨基酸丙氨酸（Ala）得到的突变体（Fny-A/S）在豆科植物上引发的HR反应与CMV-Fny引发的症状没有差异;当这两个位点同时被置换后得到的突变体（Fny-FA/YS）在豆科植物接种叶上就不再引发HR反应,而是产生系统侵染,说明CMV在豆科植物上引发的过敏反应是由CMV 2α基因上的631和641位氨基酸共同决定的.; 陶小荣周雪平李桂新于嘉林; 关键词：氨基酸过敏反应黄瓜花叶病毒复制酶基因豆科植物

从烟草上分离的中国番茄黄化曲叶病毒及其卫星DNA的全基因组结构特征被引量：6: 2003年; 从我国云南省红河地区表现曲叶症状的烟草上分离到病毒分离物Y8, Y36和Y38. 用14种针对双生病毒粒子的单克隆抗体进行三抗体夹心ELISA测定, 结果表明, 病毒分离物Y8, Y36和Y38的抗原表位型与中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)相似. 对Y8, Y36和Y38基因组DNA-A全序列进行了分析, 其全长分别为2727, 2730和2730个核苷酸, 均编码6个ORFs, 其中病毒链编码AV1(CP)和AV2两个ORFs, 互补链编码AC1～AC4四个ORFs. DNA-A全序列、基因间隔区核苷酸序列及各ORF编码的氨基酸序列比较分析表明, Y8, Y36和Y38均属于TYLCCNV. 从病株Y8, Y36和Y38中还分离到一类卫星DNA分子(DNAβ), 全长分别为1338, 1339和1338个核苷酸. 3个DNAβ分子的核苷酸全序列的同源性为98%～99%, 且互补链上均含有编码126个氨基酸的C1 ORF.; 谢艳李桂新周雪平; 关键词：烟草中国番茄黄化曲叶病毒卫星DNA 全基因组结构特征粉虱传双生病毒

植物病毒—新型的外源基因表达载体被引量：7: 2002年; 与利用转基因植物表达外源基因相比 ,植物病毒载体具有表达水平高、速度快、宿主广等优点 ,是一类新型的外源基因表达载体。本文就植物病毒表达载体的构建策略、应用状况和存在的问题进行了综述。; 彭燕崔晓峰周雪平; 关键词：植物病毒外源基因表达植物基因工程

烟草花叶病毒和番茄花叶病毒在含N基因烟草上的症状差异是由运动蛋白基因决定的被引量：11: 2004年; 烟草花叶病毒(TMV)和番茄花叶病毒(ToMV)是烟草花叶病毒属中关系最为密切的病毒,但它们在含N基因烟草上产生的枯斑大小有明显的差异.比较了TMV,ToMV及用ToMV运动蛋白基因(MP)精确置换TMVMP后获得的重组病毒T/OMP在不同寄主上的症状差异,发现T/OMP在含N基因烟草上产生的枯斑大小与ToMV相似.分析比较TMV,ToMV和T/OMP外壳蛋白和MP在植物体内的积累水平,发现三者之间没有明显的差异,而TMV和T/OMP在原生质体中的复制水平也没有差异.比较TMV,ToMV和T/OMP接种后烟草体内防御相关酶(PAL,POD和PPO)的活性变化,结果T/OMP和TMV所诱导酶的变化趋势基本一致,而与ToMV有所差异,因此认为MP基因功能的差异决定了TMV和ToMV在N基因烟草上枯斑的大小.; 于翠胡东维董家红崔晓峰吴俊杰于嘉林周雪平; 关键词：烟草花叶病毒番茄花叶病毒运动蛋白枯斑

粉虱传双生病毒的TAS-ELISA及PCR快速检测被引量：93: 2002年; 利用粉虱传双生病毒 (WTGs)多克隆抗体及单克隆抗体 ,建立了三抗体夹心 EL ISA (TAS-EL ISA)检测 WTGs的方法 ,并发现了单克隆抗体 SCR18可广泛用于我国 WTGs的检测。利用根据WTGs基因组上基因间隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的引物 ,建立了 PCR特异检测 WTGs的方法。对田间病样的 TAS- EL ISA和 PCR检测表明 ,粉虱传双生病毒在云南省烟草、番茄和南瓜上均存在 ,2种方法的测定结果是一致的。; 谢艳张仲凯李正和丁铭周雪平; 关键词：植物病毒粉虱传双生病毒 TAS-ELISA PCR

中国番茄黄化曲叶病毒DNAβ缺失突变体与异源病毒的互作研究被引量：8: 2006年; 与一些单组份双生病毒伴随的卫星DNAβ是辅助病毒在自然寄主上引起典型症状所必需的致病相关分子。迄今发现的所有DNAβ分子在互补链上都含有一个位置和大小保守的βC1基因。对中国番茄黄化曲叶病毒的缺失βC1基因的DNAβ突变体(DNAΔC1β)与异源病毒接种后的致病性及稳定性进行了研究。PCR和Southern杂交证实该突变体能利用赛葵黄脉病毒、烟草曲茎病毒、中国胜红蓟黄脉病毒、假马鞭曲叶病毒等多种异源双生病毒复制并系统侵染本氏烟。接种后65 d内的PCR检测和序列分析显示,该突变体与其它辅助双生病毒接种后在寄主细胞中的复制是稳定的。; 钱亚娟郭维周雪平; 关键词：双生病毒 DNAΒ 稳定性

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