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“新吉富”罗非鱼消化道指数及2种蛋白酶活性研究被引量：2: 2013年; 开展“新吉富”罗非鱼消化道指数以及胃蛋白酶和胰蛋白酶活性动态变化研究，结果表明，“新吉富”罗非鱼比肠长为4.921±0.187，比肠质量为0.018±0.002，比肝质量为0.014±0.003，比内脏质量为0.039±0.007，表现为偏植食性为主的杂食性鱼类特征。空腹再投喂后0～96 h ，胃蛋白酶活性于12h 增加至最大值167.872 U ，投喂12～96 h 其活性降低，特别是12～24 h ，减少幅度较大。同时检测其肝脏、前肠、中肠、后肠中胰蛋白酶活性动态变化情况，各组织的胰蛋白酶活性比较，肝＜中肠＜前肠＜后肠，各部位的胰蛋白酶活性总体呈先增加达最大值后，再减小的趋势，各部位胰蛋白酶活性差异显著（P＜0.05）。; 吴斌樊海平钟全福翁祖桐梁萍陈度煌; 关键词：消化道指数胃蛋白酶胰蛋白酶

2个养殖水温下罗非鱼食后肠道消化酶活性的动态变化被引量：4: 2018年; 在26℃和30℃养殖水温下,于"新吉富"罗非鱼摄食后0、1、3、6、12、24、30、36、48、56、96 h共11个时间点采样,分别研究了前、中、后肠胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性的变化。试验结果显示,罗非鱼经饥饿再摄食后,前、中、后肠胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性基本均呈现先上升再下降的趋势。在30℃养殖水温下,肠道各段消化酶活性均高于26℃养殖水温,且活性升高时间更早,较高活性水平持续时间更长。罗非鱼肠道各段消化酶活性存在组织差异性,在30℃养殖水温下,胰蛋白酶活性大小顺序为后肠>前肠>中肠,淀粉酶活性大小顺序为中肠>后肠>前肠,脂肪酶活性大小顺序为前肠>中肠>后肠,由此推测罗非鱼饲料中蛋白质、淀粉、脂肪成分在肠道中的主要消化部位分别为后肠、中肠、前肠。; 翁祖桐; 关键词：养殖水温肠道胰蛋白酶

福建红罗非鱼源无乳链球菌的分离鉴定及其分子特征被引量：8: 2019年; 为探讨2017年福建省漳州市某养殖场红罗非鱼出现疾病的发病原因,并为该病的有效防治提供理论基础,以常规方法从患病红罗非鱼Oreochromis mossambicus×O.niloticus脑组织中分离优势菌株,采用形态观察和16S rRNA基因序列分析等方法对该优势菌进行鉴定,通过分子血清型、MLST和毒力基因等分型方法对分离株进行了分子特征分析,并采用K-B纸片扩散法检测分离株对26种抗生素的敏感性。结果表明:从病鱼脑组织中分离获得1株具致病力的不溶血(即γ溶血)无乳链球菌,该分离株是Ⅰa-ST7型,其毒力基因型为bac^+-bca^+-cfb^+-hylB^+-fbsA^+-fbsB^+-lmb^--scpB^--cpsE^+-sip^+,且对头孢类药物、强力霉素、氨苄青霉素等13种药物敏感,对氟罗沙星、青霉素G、多粘菌素B等4种药物中度敏感,而对新霉素、庆大霉素、卡那霉素等9种药物耐药。本研究结果可为福建红罗非鱼无乳链球菌病的疫病监测、疫苗研制和药物防治等研究提供基础数据。; 王巧煌; 关键词：红罗非鱼无乳链球菌分子分型药敏试验

罗非鱼无乳链球菌双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：6: 2014年; 通过杂交瘤技术制备抗罗非鱼无乳链球菌SIP融合蛋白单克隆抗体2株:1C9和6G5,均为IgM,效价分别为10-5和10-4,间接ELISA结果显示单克隆抗体1C9对无乳链球菌具有良好的检测特异性和灵敏性;同时制备兔抗罗非鱼无乳链球菌SIP融合蛋白多克隆抗体及其HRP酶标记物,兔抗SIP蛋白多克隆抗体的效价为10-6,经标记的抗体效价为10-4,最佳抗体工作浓度为1∶400。建立双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测罗非鱼无乳链球菌的方法,具良好的特异性,检测灵敏度为0.85×106 CFU·mL-1。双抗体夹心ELISA检测实际应用结果与双重PCR检测比较,相对符合率为98.33%,检测结果可靠性高。; 张新艳; 关键词：罗非鱼无乳链球菌单克隆抗体 DAS-ELISA

罗非鱼无乳链球菌SIP微胶囊口服疫苗免疫效果研究被引量：1: 2018年; 为研究无乳链球菌Streptococcus agalactiae表面免疫蛋白(surface immunogenic protein,SIP)微胶囊口服疫苗对罗非鱼Oreochromis niloticus的免疫效果,将制备的无乳链球菌SIP微胶囊疫苗口服免疫健康的罗非鱼,以注射免疫无乳链球菌灭活疫苗为阳性对照,口服包埋PBS的微胶囊颗粒为阴性对照,分别于免疫后0、7、14、28d取脾脏组织,通过实时荧光定量PCR方法检测脾脏组织中的白细胞分化抗原CD4、白介素IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子TNF-α、核转录因子NF-κB等5种免疫相关基因表达的变化,并于第5周进行人工感染攻毒试验,计算无乳链球菌SIP微胶囊口服疫苗对罗非鱼的相对免疫保护率。结果显示,免疫接种之后,SIP微胶囊疫苗口服免疫组(SIP疫苗组)和全菌灭活疫苗注射免疫组(灭活疫苗组)罗非鱼脾脏中的5种免疫相关基因表达均不同程度上调,且相对表达量显著高于阴性对照免疫组(阴性对照组)(P<0.05)。在人工感染攻毒试验中,SIP疫苗组和灭活疫苗组的死亡率均显著低于阴性对照组(P<0.05),灭活疫苗组比SIP疫苗组得到了更高的免疫保护率,但两组的死亡率差异不显著(P>0.05)。说明罗非鱼无乳链球菌SIP微胶囊口服疫苗免疫效果好,在罗非鱼无乳链球菌病的免疫防治中有良好的应用前景。; 林楠; 关键词：罗非鱼无乳链球菌免疫相关基因免疫保护

“新吉富”罗非鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫效果评价上的应用: 2017年; 制备了"新吉富"罗非鱼血清免疫球蛋白IgM单克隆抗体(McAb)并进行了特性分析,以血清IgM McAb为基础,建立了IgM捕获ELISA检测方法.采用亲和层析法纯化健康"新吉富"罗非鱼IgM,纯化蛋白经SDS-PAGE检测,重链、轻链的相对分子质量分别为75~78、23~25 ku;以纯化的IgM为抗原制备IgM McAb,制备McAb杂交瘤细胞株系3株,分别命名为2H5、2D4、2B11,抗体亚型均为IgM,小鼠腹水效价分别为1.0×10^(-5)、1.0×10^(-4)、1.0×10^(-5),对IgM敏感度测定表明,2H5、2D4、2B11检测灵敏度分别为31.25、125.00、62.50 ng.以抗罗非鱼IgM McAb包被酶标板,建立IgM捕获ELISA检测方法.以无乳链球菌灭活疫苗免疫罗非鱼,受免血清按建立的IgM捕获ELISA方法检测特异性抗体,结果表明,建立的IgM捕获ELISA检测方法可应用于免疫应答抗体水平分析.; 吴斌; 关键词：单克隆抗体 ELISA检测方法

双重PCR检测罗非鱼源无乳链球菌方法的建立被引量：7: 2014年; 根据罗非鱼源无乳链球菌16SrRNA基因和sip基因序列,设计、合成2对特异性引物,通过对反应体系和反应条件优化,建立快速检测无乳链球菌的双重PCR方法。该方法扩增无乳链球菌可获得1 305bp和121bp 2个特异性片段;对6株链球菌属的菌株进行特异性分析,仅无乳链球菌能扩增出16SrRNA基因和sip基因2条特异性条带,而海豚链球菌无条带检出;经灵敏度试验,可检测到无乳链球菌菌株070717LL的最小量为1.05×102 CFU;同时,双重PCR可以检测出无乳链球菌菌株070717LL人工感染的罗非鱼脾、脑、肾组织中细菌DNA,特别是脾脏和肾脏组织的样品检测效果好。结果证明所建立的方法具有快速、特异性强、灵敏度高等优点,适用于对罗非鱼源无乳链球菌病的流行病学调查。; 樊海平吴斌张新艳邓志武郑磊钟全福曾占壮; 关键词：无乳链球菌 RRNA基因罗非鱼

罗非鱼无乳链球菌微胶囊口服疫苗的研制及其免疫效果被引量：4: 2016年; 为了建立罗非鱼无乳链球菌病免疫防控方法,以原核表达SIP（surface immunogenic protein）蛋白为芯材,天然多糖为壁材,制备罗非鱼无乳链球菌聚丙烯酸树脂Ⅱ微胶囊口服疫苗,SIP口服疫苗微胶囊颗粒平均直径约826.5μm,包封率为72.02%,载药量最高达6.11%。微胶囊包裹的SIP蛋白在5种缓冲液中释放效果：p H 6.80〉p H 7.20〉p H 9.18〉p H4.68〉p H 2.00。体外实验证实微胶囊颗粒在模拟胃酸环境中蛋白释放量极小,数值为395.5μg;而在模拟肠液中,释放量最高达5426.0μg,其中240 min释放量为4911.1μg,释放度达90.51%,说明微胶囊能避免胃酸的破坏且肠溶性好。SIP微胶囊口服疫苗以投喂的方式免疫＂新吉富＂罗非鱼,分别以每克罗非鱼体质量免疫5和10μg SIP蛋白的剂量分组测试,4次免疫过程中,5μg免疫剂量组特异性血清效价为100^–1~400^–1,10μg免疫剂量组特异性血清效价为200^–1~1600^–1。4次免疫后,攻毒实验表明,5和10μg的免疫剂量组的免疫保护率分别为44.45%和66.67%。研究表明,微胶囊口服疫苗免疫为罗非鱼无乳链球菌病的免疫防治提供方便、安全、有效的途径。; 吴斌樊海平张新艳郑磊钟全福张国庆翁祖桐; 关键词：罗非鱼无乳链球菌

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福建省海洋与渔业局重点项目([2010]2-12)

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