辽宁省教育厅基金资助项目(2004D186)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 结直肠癌细胞中白细胞介素-2和干扰素-β融合蛋白的表达及定位
- 2007年
- 目的研究白细胞介素-2和干扰素-β(IL-2/IFN-β)融合蛋白是否可以在肿瘤细胞中正常分泌表达、其在细胞中的定位情况以及是否能发挥生物学活性。方法中国医科大学附属盛京医院消化内科2003年4月至2005年6月应用真核表达质粒pcDNA3.1/HisA和绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1构建出真核表达质粒;用脂质体法将真核表达质粒转入结直肠癌Lovo细胞株[癌胚抗原(CEA)高表达]、Hela细胞(CEA不表达)。转染后分别以荧光显微镜、免疫印迹法等方法检测肿瘤细胞中目的蛋白的表达情况及定位情况。结果由CEA启动子调控的融合基因可在肿瘤细胞Lovo内表达出融合蛋白,且定位于细胞浆内,而在CEA不表达的Hela细胞中则不表达。结论IL-2/IFN-β转染后可以在肿瘤细胞中成功表达,CEA启动子可靶向性调控融合基因在肿瘤细胞的表达,保留其细胞因子的作用特点,并可能发挥抗肿瘤作用。
- 王艳李岩
- 关键词：癌胚抗原细胞因子基因治疗融合基因
- 癌胚抗原启动子调控的白细胞介素-2／干扰素β融合基因的原核及真核表达质粒的构建被引量：3
- 2006年
- 目的根据细胞因子间协同作用特点,构建人白细胞介素-2(IL-2)与干扰素(IFN)β的融合基因,并用癌胚抗原(CEA)基因启动子调控其在结肠癌细胞株中的靶向表达。方法分别用原核及真核表达载体,检测融合蛋白的表达情况。PCR、RT-PCR法扩增得到CEA启动子、IL-2 cDNA、IFNβ cDNA,应用原核表达质粒pGEX-5X-1、真核表达质粒pcDNA3．1／HisA、绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1,构建出原核表达质粒和真核表达质粒;SDS-PAGE电泳检测原核表达;用脂质体法将真核表达质粒转入结直肠癌细胞株 Lovo(CEA高表达)、HT-29(CEA低表达)和对照Hela细胞(CEA阴性),转染后分别以流式细胞仪、荧光显微镜、Western印迹等方法检测肿瘤细胞凋亡情况及蛋白表达情况。结果融合基因可在大肠杆菌及肿瘤细胞内表达融合蛋白;对肿瘤细胞有明显的杀伤作用;由CEA启动子调控的融合基因在Lovo细胞的表达高于HT-29细胞,在CEA阴性的Hela细胞中几乎不表达。结论 CEA启动子可靶向性调控融合基因在肿瘤细胞的表达,具有协同作用的细胞因子融合蛋白可能有更强的抗肿瘤作用。
- 王艳李岩崔刚封清川李小东李丰LI Hong-jie
- 关键词：癌胚抗原启动子融合基因
- 西洋参片对癫痫模型大鼠海马组织GFAP和Fos表达的影响及机制研究
- 2021年
- 目的探讨西洋参对癫痫模型大鼠海马组织神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Fos蛋白表达的影响,并分析其机制。方法40只6周龄左右清洁级Sprague Dawley雄性大鼠根据实验目的分为4组,分别为正常对照组、癫痫模型组、常规组和西洋参组,选择其中3组采用戊四氮腹腔注射建立癫痫模型,其中,正常对照组和癫痫模型组采用等量0.9%氯化钠溶液腹腔注射和灌胃,常规组实施50 mg/kg苯妥英钠腹腔注射,西洋参组在常规组基础上进行3 g/kg西洋参片灌胃,4组均连续治疗1个月。记录各组大鼠癫痫发作等级;分别于治疗前1 d、治疗后10 d以及治疗后1个月,采用水迷宫实验评估各组大鼠学习记忆能力,酶联免疫吸附试验试剂盒检测各组大鼠血清和海马组织中超敏C反应蛋白(hs-CRP)和热休克蛋白70(HSP-70)水平,免疫组织化学检测各组大鼠海马组织GFAP、Fos表达。结果治疗后,癫痫模型组、常规组和西洋参组大鼠癫痫分级间相比差异有统计学意义,西洋参组低等级(Ⅰ~Ⅱ级)癫痫大鼠占比显著高于癫痫模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前1 d~治疗后1个月,常规组和西洋参组大鼠滞留时长和穿过平台次数均随治疗时间延长而显著增加,血清hs-CRP和HSP-70水平均随治疗时间延长而显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后1个月,与正常对照组相比,其余3组癫痫大鼠滞留时长及穿过平台次数均显著减少,血清hs-CRP和HSP-70水平、海马组织GFAP和Fos阳性表达评分及hs-CRP和HSP-70水平均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与癫痫模型组相比,常规组和西洋参组大鼠滞留时长及穿过平台次数均显著增加,血清hs-CRP和HSP-70水平、海马组织GFAP和Fos阳性表达评分及hs-CRP和HSP-70水平均显著降低,且西洋参组也显著优于常规组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论西洋参片辅助干预可显著改善癫痫模型大鼠癫痫分级以及�
- 李娇健董岩郎朗刘海兵
- 关键词：癫痫西洋参胶质纤维酸性蛋白
