国家重点基础研究发展计划(2007CB947901)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 相关作者：卢光琇孙璇李工博石程王承艳更多>>
- 相关机构：中南大学密歇根大学北京大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 锌指蛋白297B协同Myocardin调节平滑肌细胞的分化被引量：4
- 2010年
- 目的探讨锌指蛋白297B在平滑肌细胞分化过程中的表达及相关机制。方法用定量实时多聚酶链反应检测锌指蛋白297B在人、大鼠和小鼠平滑肌细胞中体内/体外的表达量及在平滑肌细胞体内和体外分化或增殖过程中的表达变化;构建锌指蛋白297B-Myc表达质粒,免疫荧光检测锌指蛋白297B-Myc在大鼠平滑肌细胞中的表达分布;用荧光素酶活性检测及免疫共沉淀实验检测锌指蛋白297B与Myocardin的结合及相互作用。结果锌指蛋白297B在平滑肌细胞中特异性高表达,在小鼠胚胎干细胞向平滑肌细胞分化过程中表达上调,在血小板源性生长因子BB刺激的平滑肌细胞增殖过程中下调,在大鼠颈动脉球囊损伤内膜修复过程中表达先上调后下降。锌指蛋白297B主要分布于细胞核及核周的细胞质。锌指蛋白297B能与Myocardin蛋白结合,荧光素酶活性检测显示锌指蛋白297B的表达受Myocardin的调控。结论锌指蛋白297B可能在平滑肌细胞分化过程中起到重要正向调控作用,这一作用很可能是通过锌指蛋白297B与Myocardin的协同作用来完成。
- 孙璇卢光琇
- 关键词：MYOCARDIN平滑肌细胞分化
- 携带Bcl-xl基因的重组慢病毒的制备和鉴定
- 2010年
- 目的制备携带Bcl-xl基因的重组慢病毒,并鉴定其感染细胞有效性。方法从本所以前构建的重组质粒pAAV-Bcl-xl获得Bcl-xl基因的编码序列,将其置换掉慢病毒质粒pSin-EF2-SOX2-Pur中的SOX2基因编码序列,从而得到重组慢病毒质粒pSin-EF2-Bcl-xl-Pur。然后利用这一质粒包装制备了携带Bcl-xl基因的重组慢病毒颗粒,用其感染细胞后用Western blot和流式检测仪分析了感染前后细胞中Bcl-xl基因的表达情况。结果感染后细胞中Bcl-xl蛋白的表达水平显著高于感染前。结论携带Bcl-xl基因的重组慢病毒颗粒包装成功,能高效感染细胞,为后续的遗传改造树突细胞打下了基础。
- 李工博卢光琇
- 关键词：BCL-XL基因重组慢病毒树突细胞
- 小鼠多潜能干细胞来源的内皮细胞的基因表达及功能特点被引量：1
- 2010年
- 目的探讨小鼠成纤维细胞来源的多潜能干细胞向内皮细胞诱导分化的能力。方法采用单层贴壁诱导及流式细胞术进行Flk1+细胞分化与分选,进而与OP9基质细胞共培养,并用VE-cadherin为标志纯化内皮细胞(O9-EC);采用免疫荧光检测分化细胞的内皮细胞特异蛋白表达,检测分化的内皮细胞体外成血管能力,吞噬DiI-Ac标记的低密度脂蛋白和结合荆豆凝集素的功能;采用定量实时PCR检测分化过程中的基因表达。结果流式细胞仪分选得到的分化细胞能表达CD31、VE-cadherin、vWF等表面标志,吞噬DiI-Ac-LDL,结合荆豆凝集素,并能在matrigel上形成血管样结构。分化过程中内皮细胞特异性基因如CD31、Tie2、eNOS等表达上调,而Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc这四种诱导多潜能干细胞形成的转录因子的表达显著下调。结论多潜能干细胞能向内皮细胞诱导分化。
- 孙璇卢光琇
- 关键词：多潜能干细胞内皮细胞诱导分化VE-CADHERIN
- 人胚胎干细胞建系研究中的伦理管理被引量：2
- 2012年
- 目的:建立国人胚胎干细胞系递交国际干细胞库,并在此基础上建立既符合中国国情又得到国际认可的相关伦理管理体系。方法:在比尔盖茨基金会的资助下,与北京大学生命科学院再生生物学实验室合作,募集胚胎建立人胚胎干细胞系,在此过程中探讨可行的符合国际伦理原则的相关伦理管理机制。结果:成功建立了国人胚胎干细胞系及相关伦理管理体系。结论:进行干细胞研究时应充分重视伦理问题,国际干细胞伦理管理与中国相关伦理原则是可以有机结合的。
- 石程王承艳沈浣
- 关键词：胚胎干细胞
- 携带Bclxl基因的重组腺相关病毒的制备和鉴定
- 2010年
- 目的:制备携带Bclxl基因的重组腺相关病毒,并鉴定其感染细胞有效性。方法:抽提BALB/c小鼠脾脏总RNA,通过RT-PCR获得cDNA,然后设计引物通过PCR获得Bclxl基因的编码序列。将得到的Bclxl编码序列插入腺相关病毒质粒pAAV-MCS中的多克隆位点,从而构建出重组腺相关病毒质粒pAAV-Bclxl。将质粒转染细胞后使用Western Blot和流式分析检测Bclxl蛋白的表达。进一步包装制备了携带Bclxl基因的重组腺相关病毒颗粒,用其感染HT1080细胞后用流式细胞仪分析了感染前后细胞中Bclxl基因的表达情况。结果:质粒转染后细胞中Bclxl蛋白的表达水平显著高于转染前,病毒感染后细胞中Bclxl蛋白的表达水平显著高于感染前。结论:携带Bclxl基因的重组腺相关病毒颗粒包装成功,能高效感染细胞,为后续的遗传改造树突细胞打下了基础。
- 李工博彭炬卢光琇
- 关键词：重组腺相关病毒树突细胞
