江苏省卫生厅医学科技发展基金(H200328)
- 作品数：5 被引量：31H指数：4
- 相关作者：陈家存孙晓青李望郑骏年杨文发更多>>
- 相关机构：徐州医学院附属医院天津市泌尿外科研究所更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅医学科技发展基金国家自然科学基金卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNA干扰对肾癌细胞端粒酶基因表达和活性的抑制作用及其增殖、凋亡的影响被引量：7
- 2005年
- 目的探讨小干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞端粒酶基因表达、活性的抑制作用及对肾癌细胞增殖、凋亡的影响。方法将针对人端粒酶RNA(hTR)模板区的siRNA(100nmol/L)转染肾癌7860细胞,采用RTPCR检测7860细胞端粒酶mRNA表达,端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学TUNEL法检测细胞凋亡。结果hTRsiRNA处理组7860细胞端粒酶mRNA表达(40.7±1.5)%降低,端粒酶活性(32.7±2.3)%降低,细胞增殖抑制率(63.6±1.6)%增加,凋亡细胞阳性率(39.4±0.6)%增加。分别与阴性siRNA对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论siRNA能抑制人肾癌细胞端粒酶mRNA表达及活性,进而抑制其增殖、促进其凋亡,有望成为肾癌基因治疗的有效工具。
- 李望郑骏年孙晓青陈家存曹敬毅杨文发
- 关键词：RNA干扰肾癌细胞端粒酶基因表达
- Ki-67基因siRNA表达质粒的构建、鉴定及功能研究被引量：12
- 2005年
- 目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用,探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67siRNA对应模板DNA序列,煺火处理后克隆至pSliencer3.1质粒,构建重组质粒pSliencer-Ki-67。将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786-0细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westernblot检测Ki-67表达。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功。其可显著抑制786-0细胞Ki-67mRNA、Ki-67蛋白表达。结论成功构建的Ki-67siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达。
- 郑骏年马腾骧孙晓青陈家存温儒民曹敬毅杨文发李望刘俊杰
- 关键词：表达质粒786-0细胞BLOT检测癌基因治疗增殖基因
- 小干扰RNA阻抑人端粒酶催化亚基基因表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：6
- 2005年
- 郑骏年李望孙晓青陈家存温儒民曹敬毅杨文发马腾骧
- 关键词：人端粒酶催化亚基癌细胞增殖基因表达786-0细胞
- RNA干扰对肾癌细胞端粒酶活性及增殖、凋亡的影响被引量：3
- 2007年
- 目的探讨针对人端粒酶RNA(hTR)及其催化亚基(hTERT)的小干扰RNA(siRNA)对肾癌细胞端粒酶活性及其增殖、凋亡的影响。方法将hTR-siRNA、hTERT-siRNA(100nmol/L)单独或联合转染人肾癌786-0细胞,采用RT-PCR法检测hTR、hTERTmRNA表达,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。结果(1)hTR-siRNA可显著降低786-0细胞hTRmRNA表达(P<0.01),hTERT-siRNA可显著降低hTERTmRNA表达(P<0.01),但彼此互不影响。(2)二者均能显著抑制端粒酶活性(P<0.01,P<0.01),并增加786-0细胞增殖抑制率及凋亡细胞阳性率(P<0.01,P<0.01)。二者联合应用与单独应用差异亦无显著性(P>0.05)。结论hTR、hTERTsiRNA通过抑制各自基因表达,抑制人肾癌细胞端粒酶活性,进而抑制增殖、促进凋亡。
- 郝林郑骏年李望杨文发刘俊杰温儒民陈家存孙晓青
- 关键词：肾癌小干扰RNA端粒酶RNA端粒酶逆转录酶
- 人端粒酶逆转录酶基因RNAi表达载体的构建、鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的构建端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法化学合成能编码针对hTERT基因的短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,退火处理后克隆到pSilencer1.0-U6 shRNA表达载体的U6RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)启动子的下游,构建重组RNAi质粒pSliencer-hTERT。结果经酶切电泳及测序分析证实,目的序列成功插入到预计位点。结论已成功构建pSliencer-hTERT载体,为进一步研究其对端粒酶活性的抑制作用打下基础。
- 毛立军郑骏年李望郑宏祥刘俊杰孙晓青陈家存温儒民
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA重组质粒
