国家自然科学基金(30400356)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
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- 巯基乙酸对爪蟾卵母细胞体外孤雌激活的影响及其机制研究
- 2010年
- 目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对钙离子载体A23187诱导的非洲爪蟾卵母细胞体外孤雌激活的影响,探讨孤雌激活的机制。方法:体外孕酮诱导爪蟾卵母细胞成熟后,选取MII期细胞用不同浓度TGA(0、5、25、125μg/ml)处理2h,再用钙离子载体A23187诱导激活,在加入激活剂后不同时间(0、10、20、30、60min)记录激活的卵母细胞数量,计算其激活率;加入激活剂后60min收集卵母细胞,进行荧光染色观察原核形成情况;采用Western Blotting检测CyclinB2、Mos、p-ERK1/ERK1的表达。结果:不同浓度的TGA均降低非洲爪蟾卵母细胞的孤雌激活率,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);激活后对照组卵母细胞在动物极中央形成一个圆形的受精斑,而TGA125μg/ml处理后形成的受精斑形状不规则且周围毛糙不齐;荧光染色发现对照组细胞中有清晰的原核形成,而TGA处理组则未发现;WesternBlotting分析结果显示,经TGA处理可抑制CyclinB2、Mos、p-ERK1在孤雌激活时的降解。结论:TGA可以抑制钙离子载体A23187诱导的非洲爪蟾卵母细胞体外孤雌激活,其作用机制可能与干扰成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在孤雌激活时的正常降解有关。
- 任晓梅夏蕾王栋张岭侯绍英赵巍吴坤
- 关键词：巯基乙酸卵母细胞孤雌激活
- 经皮染毒巯基乙酸对昆明小鼠排卵及体内卵母细胞成熟的影响
- 2009年
- 背景与目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对昆明小鼠排卵以及卵母细胞体内成熟的影响。材料与方法:选取昆明小鼠12只,按体重随机分成4组,每组3只,分别为对照组和TGA高(151.25 mg/kg)、中(75.625 mg/kg)、低(37.812 5 mg/kg)3个剂量组。给小鼠皮肤染毒TGA的同时腹腔注射10 IU人绒毛膜促性腺激素(hCG),14 h后,处死小鼠收集卵母细胞进行小鼠排卵计数,采用免疫荧光染色法观察成熟卵母细胞内纺锤体与皮质颗粒(cortical germinal,CG)的分布。结果:TGA高、中剂量组排卵数明显低于对照组及低剂量组(P<0.01及P<0.05);对照组和低剂量组小鼠卵母细胞纺锤体呈双极状,中、高剂量组纺锤体逐渐呈桶状,形态发生了明显改变,且随着TGA剂量的增加,纺锤体的面积有增加趋势;TGA对CG的膜下分布以及无皮质颗粒区(cortical germinal freedomain,CGFD)的形成在形态上没有明显影响。结论:经皮肤给TGA能抑制小鼠排卵,并对卵母细胞成熟有一定影响。
- 夏蕾侯绍英张岭赵艳
- 关键词：巯基乙酸卵母细胞纺锤体皮质颗粒排卵
- 巯基乙酸对小鼠成熟卵母细胞皮质颗粒分布和MAPK活性的影响被引量：2
- 2008年
- 背景与目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对小鼠卵母细胞胞浆成熟和相关生化指标的影响。材料与方法:以不同浓度TGA(0.2、1.0、2.5mmol/L)体外培养小鼠卵母细胞,并设M16培养液对照组,培养16h后在体视显微镜下,观测卵母细胞生发泡破裂和第一极体排出情况,用免疫荧光染色方法对皮质颗粒(cortical granules,CGs)进行标记,采用western blot方法对p44/42MAPK进行检测。结果:各组生发泡破裂率均达到90%左右,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。随着TGA剂量的增加,第一极体排出率下降,各剂量组和对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。各剂量组均可观察到CGs在细胞膜下的线状排列,但随着TGA剂量的增加,质膜下CGs的密度降低,胞浆中CGs的密度有增加的趋势。对照组卵母细胞中有非常明显的无皮质颗粒区(cortical granules freedomain,CGFD)形成,0.2mmol/L组也形成了CGFD,但1.0mmol/L和2.5mmol/L两个剂量组未观察到CGFD。1.0mmol/L和2.5mmol/LTGA可抑制p44/42MAPK的活化。结论:TGA可影响小鼠卵母细胞细胞质成熟和MAPK的活性,具有一定的生殖毒性。
- 侯绍英张岭吴坤夏蕾
- 关键词：巯基乙酸皮质颗粒MAPK小鼠
- 巯基乙酸对孕酮诱导爪蟾卵母细胞体外成熟过程中MAPK和MPF激酶活性的影响被引量：3
- 2008年
- 背景与目的:探讨巯基乙酸(TGA)对孕酮诱导爪蟾卵母细胞体外成熟过程中丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)和成熟促进因子(MPF)蛋白激酶活性的影响。材料与方法:用0、5、25和125μg/ml浓度的TGA分别处理经孕酮诱导的体外培养爪蟾卵母细胞,另设不含孕酮的阴性对照组,于处理4h和8h收集卵母细胞进行Western Blotting检测,观察p_Erk1/Erk1蛋白、p_RSK蛋白、Cdc2、p_Cdc2和Cyclin B1蛋白的表达情况。结果:TGA处理爪蟾卵母细胞4h后,Erk1蛋白的磷酸化水平(即MAPK的活性水平),较对照组明显增加(P<0.05);MAPK的活性底物p_RSK蛋白的表达也增加(P<0.05);同时伴随着p_Cdc2表达水平的下降和Cyclin B1蛋白表达的增强(P<0.05)。TGA处理8h后Erk1蛋白磷酸化水平和p_RSK蛋白含量与对照组相比无明显差异(P>0.05),但此时TGA组p_Cdc2水平明显增加(P<0.05),Cyclin B1蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:在孕酮诱导的爪蟾卵母细胞体外成熟早期,TGA可促进MPF和MAPK蛋白激酶及其底物p_RSK的活化;在成熟的晚期,TGA对MAPK活性无明显影响,但明显抑制MPF活性。TGA影响MPF活性的可能机制是降低CyclinB1蛋白水平。
- 张岭侯绍英吴坤夏蕾
- 关键词：巯基乙酸丝裂原激活蛋白激酶成熟促进因子
- 巯基乙酸对爪蟾卵母细胞体外核成熟的影响被引量：1
- 2009年
- 背景与目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对孕酮诱导的爪蟾卵母细胞核成熟的影响。材料与方法:用不同浓度的TGA(5、25、125μg/ml)在体外预处理爪蟾卵母细胞2 h后,再用孕酮诱导成熟,实验并设不经TGA预处理的对照组。在培养过程中观察卵母细胞的外观和核形态,以判断生发泡破裂(GVBD)情况;在培养结束时(加入孕酮后8 h),收集卵母细胞进行荧光染色,观察染色体的状态。结果:经不同浓度TGA处理后卵母细胞的GVBD50明显缩短,与对照组比较均具有统计学意义(P均<0.05),说明TGA加快卵细胞GVBD的发生;荧光染色观察GV期卵母细胞未见凝集的染色体,第一次减数分裂中期细胞可见赤道板形成,第二次减数分裂中期细胞除染色体赤道板外,还可见第一极体(PB1)。经25 mg/ml和125 mg/ml浓度的TGA处理后,排出PB1的爪蟾卵母细胞比例明显降低(P<0.05),即抑制了MI--MII转变和第一极体的释放。结论:TGA可抑制孕酮诱导的爪蟾卵母细胞体外成熟。
- 夏蕾张岭侯绍英王栋任晓梅
- 关键词：巯基乙酸卵母细胞
- 巯基乙酸对非洲蟾蜍和小鼠卵母细胞体外减数分裂成熟的影响被引量：6
- 2007年
- 目的探索巯基乙酸(TGA)对非洲蟾蜍和小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法用0μg/ml、5μg/ml、25μg/ml和125μg/mlTGA处理非洲蟾蜍卵母细胞,体外培养,并观察生发泡破裂(GVBD)发生情况。用0μg/ml、5μg/ml和50μg/ml的TGA处理小鼠卵母细胞,体外培养,观察GVBD和第一极体(PB1)释放的情况。结果在非洲蟾蜍卵母细胞中,TGA处理2h、4h和6h后,各TGA处理组的GVBD率均高于对照组,但在8h时,TGA处理组与对照组GVBD率之间无统计学差异。在小鼠卵母细胞中,仅12h时5μg/ml组的GVBD率高于对照组,但在各时间点,TGA处理组的GVBD率都有增加趋势;在16h,5μg/ml和50μg/mlTGA处理可促进PB1释放,但与对照组相比,仅5μg/ml组有统计学意义。结论结果表明,TGA可促进非洲蟾蜍卵母细胞第1次减数分裂的启动。在小鼠中卵母细胞中,低剂量的TGA也可加速第1次减数分裂的启动。低剂量的TGA可增加小鼠卵母细胞的成熟率;但高剂量的TGA却没有明显的促进作用,推测TGA对小鼠卵母细胞成熟的影响可能存在双重性。
- 夏蕾张岭侯少英吴坤
- 关键词：卵母细胞减数分裂
- 巯基乙酸对小鼠MⅠ/MⅡ期卵母细胞进程及结构的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨巯基乙酸(TGA)对卵母细胞体外成熟的影响。方法采用小鼠卵母细胞体外成熟和免疫荧光染色法,观察巯基乙酸处理后小鼠MⅠ/MⅡ期卵母细胞的成熟进程和形态结构。结果对照组、0.005mg/mlTGA组和0.020mg/mlTGA组生发泡破裂率分别为48.67%、62.67%和56.00%,第一极体排出率分别为26.47%、65.96%和45.24%,0.005mg/ml处理组第一极体排出率高于对照组和0.020mg/ml组,差异有统计学意义(P<0.05)。随着TGA处理剂量的增加,卵母细胞纺锤体和染色体形态结构异常的细胞比例和异常程度增加,0.020mg/mlTGA处理组与对照组有显著性差异。结论巯基乙酸可促进卵母细胞体外减数分裂的重启和成熟,但中期卵母细胞的纺锤体及染色体有结构缺陷,对后续胚胎发育可能会产生潜在影响。
- 侯绍英张岭吴坤夏蕾
- 关键词：巯基化合物卵母细胞毒性作用
