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排序方式：

pE_6/p53/GFP重组真核表达载体的构建及其对肺腺癌细胞周期的影响被引量：2: 2007年; 目的构建放射诱导启动子序列所调控的wt-p53抑癌基因的真核表达载体pE6-p53/GFP,并研究其功能。方法全基因合成方法获得放射敏感性增强子E6;PCR法从pcDNA3.1(+)/p53质粒中扩增p53cDNA全长序列;双酶切IRES2-EGFP双顺反子表达载体,获得IRES2-EGFP报告基因片段,以pCI-neo为载体构建重组pE6/p53/GFP。重组体经双酶切、测序鉴定其正确性。采用脂质体法将重组质粒转染H1299(p53-/-)细胞,G418筛选出稳定表达细胞株。RT-PCR分析基因整合;Western blot方法分析不同放射剂量后P53蛋白表达情况及持续时间;流式细胞技术分析E6对肺腺癌细胞周期的影响。结果正确构建pE6/p53/GFP重组质粒,并在被转染细胞核内检测到p53基因表达;4Gy照射12h后p53基因表达显著增强;放疗后转染组细胞发生显著G1期阻滞,克隆形成率下降。结论成功构建了放射反应元件E6控导的pE6/p53/GFP重组质粒。; 毛丽伟王卫东李德志陈正堂; 关键词：WESTERN BLOT

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国家自然科学基金(30570544)