东莞市科技计划项目(201010815209)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 相关作者：庞实锋付宏岐薛萍史俊卿辛梅更多>>
- 相关机构：渭南职业技术学院广东医学院更多>>
- 发文基金：东莞市科技计划项目教育部科学技术研究重点项目广东省湛江市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 马铃薯X病毒载体介导的人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)在烟草中的表达被引量：4
- 2013年
- 【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的hFGF21-smGFP融合基因和hFGF21基因克隆进PVX表达载体,构建重组表达质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。采用冻融法将质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP、pgR107-smGFP和pgR107-His-hFGF21转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟的叶片,采用SDS-PAGE、Western blotting和ELISA检测hFGF21-smGFP和hFGF21蛋白的表达情况。烟草叶片表达的融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,再用重组牛肠激酶(rbEK)裂解,获得纯度较高的重组hFGF21活性蛋白。hFGF21调节葡萄糖吸收活性用微量化的GOD-POD法检测。【结果】成功构建了植物病毒双元表达载体pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。表型观察发现,侵染第7天,烟草外源蛋白积累最高,smGFP和hFGF21-smGFP蛋白的积累主要在细胞质中。SDS-PAGE、Western blotting和ELISA分析表明,hFGF21重组蛋白可在烟草中有效表达,表达量高达500μg/g(鲜叶质量)。生物活性检测结果表明,纯化的hFGF21蛋白可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的吸收。【结论】利用PVX病毒载体,在本氏烟草中表达的重组hFGF21蛋白具备生物活性。
- 付宏岐薛萍杨莉芳庞实锋
- 关键词：融合蛋白烟草马铃薯X病毒
- 红花茎尖微嫁接技术研究被引量：5
- 2012年
- 目的探讨红花茎尖微嫁接技术,为解决转基因红花植株生根困难问题提供一个新的途径。方法光照条件下培养红花实生苗用作砧木,以红花组培苗茎尖为接穗,采用劈接法和顶接法进行茎尖微嫁接试验,并对影响嫁接成活率的因素进行研究。结果成功获得了红花茎尖微嫁接苗,并优化了嫁接的条件:选取苗龄为14 d的红花实生苗为砧木,嫁接成活率较高;采用劈接法进行茎尖微嫁接,效果较好,嫁接成活率可达56.7%,而顶接法成活率仅为16.7%。结论本研究建立了红花茎尖微嫁接的方法,获得了嫁接成活苗。
- 付宏岐辛梅宋金东薛萍史俊卿庞实锋
- 关键词：红花成活率
