国家自然科学基金(81202239)
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 相关作者：龚春梅周继昌庄志雄刘小立莫俊銮更多>>
- 相关机构：深圳市慢性病防治中心深圳市疾病预防控制中心中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 维生素E对纳米二氧化硅诱导人支气管上皮细胞损伤的保护作用被引量：2
- 2016年
- 目的探讨纳米二氧化硅(nano-SiO_2)暴露对人支气管上皮细胞(16 HBE)的损伤作用及维生素E对其的保护作用。方法根据CCK-8细胞毒性结果,选取对照,微米级SiO_2(micro-SiO_2,20μg/ml)、纳米nano-SiO_2(5、10和20μg/ml)和维生素E(20μg/ml nano-SiO_2+50μmol/L维生素E)处理16 HBE细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞形态改变,Hochest 33342和膜联蛋白V-碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,RNA酶A消化和PI染色来检测细胞周期分布。结果当nano-SiO_2浓度达10μg/ml时,细胞活力明显降低(P<0.05),随着nano-SiO_2浓度进一步增高,细胞活力呈剂量依赖性降低;细胞体积缩小,核固缩,细胞的折光性减弱。随着nano-SiO_2浓度的增加,凋亡率呈剂量依赖性升高;而维生素E组较20μg/ml nano-SiO_2组,细胞凋亡率有所降低;细胞周期出现轻微的G1期阻滞,维生素E可以改善这种阻滞现象。结论维生素E干预对由于nano-SiO_2引起的16 HBE的凋亡及细胞周期改变具有一定的保护作用。
- 龚春梅杨亚蕊周继昌朱玉梅庄志雄刘小立
- 关键词：维生素E纳米二氧化硅人支气管上皮细胞细胞周期
- 纳米二氧化硅对HaCaT细胞中PAPR-1基因表达及其启动子甲基化的影响
- 2015年
- 目的研究纳米二氧化硅（nm—SiO2）对人皮肤表皮细胞系（HaCaT）细胞中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（poly[ADP-ribose]polymerase 1，PARP-1）基因的表达及其基因启动子区甲基化的影响。方法分别以2．5、5．0、10．0μg／ml的nm-SiO2溶液和10μg／ml的微米级SiO2（micro-SiO2）溶液处理HaCaT细胞24h；以3μmol／LDNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-aza—CdR，DAC）处理48h10μg／ml的HaCaT细胞为阳性对照（DAC组），并设立溶剂对照组（CTRL组）。应用荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）和蛋白质印迹法（Western-blot法）检测PARP-1在mRNA水平和蛋白水平的表达变化，应用亚硫酸氢盐测序（bisulfite pyrosequence，BSP）法检测PARP-1基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果HaCaT细胞暴露nm-SiO224h后，经nm-SiO2处理后，micro-SiO2染毒组和2．5μg／ml染毒组PARP-1表达与CTRL组的差异无统计学意义（P〉0．05），与CTRL组比较，5、10μg／ml染毒组及DAC处理组细胞的PARP-1表达下调，差异有统计学意义（P〈0．05），且其下调水平随着浓度的增大而增高。BSP结果显示PARP-1启动子区-229点甲基化状态升高。结论nm-SiO2可以降低HaCaT细胞中PARP-1基因的表达，可能与其对PARP-1基因启动子区CpG岛的甲基化影响有关。
- 龚春梅杨淋清周继昌陶功华刘小立庄志雄
- 关键词：基因表达
- 纳米二氧化硅对HaCaT细胞中p53基因表达及其启动子甲基化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的研究纳米二氧化硅(nm-SiO2)对人皮肤表皮细胞(HaCaT)中p53基因的表达及基因启动子区甲基化的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml的nm-SiO2溶液和10μg/ml的微米级SiO2(micro-SiO2)处理HaCaT24h;以3μmol/LDNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理48h的10μg/mlnm-SiO2组为阳性对照,并设立溶剂对照组。应用荧光定量PCR检测p53基因mRNA水平的表达,Western-blot法检测其蛋白水平的变化,应用甲基化特异性PCR(MSP)检测p53基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果nm-SiO2作用24h后,HaCaT细胞中p53基因表达呈上调趋势并且p53启动子区未检测出甲基化状态。结论nm-SiO2暴露可以上调HaCaT细胞中p53基因的表达,尚未发现这种上调与p53基因启动子区CpG岛的甲基化水平改变有关。
- 龚春梅杨淋清周继昌朱玉梅莫俊銮徐远飞刘小立庄志雄
- 关键词：纳米二氧化硅P53HACAT细胞DNA甲基化
- 纳米材料表观遗传学效应的研究进展
- 2020年
- 随着纳米科技的发展和纳米材料的广泛应用,人们暴露于纳米材料的机会日益增多,对其所引起的表观遗传学效应的研究也逐渐增多。纳米材料介导的体外表观遗传学效应与其种类、性质和处理条件等有关。纳米银可使细胞基因组整体甲基化水平升高且具有浓度效应关系;氧化锌、氧化钛和结晶型二氧化硅纳米颗粒会降低基因组整体甲基化水平;碳纳米管(NT)仅发现有特异基因甲基化作用。同时,DNA甲基化酶的水平也受纳米材料影响。纳米材料介导的组蛋白修饰作用多为乙酰化和磷酸化,并受到其电荷和存在状态(晶体,非晶体)的影响。对于纳米材料诱导的微RNA(miRNA)表达变化的研究,多采用高通量方法,差异表达的miRNA结果异质性大,且会受到纳米材料粒径、表面电荷、处理时间和浓度的影响。在体实验仅有纳米材料介导的甲基化和miRNA表达水平相关的研究,且多为长期重复暴露实验,除与体外实验结果相似外,还发现了纳米材料所致甲基化水平改变具有可逆性和组织特异性,对幼龄大鼠和(或)小鼠的效应更强。尽管近年来发表了许多有关纳米材料表观遗传学效应的研究,但有些结果还不确定,其是否具有可遗传性仍有待研究。本文综述了纳米材料对DNA甲基化、组蛋白修饰和miRNA表达水平的影响,希望能为纳米材料表观遗传学效应的研究提供参考。
- 荀佳雨严俊霞龚春梅
- 关键词：纳米材料表观遗传DNA甲基化组蛋白修饰微RNAS
- 短期暴露于纳米SiO2对HaCaT细胞基因组DNA甲基化的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨纳米SiO2对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml纳米SiO2溶液和10μg/ml微米级SiO2处理人皮肤表皮细胞系(HaCaT)24h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理48 h的10μg/ml组为阳性对照,并设立溶剂对照组。应用高效毛细管电泳(HPCE)定量分析纳米SiO2处理细胞24h后,基因组DNA总体甲基化的变化,用Q-PCR和Western Blot方法检测甲基化相关蛋白mRNA和蛋白的表达变化,并用DNA甲基化转移酶活性试剂盒检测DNA甲基化转移酶的活性。结果 HPCE定量分析结果显示纳米SiO2可引起HaCaT细胞总体甲基化程度降低,呈剂量依赖性关系;与正常细胞相比,微米SiO2以及2.5、5和10μg/ml纳米SiO2组分别降低37.8%、43.9%、54.9%和52.8%,差异有显著性(P<0.05);对照组5-aza-dC处理后使HaCaT细胞甲基化程度减少27.3%。各组酶的蛋白表达与mRNA表达水平及DNMTs活性变化具有相同的变化趋势,经纳米SiO2处理的HaCaT细胞,DNMT1、DNMT3a及MBD2表达随着纳米SiO2剂量的上升而下降,DAC组表达水平最低。结论纳米SiO2能引起HaCaT细胞整体基因组DNA甲基化水平降低,可能与DNA甲基化转移酶的酶活性降低有关。
- 龚春梅杨淋清陶功华刘庆成刘建军庄志雄
- 关键词：DNA甲基化纳米SIO2
- 短期暴露于纳米SiO2对HaCaT细胞基因组DNA甲基化的影响
- 目的探讨纳米SiO2对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml纳米SiO2溶液和10μg/ml微米级SiO2处理人皮肤表皮细胞系(HaCaT)24h;以3μmol/LDNA甲基化...
- 龚春梅杨淋清陶功华刘庆成刘建军庄志雄
- 关键词：DNA甲基化纳米SIO2
- microRNA与肺癌发生发展关系的研究进展被引量：4
- 2015年
- 微小核糖核酸（microRNA,miRNA）是一类由大小为19~24个核苷酸（nucleotide,nt）构成的非编码小分子RNA,广泛存在于真核生物中。研究发现,miRNA通过调控相应靶基因的表达等多种途径参与癌症的发生发展等一系列过程,其中部分miRNA的靶基因已经成为治疗癌症的靶向基因。肺癌是世界范围内发病率与病死率均居首位的恶性肿瘤,目前缺乏理想的早期诊断手段及有效的治疗方法。目前大量研究表明,miRNA表达异常与肺癌的发生发展密切相关。本文就miRNA与肺癌发生发展关系的研究新进展作一综述。
- 杨亚蕊何云龚春梅
- 关键词：肺癌MICRORNA发病机制
- Effects of RNA Interference to Selenoprotein V Gene on Cytobiological Behaviors in Human Malignant Melanoma A375 Cells
- To investigate the effects of RNA interference to selenoprotein V(SELV) gene on cytobiological behaviors in hu...
- HOU BinZHOU Ji ChangGONG ChunmeiXU YuanfeiZHONG YanSHEN XiuhuaLIU Xiaoli
- 文献传递
- 纳米Si02暴露对人支气管上皮细胞microRNA表达水平的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨纳米SiO2短期及长期暴露对人支气管上皮细胞（16HBE）microRNA（miRNA）表达水平的影响。方法分别以5、10、15、20、25、30、40ug／ml纳米SiO2溶液处理16HBE细胞24h，采用CCK．8法检测细胞活性，并计算细胞增殖活性抑制率及半抑制浓度（IC50）。以10ug／ml纳米SiO2溶液处理16HBE细胞至第10代（P10）和30代（P30），作为长期染毒组，并设立对照组（P〈0）；以1／4IC50、1／2IC50IC50浓度的纳米SiO2溶液和IC50浓度的微米SiO2溶液处理16HBE细胞24h，作为短期染毒组，并设立无血清培养液组为对照组。用安捷伦miRNA微阵列芯片筛选P〈0、P10、P30组细胞差异表达的miRNA，并用逆转录荧光定量聚合酶链式反应（qRT—PCR）方法验证短期及长期染毒组与对照组miRNA的表达差异。结果纳米SiO2溶液染剂量为5、10、15、20、25、30、40ug／ml的16HBE细胞增殖活性抑制率分别为：（-3．33＋3．80）％、（20．40±11．73）％、（39．08±5．53）％、（55．10±5．78）％、（66．42±9．60）％、（71．67±7．34）％、（81．43±5.37）％（F：129．11，P〈0．001）；IC50（95％Cl，）为18．35（15．82～20．72）ug/ml。长期染毒组中，Pi0、P30及PO细胞的miRNA-494—3p表达水平分别为0．45±0．08、0．28±0．07和1．00（F=60．77，P〈0．001）；miRNA．19a．3p表达水平分别为2．27±0．45、1．06±0．19和1．00（F=30．05，P〈0．001）；miRNA．148b．3p的表达水平分别为1．78±0．29、0．88±0．19和1．00（F=30．23，P〈0．001）。短期染毒组中，5、10、20ug／ml纳米SiO2溶液及20tLg／ml微米SiO2溶液染毒组的miRNA-494—3p表达水平分别为0．99±0．04、1．38±0．19、2．13±0．14、0．81±0．25（F=57．03，P〈0．001）；miRNA．19a-3p的表达水平分别为0．91±0．03、1．12±0．03、0．53±0．0l、0．86±0．01（F=408．78，P〈0．001）；miRNA-148b-3p的表达水平分别为0．95±0．02
- 杨亚蕊何云龚春梅周继昌朱玉梅莫俊銮
- 关键词：上皮细胞微RNAS微阵列芯片逆转录聚合酶链反应
- RNA干扰硒蛋白V基因对人恶性黑色素瘤细胞A375生物学行为的影响（英文）
- 2014年
- 目的体外观察sh RNA靶向干扰硒蛋白V(SELV)基因对人恶性黑色素瘤A375细胞生物学行为的影响。方法构建以SELV为靶基因的sh RNA表达载体,将其转染至体外培养的A375细胞中,并利用嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。采用实时荧光定量反转录PCR(q RT-PCR)和Western blotting法分别检测转染细胞SELV的m RNA和蛋白表达水平;采用MTT法检测转染后细胞的增殖能力,并利用流式细胞术检测转染细胞的细胞周期和早期凋亡率。采用q RT-PCR和ELISA法对转染细胞的SELV功能相关因子含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族9(ASB9)和O-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)的表达情况进行检测。结果成功构建靶向SELV的sh RNA重组质粒,并获得稳定转染的A375细胞。转染后SELV的表达显著降低(P<0.05),细胞增殖和细胞周期未发生明显变化,但细胞早期凋亡率显著增加(P<0.05)。而转染细胞的ASB9和OGT表达量也明显增加(P<0.05)。结论靶向SELV的sh RNA重组质粒能够下调SELV在A375细胞中的表达,提高细胞早期凋亡率,并导致ASB9和OGT的表达升高。
- 侯彬周继昌龚春梅徐远飞刘小立钟燕沈秀华
- 关键词：RNA干扰
