国家自然科学基金(81372718) 作品数:8 被引量:14 H指数:3 相关作者: 龚爱华 周海浪 张丽 徐刚 朱丽华 更多>> 相关机构: 江苏大学 江苏大学附属医院 镇江市第一人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 镇江市科技支撑计划(社会发展)项目 江苏省普通高校研究生科研创新计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
敲低LDHA抑制脑胶质瘤细胞生长和EMT的研究 被引量:2 2017年 该研究旨在探讨乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)基因对脑胶质瘤细胞上皮细胞–间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)以及细胞生长的影响。用sh-LDHA质粒转染脑胶质瘤细胞,比色法检测细胞内LDHA活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,CCK-8法和克隆形成实验分析细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力,q-PCR检测LDHAm RNA水平,以及Western blot检测LDHA和EMT相关蛋白质水平。结果表明,转染sh-LDHA质粒能显著降低LDHA m RNA和蛋白质水平。同时,敲低LDHA诱导U87MG细胞发生凋亡,LDHA活性降至原来水平的50%U87MG细胞的增殖和迁移能力低于sh-EGFP组(P<0.05)。另外,敲低LDHA抑制U87MG细胞的EMT过程。而在LDHA表达水平相对较低的U251MG和SW1783细胞中,干扰LDHA对细胞生长和EMT没有显著影响。该研究结果说明,LDHA在脑胶质瘤细胞的EMT过程和生长中发挥了重要作用。 彭光泉 韩秀 陈曦 唐宇 程洁 熊二梦 彭琬昕 龚爱华关键词:脑胶质瘤 EMT 天麻素对癌痛模型小鼠热痛觉过敏阈值的影响 被引量:4 2015年 目的:观察天麻素对小鼠转移性肿瘤诱发癌痛的镇痛作用。方法:将小鼠乳腺癌4T1细胞皮下注射于8周龄雌性Balb/c系小鼠足趾部建立肿瘤诱发癌痛模型;取小鼠35只,随机分为5组:对照组,溶剂组,低、高剂量天麻素组(90,180 mg/kg)和吗啡组(10 mg/kg),于肿瘤细胞接种后第11天,分别于局部注射给药后15,30,60,90,120,150和180 min行热痛觉过敏试验并进行比较。结果:给药后90 min,低剂量天麻素组小鼠热痛觉过敏阈值由给药前(3.63±0.33)s提高至峰值(6.19±0.23)s;高剂量天麻素组由给药前(3.83±0.14)s提高至峰值(6.97±0.33)s,但两组阈值增加幅度均明显低于吗啡组(P<0.01,P<0.05)。结论:天麻素对癌性疼痛可产生明确镇痛作用,其效果弱于吗啡。 王华 邵东华 马鹏关键词:天麻素 癌痛 镇痛 吗啡 Notch信号通路相关微小RNA在胶原蛋白诱导的关节炎小鼠免疫细胞中的表达 被引量:1 2018年 目的研究胶原蛋白诱发关节炎(CIA)小鼠T细胞中Notch信号通路相关微小RNA(miRNA)的表达情况。方法用牛Ⅱ型胶原蛋白和佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA小鼠模型,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞术分选CIA小鼠和正常对照小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4^+T细胞和CD8^+T细胞。实时荧光定量PCR检测PBMC及T细胞中Notch信号通路相关miRNA分子的表达水平。结果与正常对照相比,CIA小鼠PBMC中miR-200b-3p、miR-30c-5p、miR-30b-5p及miR-23b-3p的表达水平均明显降低,miR-200b-3p、miR-30c-5p及miR-30b-5p在CIA小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4^+T细胞和CD8^+T细胞中的表达与正常对照相比未见明显差异,而CIA小鼠外周血、脾脏CD4^+T细胞中miR-23b-3p的表达水平显著低于正常对照小鼠,外周血CD4^+T细胞中的miR-23b-3p来源于脾脏。结论 miR-23b-3p可能参与Notch信号对CIA小鼠T细胞的免疫调控。 王琨 王琨 朱波 朱波 朱丽华 熊御云关键词:NOTCH 蛋白质精氨酸甲基转移酶1促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力(英文) 2017年 该文探讨了蛋白质精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltranserase 1,PRMT1)对胰腺癌细胞迁移和增殖的影响。在数据库中分析了PRMT1在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达。用Western blot和Real-time PCR实验检测不同胰腺癌细胞中PRMT1的基础表达量。在Pa Tu8988和Bx PC3细胞中干扰PRMT1,Western blot、q PCR检测sh RNA干扰效率;CCK-8检测细胞增殖活性;平板克隆法检测细胞克隆形成能力;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot检测细胞EMT(epithelial-mesenchymal transition)相关蛋白变化。相反,在SW1990细胞中过表达PRMT1,并做上述同样的实验进行检测。结果显示,PRMT1在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织。在胰腺癌细胞中下调PRMT1的表达,可以抑制细胞的增殖和迁移能力,增高上皮标志物E-钙黏蛋白的水平,降低间质标志物N-cadherin钙黏蛋白的水平。上调PRMT1的表达得到相反的结果。结果表明,PRMT1能促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力,并影响EMT标志物蛋白质水平。该研究为进一步研究体内PRMT1的作用提供基础。 魏虹 张尤历 王珏 周朦 何俊波 周海浪 王大为 周改 冯雯 龚爱华 徐岷关键词:胰腺癌 增殖 迁移 乳酸脱氢酶A通过AMPK信号通路抑制人脑胶质瘤细胞线粒体自噬 被引量:1 2020年 该研究旨在探讨乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)对人脑胶质瘤细胞线粒体自噬的影响。用质粒sh-EGFP或sh-LDHA转染人脑胶质瘤细胞株U87MG,qRT-PCR和Western blot检测干扰效率,荧光染色技术检测线粒体ROS水平及线粒体膜电位,Western blot检测线粒体自噬相关蛋白及AMPK信号通路相关蛋白表达。结果表明,与sh-EGFP组相比较,sh-LDHA组人脑胶质瘤细胞U87MG中LDHA的mRNA及蛋白质水平均显著降低,线粒体ROS的产生增加,线粒体膜电位明显降低,线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin及BNIP3、BNIP3L的表达增高,AMPK的磷酸化水平明显升高,而mTOR的磷酸化水平降低。研究结果表明,LDHA能够通过抑制AMPK信号通路,降低线粒体ROS水平,提高线粒体膜电位,抑制线粒体自噬。 刘菲 黄雪阳 杨梦婷 张俊尧 房文静 龚爱华关键词:脑胶质瘤 ADAM17调控Hippo信号转导通路对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响 2016年 为探讨去整合素-金属蛋白酶17(disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)对人胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其调控机制,该研究用ADAM17 sh RNA质粒转染ADAM17高表达的胶质瘤细胞U87MG、U251MG,用过表达ADAM17载体转染ADAM17低表达细胞SW1783,q-PCR和Western blot检测ADAM17表达水平的变化,同时检测ADAM17和Hippo信号通路中相关蛋白质表达水平,CCK-8法分析细胞增殖能力并绘制生长曲线,划痕实验检测细胞迁移率。结果表明,下调ADAM17后,U87MG、U251MG细胞增殖和迁移能力减弱,而Hippo信号通路中MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平升高;上调ADAM17后,SW1783细胞增殖和迁移能力增强,而MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平降低。结果说明,ADAM17在脑胶质瘤细胞的增殖和迁移中发挥了重要作用,这可能是通过抑制Hippo信号通路来实现的,MST2被抑制,p-MOB1水平降低,从而YAP的磷酸化水平也降低,促进了胶质瘤细胞的增殖和迁移。 张春利 韩秀 熊二梦 彭琬昕 杜凤仪 周海浪 龚爱华关键词:ADAM17 胶质瘤 细胞增殖 细胞迁移 LDHB调控PDK1/Akt/GSK3β信号通路促进脑胶质瘤细胞生长的研究 被引量:3 2018年 该研究旨在探讨乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)基因对胶质瘤细胞生长的影响。用sh-LDHB或sh-EGFP质粒转染胶质瘤细胞,q RT-PCR和Western blot分别检测m RNA和蛋白质水平,CCK-8法和克隆形成实验分析细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果表明,转染sh-LDHB质粒后,脑胶质瘤细胞中LDHB的m RNA和蛋白质水平显著降低。敲低LDHB基因后,脑胶质瘤细胞的增殖能力明显降低,出现细胞凋亡峰(sub-G1),细胞增殖相关基因c-Myc和Cylin D1表达水平降低,同时,PDK1、Akt和GSK3β的磷酸化水平降低。研究结果表明,LDHB基因可以通过激活PDK1/Akt/GSK3β信号通路促进脑胶质瘤细胞的生长。 韩秀 陈曦 唐宇 程洁 刘菲 许婧 彭琬昕 杜凤移 龚爱华关键词:脑胶质瘤 STAT3抑制剂Stattic对肝癌细胞Bel-7402生长、迁移、侵袭和放射敏感性的影响 被引量:5 2015年 目的 观察信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)抑制剂Stattic(Y705)对人肝癌细胞系Bel-7402的生长、迁移、侵袭和放射敏感性的影响.方法 将人肝癌细胞系Bel-7402分为4组,空白对照组、Stattic组、单纯照射组和Stattic联合照射组(联合组).CCK8检测细胞的生长和增殖;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞的迁移能力和侵袭能力;克隆形成实验观察Stattic对Bel-7402细胞放射敏感性的影响;Western blot检测各组STAT3、p-STAT3、Bax,Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平.结果 Stattic明显抑制人肝癌Bel-7402细胞的生长,并表现出剂量-效应关系,Stattic作用于细胞48 h后的IC50为2.5 μmol/L.1.0 μmol/L的Stattic与8 Gy射线照射联用,两者在细胞增殖抑制率上,表现出协同作用,抑制率下降了(15.00&#177;1.87)%(F=63.30,P<0.05).划痕愈合实验显示联合组细胞的迁移能力明显降低,Transwell侵袭实验显示联合组滤膜细胞数明显减少.克隆形成实验显示,联合组与单纯照射组相比,克隆形成能力下降,SF2、D0、Dq均下降,(=4.20、6.92、9.32,P<0.05).Stattic在0.5 μmol/L时放射增敏比(SERSF2)为1.22.Western blot结果显示与单纯照射组相比,联合组的p-STAT3、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(=5.32、6.02、13.26,P<0.05).Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(t=-7.82、-14.09,P<0.05).Bcl-2蛋白的表达下降(t=18.43,P <0.05).结论 Stattic通过抑制肝癌细胞Bel-7402的p-STAT3激活,一方面诱导凋亡增加肿瘤细胞的放射敏感性;另一方面降低了金属基质蛋白酶的上升,从而降低了肿瘤细胞迁移和侵袭能力. 朱丽华 徐刚 龚爱华 王燕 薛辉 张丽 吴朝阳关键词:肝癌细胞 细胞侵袭 细胞凋亡