广东省自然科学基金(37415)
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 相关作者：李富荣周汉新邓春艳王云帅费筠更多>>
- 相关机构：深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院华中科技大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家重大基础研究前期研究专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 损伤胰腺组织提取液诱导大鼠BMSCs分化为胰岛素分泌细胞的研究
- 2014年
- 目的探讨大鼠损伤胰腺组织提取液对诱导大鼠BMSCs分化为胰岛素分泌细胞(in sulin producing c ells,IPCs)的效果和机制。方法取6周龄SD大鼠80只,将其中40只大鼠胰腺切除60%,48 h后取残存胰腺组织制备损伤胰腺组织提取液;余40只大鼠用于制备正常胰腺组织提取液。取4周龄SD大鼠的胫骨及股骨分离培养BMSCs,取第3代细胞分为实验组、正常对照组和空白对照组,分别加入损伤胰腺组织提取液、正常胰腺组织提取液和普通细胞培养液诱导培养。培养14 d过程中,观测细胞形态学改变以及胰腺发育相关基因和蛋白的表达;14 d时,流式细胞仪检测分化细胞C肽表达阳性率,葡萄糖刺激实验评价分化细胞释放胰岛素的水平。结果损伤胰腺组织提取液可诱导大鼠BMSCs分化为IPCs,在分化过程中表达与胰腺发育相关的基因:胰岛素促进因子1(pancreatic duodenal homeobox 1,PDX-1)、胰岛因子1、葡萄糖转运蛋白2、前蛋白转化酶2、神经元素3、Nkx6.1、生长抑素;细胞免疫荧光染色示其表达成熟胰腺β细胞标志性蛋白PDX-1、胰岛素、C肽、Nkx6.1。而正常对照组和空白对照组未能检测到相关基因和蛋白的表达。实验组C肽表达阳性率为13.8%±1.8%,显著高于正常对照组和空白对照组的1.6%±0.4%(P<0.05)。实验组在高、低糖刺激下胰岛素释放水平明显高于正常对照组和空白对照组(P<0.05),但仅为天然胰岛的1/40和1/47(P<0.05)。结论胰腺损伤后,损伤胰腺组织将分泌与胰腺修复和发育分化相关的转录蛋白,这些蛋白可诱导大鼠BMSCs向IPCs分化。
- 费筠谢洪彬王云帅齐晖邓春艳任莉莉李富荣
- 关键词：BMSCS胰岛素分泌细胞诱导分化
- 胰腺干细胞转分化为胰岛样细胞与天然胰岛细胞的基因差异性被引量：1
- 2008年
- 背景:目前胰腺干细胞在体外诱导转分化效率和分化成熟度较低,哪些基因在转分化中起关键性调控作用尚不清楚。目的:通过基因表达谱芯片分析转分化的胰岛样细胞与天然胰岛细胞在成熟度上的基因差异,筛选对转分化起关键性调节作用的基因。设计、时间及地点:基因水平的对照实验,于2004-07/2006-04在暨南大学第二临床医学院(深圳市人民医院)临床医学研究中心实验室完成。材料:SD大鼠胰腺分离的胰腺干细胞转分化的胰岛样细胞团,SD大鼠分离的天然胰岛。方法:分离和消化SD大鼠胰腺,用差异性贴壁、低血清培养等方法纯化出大鼠胰腺导管上皮细胞,利用免疫组化方法鉴定CK-19和PDX-1。通过含有exendin-4、角质细胞生长因子、尼克酰胺等细胞因子和葡萄糖的培养基,使之转分化为胰岛样细胞团,应用双硫腙染色和胰岛素免疫荧光染色鉴定。提取转分化的胰岛样细胞和天然胰岛细胞RNA,利用大鼠22000位点寡核苷酸芯片进行杂交,筛选差异性表达的基因,并进一步采用反转录-聚合酶链反应验证13个相关基因的表达。主要观察指标:转分化的胰岛样细胞团和天然胰岛鉴定,差异性基因筛选和鉴定。结果:筛选出差异表达基因1072个,其中表达上调的基因397个,上调10倍以上的基因35个;表达下调的基因有675个,其中下调20倍以上的基因37个。上调10倍以上的差异性基因中与细胞组织和生物发生相关基因最多,下调20倍以下的基因中与发育相关基因最多。对选定的13个与胰岛细胞发育密切相关的基因PDX-1,PDX-4,PDX-6,Nkx2.2,Nkx6.1,Nkx6.2,Ptfla,Isll,Ngn3,Myt1,Ptf1a,capn5,Ppy,通过反转录-聚合酶链反应进一步验证与芯片检测结果一致。结论:转分化的胰岛样细胞与天然胰岛细胞基因表达差异显著,参与胰岛发育的关键基因表达明显下调。
- 李富荣
- 关键词：干细胞胰腺胰岛样细胞基因表达
- 同种异体胰岛细胞和干细胞来源胰岛移植的现况与未来被引量：2
- 2006年
- 杨雪菲李富荣周汉新
- 关键词：胰岛移植干细胞来源同种异体胰岛细胞细胞增殖分化干细胞研究
- 胰岛干细胞转分化胰岛样细胞与天然胰岛功能的比较被引量：6
- 2008年
- 目的：目前在胰腺干细胞体外转分化为胰岛样细胞的转化效率，转分化胰岛样细胞的成熟度，能否代替天然胰岛的功能等问题上存在争议。实验将分离纯化、扩增的大鼠胰腺导管上皮细胞，并诱导分化为胰岛样细胞团，与天然胰岛功能进行比较。方法：实验于200407／2005-04在暨南大学第二临床医学院暨深圳市人民医院临床医学研究中心实验室完成。实验选用SD大鼠10只．采用差异性贴壁、低血清培养等方法纯化大鼠胰腺导管上皮细胞，以免疫组织化学方法鉴定后，在含exendin-4、角质细胞生长因子、尼克酰胺等细胞因子和葡萄糖的培养基中，将其转分化为胰岛样细胞团，以DTZ染色和胰岛素免疫荧光染色鉴定。分离纯化SD大鼠天然胰岛，对胰岛样细胞团与天然胰岛进行葡萄糖刺激试验，检测培养液上清液中胰岛素和C肽的水平。结果：①免疫组织化学染色显示从大鼠胰腺导管上皮细胞分离纯化的细胞呈CK-19染色阳性，PDX-1染包阴性，表明为胰腺干细胞。诱导4周后，细胞逐渐汇聚成胰岛样细胞团．免疫荧光染色为阳性，证明有胰岛素分泌。②葡萄糖刺激实验显示，在低糖和高糖刺激下，胰岛样细胞团胰岛素的分泌量约为天然胰岛的1／30和1／35，C肽分泌量为天然胰岛的1／32和1／26．结论：目前胰腺干细胞体外转分化为胰岛样细胞的成熟度与天然胰岛仍然存在较大差别，其在功能仅为天然胰岛的1／30—1／35。
- 李富荣龙爱梅齐晖李路任莉莉
- 关键词：胰腺干细胞诱导分化胰岛样细胞
- 大鼠胰腺干细胞转分化成胰岛细胞的研究
- 2007年
- 目的 本研究将大鼠胰腺干细胞诱导分化成胰岛细胞,为胰岛移植的临床应用提供可替代资源。方法 大鼠胰腺干细胞经体外培养,免疫组化鉴定CK-19,无血清培养基培养,使其转分化成胰岛,双硫棕染色鉴定。对诱导后胰岛细胞行葡萄糖刺激试验,用RIA法测其胰岛素、C肽的分泌功能并与天然胰岛相比较。结果 胰腺干细胞在体外大量增生,免疫组化显示CK-19阳性,诱导4周后得到胰岛样细胞团,双硫棕染色阳性。检测上清,诱导的胰岛在高糖刺激下胰岛素的分泌量为低糖的5倍;在葡萄糖低浓度（3.8mM）和高浓度（16.5mM）时,诱导的胰岛胰岛素分泌量分别约为天然胰岛的1/28和1/35,C肽分泌量分别为天然胰岛的1/29和1/22。结论 大鼠胰腺干细胞在体外可有效扩增,可转分化为胰岛团,该胰岛团随葡萄糖浓度的高低调节胰岛素。
- 耿岚齐晖李富荣罗永胜姜岭梅
- 关键词：胰腺干细胞转分化胰岛样细胞团
- 乌司他丁在大鼠胰岛分离中的抗凋亡作用被引量：4
- 2007年
- 目的探讨乌司他丁在大鼠胰岛分离过程中抑制胰岛细胞凋亡的作用。方法将20只SD大鼠平均分为两组,处理组在胰岛分离全过程中加用胰蛋白酶抑制剂乌司他丁进行干预,对照组则不加乌司他丁处理,采用Ficoll非连续密度离心纯化后对两组胰岛细胞的凋亡、胰岛产量及活力进行比较。结果加用乌司他丁处理组的胰岛细胞凋亡率显著低于对照组(P<0.01),处理组胰岛产量和胰岛素释放水平均显著高于对照组(P<0.01)。结论胰岛分离过程中加用胰蛋白酶抑制剂对胰岛具有抑制凋亡、提高胰岛产量及保护胰岛活力的作用。
- 邱立李富荣杨雪菲周汉新
- 关键词：胰岛分离胰蛋白酶抑制剂乌司他丁流式细胞仪凋亡
- 碱性成纤维细胞生长因子对大鼠胰腺干细胞增殖的影响
- 2006年
- 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠胰腺干细胞增殖的影响。方法大鼠胰腺干细胞经体外纯化、扩增,观察其生长特性,免疫组化法检测CK-19和PDX-1的表达。研究不同浓度的bFGF对大鼠胰腺干细胞生长曲线的影响。结果原代培养的细胞经差速贴壁后,得到纯化的胰腺干细胞。免疫组化显示大鼠胰腺干细胞呈CK-19阳性和PDX-1阴性。对照组(无bFGF)、bFGF浓度分别为5,10,20 ng/ml各组的细胞数分别是3.29×105/ml,3.47×105/ml,3.83×105/ml和3.83×105/ml。加bFGF 3组的细胞数与对照组比较均有显著性差异(均P<0.01),10,20 ng/ml bFGF组细胞数与5 ng/ml bFGF组细胞数比较差异有显著性(P<0.01);10 ng/ml和20 ng/ml bFGF组差异无显著性(P>0.05)。结论5,10,20 ng/ml浓度的bFGF可明显促进SD大鼠胰腺干细胞增殖。
- 耿岚齐晖周钧陈竞芬徐丹李富荣任莉莉
- 关键词：胰腺干细胞碱性成纤维细胞生长因子
