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原位细胞凋亡TUNEL法的改进及其应用被引量：25: 2004年; 目的 :寻找一种能快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料的原位细胞凋亡的 TUNEL法。方法 :在原已建立的 TUNEL技术基础上作了如下改进 :1石蜡切片用微波修复技术替代蛋白酶 K的消化作用 ;冰冻切片与细胞爬片或涂片用含 0 .1 % Triton X- 1 0 0和 0 .1 %枸橼酸三钠混合液作穿透处理。 2在滴加反应混合物前 ,切片用 0 .1 %焦碳酸二乙酯 ( DEPC)浸泡 ,抑制内源性核酸内切酶活性。 3在 POD转换剂前 ,切片用 3% H2 O2 -甲醇液阻断内源性过氧化物酶活性 ,并用正常山羊血清封闭非特异结合位点。4苏木素套染细胞核。结果 :改进后的 TUNEL法能特异地显示凋亡细胞为棕黄色 ,其他细胞核为蓝色 ,且对比明显 ,背景浅 ,组织结构完整清晰 ,便于显微照相等特点。结论 :改进后的 TUNEL法是一种快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料细胞凋亡的有效方法。; 袁永辉吴人亮王曦陈多恩; 关键词：细胞凋亡 TUNEL法原位缺口末端标记

β-catenin/Tcf Signaling in Squamous Differentiation of Porcine Airway Epithelial Cells: 2008年; For a preliminary study of the role of β-catenin/Tcf signaling in squamous differentiation of airway （tracheobronchial） epithelial cells, a stable mutant of β-catenin was transfected into primarily cultured porcine airway epithelial cells. Western blotting revealed that exogenous protein was observed in large quantity in cytoplasm and nucleus, When co-transfected with Tcf luciferase reporter plasmids, β-catenin mutant increased the reporter＇s transcriptional activities. However, mRNA expression of a squamous differentiation marker, small proline-rich protein （SPRP）, was not elevated, as shown by reverse transcription-polymerase chain reaction. These findings suggest that β-catenin/Tcf signaling may not be directly involved in the squamous differentiation of porcine airway epithelial cells.; 陈文书吴人亮王曦; 关键词：Β-CATENIN

猪气道上皮细胞的快速分离培养被引量：6: 2005年; 陈文书郝天玲王曦田丹吴人亮; 关键词：气道上皮细胞绿色荧光蛋白生物学研究支气管

糖原合成酶激酶3在猪气道上皮细胞鳞状分化中作用的初步探讨(英文)被引量：5: 2005年; 为探讨糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase 3,GSK3)在气道(气管和支气管)上皮细胞鳞状分化中的作用,培养原代猪气道上皮细胞,用GSK3的高度选择性抑制剂氯化锂处理,观察细胞形态变化,用Western blot检测β-连环素、磷酸化GSK3和鳞状分化标记物外皮蛋白的表达、RT-PCR检测鳞状分化标记物小脯氨酸丰富蛋白mRNA的表达、荧光素酶报告基因分析β-连环素/Tcf信号的激活状态。结果显示,锂能诱导猪气道上皮细胞出现鳞状形态、增加小脯氨酸丰富蛋白mRNA和外皮蛋白的表达、促进GSK3的抑制性丝氨酸磷酸化和β-连环素的细胞核内转位;锂能激活β-连环素/Tcf信号,但该作用出现于鳞状分化标记物增加之后。上述结果提示,GSK3可能参与猪气道上皮细胞的鳞状分化。; 陈文书吴人亮田丹王曦; 关键词：糖原合成酶激酶3 Β-连环素气道上皮细胞

β-连环素在维生素A缺乏大鼠气道上皮鳞状化生中的作用: 2006年; 目的探讨β-连环素(-βcatenin,-βcat)在维生素A缺乏所致气道上皮鳞状化生过程中的作用。方法采用苏木精-伊红染色,光镜观察研究SD大鼠维生素A缺乏9周组(VAD 9w组)、13周组(VAD 13w组)气道上皮的形态学变化;应用原位杂交技术检测大鼠气道上皮-βcat mRNA的表达;应用免疫组化技术检测-βcat、原癌基因c-jun、PCNA和CK13蛋白的表达。结果①VAD 9w组和VAD 13w组大鼠气道上皮分别出现增生和鳞状化生。②VAD 9w组和VAD 13w组-βcat蛋白在胞质内的表达均增加。-βcat mRNA的表达在各个实验组和对照组间差异没有显著性意义(P>0.05)。③c-jun、PCNA在VAD 9w组和VAD 13 w组的表达均较对照组高(P<0.01);CK13在对照组和VAD 9w组呈阴性表达,而在VAD 13w组气道上皮基底上层细胞呈阳性表达。结论-βcat在维生素A缺乏所致气道上皮鳞状化生过程中发挥重要作用。-βcat蛋白表达变化不是其mRNA水平改变所致。; 王智园李娜萍王曦吴人亮付世纬王伟; 关键词：鳞状化生 Β-连环素气道上皮

β-连环素及其相关蛋白在致癌剂引起的大鼠气道上皮鳞状化生中的表达被引量：1: 2005年; 目的研究β-连环素、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)及C-jun蛋白在致癌剂引起的大鼠气道上皮鳞状化生中的表达,初步探讨鳞状化生的发生机制。方法Wistar大鼠46只,采用选择性左肺叶下部支气管灌注致癌剂3-甲基胆蒽(MCA)碘油法诱发气道上皮鳞状化生,以10只正常大鼠为对照。用免疫组织化学SP法检测β-连环素、GSK-3β及C-jun蛋白的表达,并用原位杂交法检测β-连环素mRNA的表达。结果①实验组β-连环素膜表达较正常对照组降低(P<0.01),出现胞质表达,未见胞核表达。β-连环素mRNA的表达水平无明显变化(P>0.05)。②GSK-3β表达实验组低于对照组(P<0.05)。③C-jun阳性表达率实验组为50%,而对照组未见阳性表达。结论GSK-3β表达下调可引起β-连环素的异位表达,继而活化下游靶基因C-jun,使C-jun蛋白表达增高,β-连环素可能通过Wnt信号通路参与MCA引起的大鼠气道上皮鳞状化生。; 付世纬王智园王伟郝春荣李娜萍吴人亮王曦; 关键词：Β连环素糖原合成酶激酶3Β 鳞状化生气道上皮

GSK3在人、鼠、猪的肺组织及培养的猪支气管上皮细胞中的表达被引量：5: 2005年; 目的探讨GSK3在动物肺组织及培养的猪支气管上皮细胞中的表达。方法用免疫组化,免疫细胞荧光法检测GSK3在人、大鼠、小鼠和猪的肺组织及培养的猪支气管上皮细胞中的表达。结果GSK3α和β广泛表达于人、鼠和猪的肺组织中,定位于胞浆。它们在几种动物肺组织中的表达分布大致相似,主要见于各级支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、粘膜平滑肌细胞和粘膜下腺体。但GSK3α在软骨细胞中表达明显强于GSK3β;几种哺乳动物肺组织中均未检测到GSK3的磷酸化。免疫荧光检测培养的猪支气管上皮细胞中有丰富的GSK3α、β的表达,磷酸化的GSK3信号弱。结论GSK3α、β丰富表达于不同种属哺乳动物肺组织的支气管上皮、腺体以及肺泡上皮,提示其可能在肺组织的生理功能和病理发生机制中起着重要作用。; 田丹王曦陈文书吴人亮; 关键词：GSK3 肺组织

维甲酸对培养的猪支气管上皮细胞β-连环素/Tcf信号途径的影响被引量：4: 2004年; 李媛吴人亮王曦陈文书; 关键词：维甲酸支气管上皮细胞 Β-连环素 RA

β-连环素研究新进展被引量：4: 2003年; β -cat作为一种重要的细胞间黏附分子和信号转导分子 ,并通过与多种蛋白的结合参与细胞和组织的发育分化、损伤修复、肿瘤的发生发展及其它生物学过程。本文对近年来在 β -cat的晶体结构特点、β -cat的降解与其丝 /苏氨酸磷酸化的关系、及其在细胞内转运与APC基因的调控机制的联系、其出入细胞核及核内活化转录的分子机制以及 β -cat研究的应用前景等方面的进展作一综述。; 李媛吴人亮; 关键词：Β-连环素细胞黏附分子信号转导分子晶体结构磷酸化

β-连环素在维生素A缺乏及吸烟大鼠气道上皮鳞状化生中的作用: 2006年; 目的研究大鼠气道上皮鳞状化生时β-连环素(-βcatenin,-βcat)及其相关基因表达的变化,探讨-βcat与气道上皮鳞化及癌变的关系。方法采取缺乏VitA饲料饲养(12周)联合被动吸烟(4周)的方法建立支气管上皮鳞状化生模型,应用免疫组织化学(SABC法)和原位杂交技术研究-βcat、c-myc、增殖细胞核抗原(PCNA)以及-βcat mR-NA在气道上皮的表达。结果实验组大鼠支气管上皮细胞层次明显增多,其中4只大鼠支气管上皮出现明显的复层鳞状上皮化生。实验组支气管上皮-βcat在胞膜的表达减少(P<0.01),其中有6例在细胞质表达。实验组与对照组胞质中β-cat mRNA表达无明显差异(P>0.05)。实验组支气管上皮细胞核c-myc表达增加(P<0.01),PCNA阳性率明显增加(P<0.01)。结论-βcat、c-myc的表达异常参与了VitA缺乏与吸烟所致的大鼠支气管上皮鳞状化生的形成。; 王伟李娜萍王曦吴人亮王智园; 关键词：Β-连环素鳞状化生气道上皮维生素A缺乏

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