国家教育部博士点基金(93-186)
- 作品数：13 被引量：15H指数：2
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- 3种恶性疟原虫红内期抗原基因的测序和序列分析
- 2002年
- 目的 测定我国恶性疟原虫海南株 (FCC1/ HN)谷氨酸富集蛋白 (GARP)、丝氨酸重复抗原 (SERA)和裂殖子表面蛋白 1(MSA1)基因序列 ,并进行序列分析。 方法 采用 PCR技术从恶性疟原虫 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 GARP、SERA和 MSA1基因片段 ,分别插入到测序载体上进行测序。应用 DNAstar软件辅助分析 3种抗原基因的结构及 3种抗原在不同恶性疟原虫株间的分化情况。 结果 恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GARP基因全长 2 2 6 3bp,编码6 82个氨基酸残基 ,谷氨酸占 2 3.6 1% ,包含 5个典型的氨基酸重复序列 ;SERA基因全长 344 8bp,编码 995个氨基酸残基 ,丝氨酸含量为 10 .6 5 % ,包含 1个连续 32个丝氨酸 (S)残基的序列 ;MSA1基因全长 5 0 85 bp,编码 16 94个氨基酸残基 ,MSA1的氨基酸序列符合 MAD2 0型特征。恶性疟原虫 FCC1/ HN株与 3D7、FC2 7株 GARP的序列差异主要集中于 C-末端 ;FCC1/ HN株与 FCR3、3D7、FCBR、Hondulas- 1株 SERA的序列差异主要集中于 N-端。FCC1/ HN株与MAD2 0、3D7、HN1、HN2、FC2 7、RO- 71、RO- 33、CAMP和 Palo- alto株 MSA1的同源性高 ,K1和 WEL L COME株 MSA1的同源性高 ,各分离株 MSA1的序列差异主要处于第 2至 16分区。 结论 了解了恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GARP、SERA和 MSA1的?
- 单志新余新炳徐劲吴忠道马长玲李学荣
- 关键词：疟原虫恶性裂殖子表面蛋白1
- 恶性疟原虫肝期抗原1基因3′端的克隆及序列分析
- 2001年
- 【目的】克隆并测定恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)肝期抗原 1基因 (LSA 1) 3′端序列 ,比较FCC1/HN株与国外分离株LSA 13′端序列的差异。【方法】应用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增LSA 13′端序列 ,用T A克隆法将其克隆入pMD18 T载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR扩增鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用DNASTAR软件进行不同分离株LSA 13′端序列的同源性分析。【结果】PCR扩增得到特异的FCC1/HNLSA 13′端序列。酶切及PCR鉴定获得了正确的 pT LSA 1重组质粒。测序表明 ,所克隆的LSA 13′端大小为 795bp ,编码 2 6 4个氨基酸。序列分析表明 ,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外的NF5 4、T9/ 96、KEN、PNG及BRA株LSA 13′端编码的氨基酸序列只在 3个位点存在不同。【结论】克隆了恶性疟原虫FCC1/HNLSA 13′端片段。序列测定及同源性分析表明 ,FCC1/HNLSA 13′端序列与其它分离株有高度的同源性。
- 单志新余新炳李学荣马长玲徐劲陈守义
- 关键词：疟原虫基因扩增恶性疟原虫克隆
- 恶性疟原虫FCC1/HN株Pf332基因的克隆和测序
- 2001年
- 目的 构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株红细胞膜相关巨大蛋白 (Pf3 3 2 )部分基因的真核表达载体 ;并测定Pf3 3 2基因序列 ,了解FCC1/HN株与 3D7、PaloAlto株Pf3 3 2基因序列的差异。 方法 根据已知Pf3 3 2基因序列设计合成一对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pf3 3 2基因片段 ;将Pf3 3 2部分基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ;阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增鉴定 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用分子生物学软件辅助分析Pf3 3 2序列及进行同源性比较。 结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf3 3 2基因片段 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确的 pcDNA3-Pf3 3 2重组质粒。测序表明 ,获得的FCC1/HN株Pf3 3 2基因片段大小为 12 60bp ,编码 4 2 0个氨基酸残基。恶性疟原虫FCC1/HN株与 3D7、PaloAlto株间Pf3 3 2基因片段编码的氨基酸残基中分别有 1个、15个位点不同。结论 从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中获取Pf3 3 2基因片段 ,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-Pf3 3 2 ;FCC1/HN与 3D7株间比FCC1/HN与PaloAlto株间的Pf3 3 2基因序列的同源性高。
- 单志新余新炳马长玲卞国武陈守义
- 关键词：恶性疟原虫克隆基因测序
- 恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 构建包含恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。方法 从FCC1/HN株基因组DNA中PCR扩增Pf332基因片段 ,P332 -RO、P332 -R1和P332 -R2 ;用PCR扩增法合成鼠IgG轻链隹号肽的编码序列。用定向克隆法分别构建分泌型重组质粒pcDNA3 -s -P332 -R0、pcDNA3 -s -P332 -R1、pcDNA3 -s -P332 -R2和非分泌型重组质粒pcDNA3 -s -P332 -R0、pcDNA3 -s -P332 -R1、pcDNA3 -s -P332 -R2。阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf332基因片段 ,P332 -R0、P332 -R1、P332 -R1,大小分别为 489、42 9和 393bp。用PCR扩增法合成 6 3bp的Balb/c小鼠IgG轻链信号肽的编码序列。酶切、PCR及测序鉴定表明获得了正确的含Pf332基因片段的分泌型、非分泌型重组质粒。结论 成功构建分别包含恶性疟原虫Pf332基因片段—P332 -R0、P332 -R1和P332 -R2的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。
- 单志新余新炳卞国武马长玲陈守义周永安
- 关键词：恶性疟原虫基因片段分泌型非分泌型真核表达重组质粒
- 恶性疟原虫海南株STARP基因真核表达重组质粒的构建及基因结构分析被引量：1
- 2001年
- 目的 构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株STARP基因真核表达重组质粒pcDNA3-STARP ;分析STARP基因结构 ,并了解FCC1/HN株与其它分离株STARP基因序列的差异。方法 根据STARP基因已知序列设计合成两对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增两个部分序列重叠的STARP基因片段 ;将两基因片段分别双酶切后定向克隆入真核表达载体 pcDNA3 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。酶切 ,PCR扩增鉴定筛选重组质粒阳性克隆 ;用双脱氧链末端终止法测序 ,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。结果 分别PCR扩增获得 10 78bp ,10 92bp的两个STARP基因片段 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确重组质粒 ;恶性疟原虫FCC1/HN株与T9/ 96株STARP基因核苷酸序列同源性为 92 .2 % ;推测编码氨基酸序列同源性为 90 .9% ;在STARP蛋白中部重复区推测有多个明显的抗原表位区段。结论 从FCC1/HN株恶性疟原虫基因组DNA中获取STARP基因 ,并成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-STARP ;FCC1/HN株与其它分离株STARP基因有高度的同源性。
- 单志新余新炳马长玲李学荣吴忠道方建民
- 关键词：恶性疟原虫重组质粒基因测序
- 恶性疟原虫MESA基因的克隆和测序
- 2004年
- 目的克隆、测定恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)成熟疟原虫感染红细胞表面抗原(MESA)基因序列,并进行序列分析。方法根据恶性疟原虫Palo-alto株MESA基因已知序列,设计合成四对引物,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增出4个部分序列重叠的MESA基因片段,分别克隆入pMD-18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定这4个基因片段的序列,拼接得到全长MESA基因序列。应用DNAstar、AnthProt软件辅助进行序列同源性比较和抗原表位区预测。结果PCR扩增得到特异的恶性疟原虫FCC1/HN株MESA基因片段,酶切及PCR鉴定获得了包含MESA基因片段的重组质粒。测序结果表明,FCC1/HN株MESA全基因编码区长4102bp,A+T含量为72.11%,G+C含量为27.89%,有1个内含子;编码1323个氨基酸残基,分子量为154470u。序列分析表明,FCC1/HN株与Palo-alto、D10株MESA蛋白在长度和序列组成上呈多态性,序列差异较大区域位于MESA蛋白的氨基酸重复区1、3、4、5和7。经多参数综合分析,有7个潜在的抗原表位区。结论测定、分析了恶性疟原虫FCC1/HN株MESA基因序列。FCC1/HN株MESA基因与其它分离株的MESA基因编码的氨基酸序列存在一定差异。
- 单志新余新炳马长玲徐劲吴忠道陈守义胡旭初
- 关键词：恶性疟原虫MESA克隆测序
- 恶性疟原虫海南株AMA-1、Pfs230基因的序列分析被引量：3
- 2002年
- 目的 测定恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株裂殖子顶端膜抗原 1(AMA - 1)基因和Pfs2 30基因序列 ,并分别进行序列分析。方法 根据AMA - 1基因已知序列合成一对引物 ,用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增AMA - 1基因 ,构建真核表达重组质粒 pcDNA3 -AMA - 1。根据Pfs2 30基因已知序列合成七对引物 ,分 7段从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs2 30基因 ,并分别将扩增片段插入pMD - 18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定克隆的AMA -1、Pfs2 30基因序列 ,应用DNAstar软件辅助进行序列分析和同源性比较。结果 PCR扩增得到恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1和Pfs2 30基因片段。恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1基因全长 186 9bp ,无内含子 ,编码 6 2 2个氨基酸残基 ,不存在氨基酸重复序列 ,相对分子量约 72 0 4 5kDa ;Pfs2 30基因全长 94 35bp ,无内含子 ,编码 314 4个氨基酸残基 ,分子量为36 4 36kDa。恶性疟原虫FCC1/HN株与FC2 7、7G8、CAMP、FCR3、Thai -Tn、3D7、FVO、KF1916、CMP1、HB3、K1和V1株AMA - 1的同源性在 94 9%以上 ,各株间有 5 3个位置相同的氨基酸残基替代位点 ,并且发生替代的氨基酸残基具二态性。FCC1/HN株分别比 3D7、7G8株Pfs2 30抗原多 9、10个氨基酸残基 ,三个分离株有 2 8个氨基酸替换?
- 单志新余新炳李学荣马长玲徐劲罗树红吴忠道
- 关键词：疟原虫恶性克隆
- 恶性疟原虫FCC1/HN株谷氨酸脱氢酶基因的克隆及序列分析
- 2001年
- 目的 克隆恶性疟原虫海南株 (FCC1/ HN)谷氨酸脱氢酶 (GDH)基因并测定其序列 ,比较 FCC1/ HN株与国外分离株 GDH基因序列的差异。 方法 根据 GDH基因已知序列设计合成一对引物 ,应用 PCR技术从 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 GDH基因 ,并将其克隆入 p MD18- T载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及 PCR鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用 DNAstar软件比较不同分离株 GDH基因序列的同源性。 结果 PCR扩增得到特异的 FCC1/ HN株 GDH基因序列。酶切及 PCR鉴定获得了正确的 p T- GDH重组质粒。测序表明 ,恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GDH基因全长 132 9bp,编码 44 2个氨基酸。序列分析表明 ,我国恶性疟原虫 FCC1/ HN株与国外的 FCQ2 7、K1株GDH基因编码的氨基酸序列有少量的差异。 结论 克隆了恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GDH基因 ;序列测定及同源性分析表明 ,FCC1/ HN株与其它分离株的
- 单志新余新炳马长玲卞国武李学荣吴忠道
- 关键词：恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶GDH基因编码
- 华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白的纯化、酶学活性及免疫学研究被引量：10
- 2005年
- 目的体外制备华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH),分析其酶学活性及免疫学特性。方法常规表达重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和纯化试剂盒纯化重组蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用凝血酶和纯化柱酶切、纯化的CsGAPDH免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。ELISA检测抗IgG抗体滴度,浓缩型S-P免疫组化3步法检测CsGAPDH抗原在免疫小鼠体内的分布和表达。蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其抗血清的特异性。建立酶反应体系测定重组蛋白CsGAPDH的酶催化活性。结果纯化蛋白样品呈单一条带。免疫动物获取CsGAPDH抗血清,在免疫过程中抗体滴度呈连续上升趋势。CsGAPDH抗原分布和表达于小鼠肌细胞膜部位。免疫小鼠血清具有抗CsGAPDH特异性抗体。重组蛋白CsGAPDH具有酶生理活性,其酶活力单位为2 872 U min-1.ml-1。结论制备的重组蛋白CsGAPD H具有较好的酶活性和免疫原性。
- 张咏莉吴德余新炳
- 关键词：3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白质印迹法免疫原性
- 恶性疟原虫HRP-Ⅲ基因的克隆及序列分析
- 2001年
- 目的 克隆并测定恶性疟原虫海南 (FCC1/ HN)株 HRP- 基因序列 ,比较 FCC1/ HN株与国外分离株 HRP- 基因序列的差异。方法 根据 HRP- 基因已知序列设计合成一对引物 ,应用 PCR技术从 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 HRP- 基因。通过定向克隆 ,构建真核表达重组质粒 pc DNA3- HRP- 。阳性克隆的重组质粒经酶切及 PCR鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用分子生物学软件进行不同分离株 HRP- 基因序列的同源性比较。结果 PCR扩增得到特异的 FCC1/ HN株 HRP- 基因序列。酶切及 PCR鉴定获得了正确的 pc DNA3- HRP- 重组质粒。测序表明 ,恶性疟原虫 FCC1/ HN株 HRP- 基因全长 80 2 bp,包含一个内含子 ,编码 2 2 4个氨基酸。序列分析表明 ,我国恶性疟原虫 FCC1/ HN株与国外的 Itg2、FC2 7及 IMTM2 2株 HRP- 基因序列有较高的同源性。 结论 成功克隆恶性疟原虫 FCC1/ HN株 HRP- 基因。序列测定及同源性分析表明 ,FCC1/ HN株与其它分离株的 HRP- 基因序列有高度的同源性。
- 单志新余新炳马长玲方建民李学荣卞国武吴忠道
- 关键词：恶性疟原虫聚合酶链式反应分子克隆
