国家自然科学基金(30200129)
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
- 相关作者：屈纪富徐海伟杨丽周光纪唐军更多>>
- 相关机构：第三军医大学第三军医大学西南医院广东医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 干细胞与糖尿病治疗被引量：1
- 2003年
- 干细胞诱导分化为胰岛 β细胞以重建胰岛为糖尿病的治疗开辟了新途径。胚胎干细胞和成体干细胞是较好的用于细胞替代治疗的细胞来源 ,但干细胞参与糖尿病治疗还存在取材困难 ,分离困难等问题。葡萄糖及成纤维细胞生长因子是胰岛 β细胞基因表达的重要影响因子。
- 屈纪富郝利孟萍艾智华程天民
- 关键词：胰岛Β细胞干细胞分化
- 无血清培养法诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞的实验条件优化选择被引量：9
- 2005年
- 目的:胚胎干细胞能够在体外被定向地诱导分化为胰岛素分泌细胞的影响因素多,诱导过程复杂,诱导时间长,所得细胞数量少、功能低。通过对培养条件进行优化选择,是否可增加胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞定向分化的可控性,以便在短时间内得到数量更多、功能更强、可用于糖尿病治疗的胰岛素分泌细胞。方法:实验于2004-03/2004-10在解放军第三军医大学基础部生理学教研室完成。①小鼠胚胎成纤维细胞饲养层细胞的制备:孕13d的胎鼠制备成纤维细胞,37℃培养。当成纤维细胞生长完全融合后,用丝裂酶素处理后备用。②胚胎干细胞的培养及扩增:胚胎干细胞接种于小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,培养于含白血病抑制因子和胎牛血清的Dulbecco改良的Eagle高糖培养基中,37℃培养四五天。③胚胎体向神经前体细胞分化的诱导:扩增培养四五天的胚胎干细胞用胰蛋白酶消化后,于不含白血病抑制因子的培养基中悬浮培养4d,形成胚胎体。收集胚胎体后接种于无血清的选择性培养基,贴壁培养四五天后,细胞分化为神经前体细胞。④神经前体细胞向胰岛素分泌细胞分化的诱导:神经前体细胞用胰岛素分泌细胞无血清选择性培养基培养4d,再用葡萄糖刺激,神经前体细胞分化为胰岛素分泌细胞。⑤不同分化阶段的细胞检测:用形态学观察、免疫组织化学染色、碱性磷酸酶染色、双硫腙染色等方法。结果:①胚胎干细胞经四五天的培养扩增后,可形成细胞致密、形态饱满、折光度高、边界限清楚的典型胚胎干细胞集落,集落呈碱性磷酸酶染色阳性,饲养层细胞不着色。②胚胎干细胞脱离饲养层后,在不含白血病抑制因子的培养基中悬浮培养四五天,可形成球形的胚胎体。胚胎体在无血清神经前体细胞选择性培养基中贴壁培养四五天后,存活细胞85%以上分化为巢蛋白阳性的神经前
- 周光纪屈纪富徐海伟杨丽唐军
- 关键词：干细胞细胞分化糖尿病小鼠
- 胰岛素分泌细胞的干细胞来源及其移植后命运被引量：1
- 2007年
- 目的:干细胞诱导分化成的胰岛素分泌细胞移植是治疗糖尿病的方法之一,但因其诱导方法尚未完善及植入体内后的存活分化命运不清等问题而未应用于临床。文章就胰岛素分泌细胞的干细胞来源及其植入体内的命运加以综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED1998-01/2007-03期间的相关文章,检索词为“insulin producing cell,cell transplantation,survival”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1996-01/2006-12期间的相关文章,检索词为“胰岛素分泌细胞,胚胎干细胞,成体干细胞”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与胰岛素分泌细胞的干细胞来源或其植入体内后的存活分化相关。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集到264篇相关文献,30篇文献符合纳入标准,排除的234篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的30篇文献中,分别涉及诱导为胰岛素分泌细胞的干细胞来源、胰岛素分泌细胞移植后的有效性、安全性、解决方法等内容。资料综合:糖尿病是由于胰岛素分泌不足及胰岛素抵抗造成糖代谢紊乱影响人类健康的主要疾病。不管是采用胰腺移植还是胰岛移植都因各种原因而限制了其在临床的应用,因此焦点放在了胰岛素分泌细胞上,包括其来源及移植后的命运。胰岛素分泌细胞来源于胚胎干细胞和成体干细胞,干细胞是一种具有自我更新,能够持续分裂而保持未分化状态,从而诱导分化为各种类型的细胞,因此有“种子细胞”之称。随着研究的深入,发现胰岛素分泌细胞的来源并不是问题,而问题的关键在于如何提高分化率及其移植后的命运,包括有效性、安全性以及解决方法。诱导产生的胰岛素分泌细胞表达活性低下、移植后其再生增殖能力差及容易被诱导凋亡等问�
- 郭亮唐军屈纪富徐海伟
- 关键词：胚胎干细胞成体干细胞胰岛素分泌细胞细胞移植
- 抑制消减杂交在干细胞研究及组织修复中的应用被引量：3
- 2003年
- 干细胞(stemcells)是指具有自我更新和多向分化潜能的细胞,它们在组织修复(细胞疗法和组织工程的种子细胞、基因治疗的载体)研究中具有无可比拟的优越性。但目前干细胞基本生物学特性及应用研究中仍有诸多问题尚未阐明,特别是基因和分子水平的机制仍远未阐明。机体组织和细胞基因表达的变化能灵敏、细致地反映生长、发育、分化的发生机制,分析细胞或组织间基因差异表达(differentialexpression)是阐明其活动机制的重要方法。抑制消减杂交(suppressionsubtractivehy-bridization,SSH)技术是一种新近发展的差异基因筛选技术,它是以抑制PCR(suppressionPCR)为基础,将标准化检测子cDNA单链步骤和消减杂交步骤合为一体的技术,具有假阳性率低、敏感性高、速度快、效率高等特点。SSH技术已被国内外很多研究者所采用,克隆了多种新基因。近来应用SSH技术对涉及干细胞分化调控机制进行了初步研究,这对深入研究干细胞生物学特性及应用奠定了基础。随着SSH技术的不断完善,它在包括干细胞及组织修复等方面的研究中将发挥重要作用。
- 屈纪富郝利程天民
- 关键词：干细胞抑制消减杂交SSH基因表达
- PDX-1基因工程化的小鼠胚胎干细胞向胰岛分泌细胞的诱导及其对糖尿病小鼠的治疗作用
- ＜正＞目的:将野生型胰腺十二指肠同源盒-1（pancreas duodenum homeobox-1,PDX-1）基因转染小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cell,Esc）,筛选出高表达外源性PDX-1基因...
- 徐海伟屈纪富周光纪范晓棠唐军
- 文献传递
- 小鼠pdx-1基因真核表达载体的构建及其在胚胎干细胞中的表达被引量：2
- 2007年
- 目的:克隆小鼠pdx-1基因,构建其真核表达载体,并在小鼠胚胎干细胞中表达,为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法:PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组,将pdx-1基因cDNA片段连接到pEGFP-N1载体的多克隆位点,形成重组载体pEGFP/pdx-1,转化大肠杆菌DH5α菌株,构建成pdx-1基因真核表达载体质粒。扩增DH5α后抽提质粒DNA,HindⅢ和BamHⅠ酶切,电泳,DNA测序鉴定。鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染小鼠胚胎干细胞MESPU13。结果:从小鼠胰腺cDNA扩增出876bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N1载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为pdx-1基因,插入方向正确。重组质粒经脂质体转染胚胎干细胞MESPU13,24h后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的基因的pdx-1表达。结论:小鼠pdx-1基因的克隆和真核表达载体构建获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 周光纪徐海伟杨丽唐军李达兵屈纪富
- 关键词：基因PDX-1胚胎干细胞真核表达载体
- 神经前体细胞不是胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的必经途径被引量：2
- 2007年
- 探讨胚胎干细胞向胰岛索分泌细胞分化的途径，对胰腺组织工程的临床运用有重要意义。将胚胎干细胞在有小鼠胚胎成纤维细胞饲养层和白血病抑制因子的条件下培养扩增后，再将扩增后的胚胎干细胞不经过神经前体细胞阶段直接诱导为胰岛素分泌细胞，并与传统的多阶段诱导（经过神经前体细胞阶段）进行比较。结果发现，胚胎干细胞脱离饲养层细胞后，经过9～10d的分化诱导，可以分化为具有胰岛p细胞特征的胰岛素分泌细胞。与传统的多阶段诱导方法相比，诱导过程简化，诱导时间缩短，所得到的胰岛素分泌细胞数量无明显差异。说明胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化存在多条途径。神经前体细胞阶段不是胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的必须途径。用传统的多阶段分化诱导法和直接诱导法都可以将胚胎干细胞诱导成胰岛素分泌细胞。
- 周光纪屈纪富徐海伟杨丽
- 关键词：胚胎干细胞分化胰岛素分泌细胞
- 胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的体外诱导被引量：4
- 2006年
- 目的探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化诱导的途径和方法,为阐明胰岛β-细胞的发育机制和糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法将传统的多步诱导法改良为两步诱导法,将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞,并与传统的多步法进行比较。结果经过两步诱导,胚胎干细胞被诱导成了胰岛素分泌细胞,越过了先将胚胎干细胞诱导为神经前体细胞,再进一步诱导为胰岛素分泌细胞的传统模式,使诱导时间缩短,诱导方法简化,所得胰岛素分泌细胞数量与传统方法所得相当。结论多阶段和两阶段诱导均可将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞。
- 周光纪屈纪富徐海伟阮怀珍杨丽唐军赵明亮李达兵
- 关键词：胚胎干细胞分化胰岛素分泌细胞
- 胚胎干细胞来源的巢蛋白阳性细胞向胰岛素分泌细胞分化的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的诱导,为糖尿病患者实施细胞移植治疗建立基础。方法将胚胎干细胞(ESC)在成纤维细胞(MEF)饲养层上扩增后脱离饲养层,让ESC自发分化成拟胚体(EB),再将EB诱导为巢蛋白(nestin)阳性的神经前体细胞(NPC),最后将NPC诱导成胰岛素分泌细胞(IPC)。结果ESC在MEF饲养层上扩增4d后,在悬浮培养状态下自发分化为EB。将EB在NPC选择性培养基中做贴壁培养后,ESC先分化为上皮样细胞,再分化为神经细胞样细胞。经过nestin免疫组化检测,在经过NPC培养基诱导4d的细胞,nestin阳性细胞占86.5%。nestin阳性细胞在IPC选择性培养基中诱导5～6d后,可分化成胰岛素分泌细胞。结论ESC来源的nestin阳性细胞既可以分化为NPC,也可以分化为IPC。
- 周光纪徐海伟屈纪富杨丽
- 关键词：胚胎干细胞神经前体细胞巢蛋白胰岛素分泌细胞
