国家自然科学基金(31060265)
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 相关作者：王健曾媛李婧龚胜李琴更多>>
- 相关机构：海南大学中国热带农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 三色堇花瓣总RNA3种提取方法的比较被引量：9
- 2013年
- 分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测。结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高。3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260 nm/D280 nm在1.83～2.03之间。以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验。
- 李琴王健赵钟鑫尚啸
- 关键词：三色堇改良CTAB法RNA提取
- 三色堇VwMYB8基因的克隆及其在月季中的瞬时表达分析被引量：2
- 2016年
- 三色堇花色艳丽,品种丰富,是重要的冬春季花卉。本研究采用黄底紫斑品种‘梦蝶’为研究材料,克隆花瓣中可能参与花青素累积起调控作用的MYB基因VwMYB8,结果显示:克隆得到的cDNA全长为1 078 bp,经ORF Finder分析发现其有长度为849 bp的开放阅读框,编码282个氨基酸;构建瞬时表达载体pXCS-VwMYB8,采用粒子轰击的方法作用于月季‘粉扇’花瓣细胞,经过48 h培养后观察转化材料细胞中色素的变化,转化的细胞颜色明显加深,表明基因VwMYB8可以提高月季花瓣细胞中色素的含量。
- 曾媛龚胜李婧孙海燕王健杨文汉李霆格赵安瑾梅晶晶
- 关键词：三色堇
- 三色堇花色素合成途径中部分结构基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2015年
- 【目的】对三色堇花色素合成的3个结构基因VwCHS、VzvCHI和VwF3H进行克隆以及生物信息学分析。【方法】利用RAcE／PcR技术克隆得到VwCHS、‰cHf和VzvF3H基因的全长序列，并通过在线分析软件对其生物信息学进行分析。【结果】获得VwCHS、VwCHI和VwF3H的cDNA全长分别是1481，975和1361bp；经多重序列比对发现这3个基因编码的氨基酸与其他植物相关氨基酸一致性较高，主要集中在62％～90％，并且在CHS氨基酸序列中有4个催化活性位点（Cys171、Phe222、His310、Asn343），在CHI氨基酸序列中有4个催化活性位点（Thr50、Tyr108、Asn115、Ser192），在VwF3H氨基酸序列中有5个催化活性位点（Asp218、His253、Arg215、Arg284、Ser286）；VwCHS、VwCHI、VwF3H的蛋白质分子量分别为9．91，5．37，4．1ku，等电点为5．02，5．16，5．44；二级结构预测发现，vwCHs和VwCHI二级结构主要是0t螺旋，分别占43．39％和41．89％，VwF3H的蛋白质二级结构主要是无规则卷曲，占42．30％；聚类分析发现VwCHS、VwCHI和VwF3H分别归属于各自的聚类簇。【结论1VwCHS、VwCHI和VwF3H是不存在信号肽的非跨膜蛋白。
- 龚胜孙海燕张珂曾媛李婧王健李新国
- 关键词：三色堇生物信息学
- 大花三色堇FPNI-PCR反应体系的优化被引量：2
- 2016年
- 融合引物与巢式聚合酶链式反应（fusion primer and nested integrated PCR,FPNI-PCR）是一种分离并扩增已知序列旁未知序列的有效方法。以大花三色堇（Viola×wittrockiana Gams.）为材料,为提高FPNI-PCR产物特异性,增加条带清晰度,降低非特异性条带的干扰,对FPNI-PCR反应体系中第1轮的模板DNA浓度进行对比,优化了第3轮反应中引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、缓冲液用量,筛选了第3轮特异性引物的退火温度,进一步完善了FPNIPCR反应体系。各因素优化比对试验表明：FPNI-PCR第1轮反应体系应以稀释后的DNA为模板,20μL体系中,用量在4.5-10 ng。第3轮最优反应体系为：20μL反应体系中,特异性引物浓度0.2μmol/L,引物SP2浓度0.75μmol/L,Taq DNA酶用量1.0 U,d NTP用量2μL,10×buffer（20 mmol/L,Mg2＋plus）用量2μL,模板1μL（第2轮反应稀释100倍后取1μL为模板）,dd H2O补足。第3轮反应中,退火温度为64℃或66℃时条带最为清晰。
- 李婧曾媛龚胜李霆格杨文汉王健
- 关键词：大花三色堇
- 三色堇DFR基因的克隆及表达分析被引量：3
- 2015年
- 从三色堇花瓣中克隆了1个花色素合成结构基因的全长c DNA,命名为Vw DFR。Vw DFR c DNA全长为1 340 bp,编码347个氨基酸组成的蛋白,与胡杨的DFR序列具有较高的序列一致性。Vw DFR蛋白含有典型的植物DFR蛋白的保守功能结构域,属于SDR超基因蛋白家族成员。Vw DFR基因在三色堇不同组织中的表达存在明显差异,在初花期的花瓣中表达量最高,且色斑区高于非色斑区。结果说明,Vw DFR可能与三色堇花色形成有关。此结果为深入研究三色堇花色形成奠定了基础。
- 孙海燕安泽伟李琴王健
- 关键词：三色堇DFR基因克隆
