重庆市科技攻关计划(9398)
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 相关作者：梁后杰边志衡潘凤胡绍毅李建军更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NF-κB信号通路介导结肠癌多细胞耐药的作用研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨NF-κB信号通路在结肠癌HT-29细胞多细胞耐药中的作用及可能机制。方法采用液体重叠培养系统和常规贴壁法对HT-29细胞进行三维(3D)和单层(2D)培养。采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察3D培养的HT-29细胞形态,并采用免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。电泳迁移率改变测定法(EMSA)测定3D和2D培养细胞中NF-κB的活性差异。将3D培养细胞分为两组:3D组(培养液中不加干扰因素)和3D+SN50组(培养液中加入50μg/ml SN50处理24h),采用EMSA测定两组NF-κB活性差异,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bcl-2和Bax)的表达并对蛋白条带的光密度值进行半定量分析,外生半径测定法测定3D培养细胞对氟尿嘧啶的敏感性。结果3D培养的HT-29细胞悬浮生长,细胞相互聚集增殖形成多细胞球,中心为坏死区,周围由多层异型性细胞组成,外围细胞PCNA阳性染色明显。与2D培养细胞相比,3D细胞中NF-κB活性条带颜色较深。EMSA显示3D+SN50组NF-κB活性较3D组低,TUNEL法显示3D组细胞凋亡率(8.71%±0.73%)较3D+SN50组(15.75%±1.02%)明显降低(P<0.01)。3D+SN50组和3D组中,Caspase-3活化片段光密度值分别为126.79±13.48和87.24±10.68(P<0.01),Bax蛋白为129.73±15.28和89.26±14.31(P<0.01),Bcl-2蛋白为97.27±12.63和131.24±14.53(P<0.01)。结论NF-κB活性升高是导致结肠癌HT-29细胞多细胞耐药的重要原因之一,其机制可能与凋亡相关蛋白的表达调控有关。
- 李建军潘凤黄海辉胡绍毅边志衡梁后杰
- 关键词：结肠肿瘤NF-ΚB多药耐药相关蛋白质类
- 大孔树脂柱层析分离青蒿不同提取物对结肠癌HT-29、Lovo细胞NF-κB活性的影响被引量：2
- 2008年
- 目的通过比较青蒿水煎液经大孔树脂柱层析后所得粗提物对结肠癌HT-29、Lovo细胞核因子-κB(NF-κB)活性的影响,寻找青蒿中对结肠癌细胞NF-κB活性有作用的洗脱相。方法青蒿水煎液浓缩后加样,AB-8大孔树脂吸附后行柱层析,分别用蒸馏水、30%、50%、75%和95%乙醇对其进行洗脱,收集回旋浓缩得到的不同洗脱相粗提物。MTT法检测经不同浓度(0、50、100、200、400、600μg/ml)的不同洗脱相处理24h后HT-29细胞的活力,以选择粗提物的工作浓度。将HT-29、Lovo细胞分别设为对照组(不加处理因素)和经MTT法检测后获得工作浓度的30%乙醇相组、50%乙醇相组、75%乙醇相组、95%乙醇相组、流出相组,孵育24h后收集细胞,提取细胞核蛋白,采用凝胶阻滞分析(EMSA)法对NF-κB活性进行测定。结果MTT法检测发现各相浓度为400、600μg/ml时,HT-29细胞活力均较其他浓度明显降低(P<0.01),因此本实验选择200μg/ml作为工作浓度用于后续实验。HT-29细胞和Lovo细胞经不同洗脱相的青蒿粗提物处理后,以30%乙醇相组的NF-κB活性降低最为明显(积分光密度值分别为29.81±1.62,30.1±1.09),与对照组(积分光密度值分别为55.31±1.07,66.73±1.49)比较有统计学差异(P<0.01),而50%乙醇相组、75%乙醇相组、95%乙醇相组和流出相组NF-κB活性与对照组比较无统计学差异。结论青蒿水煎液采用大孔树脂柱层析分离,30%乙醇洗脱相粗提物(200μg/ml)对结肠癌HT-29细胞、Lovo细胞NF-κB活性具有抑制作用。
- 潘凤杨黎陈玉英边志衡梁后杰
- 关键词：青蒿结肠肿瘤NF-ΚB
- 透明质酸酶增强5-FU对结肠癌抗癌作用的动物实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的:观察透明质酸酶(Hyaluronidase,Hyase)在氟尿嘧啶(5-FU)对裸小鼠结肠癌移植瘤生长影响中的作用,并探讨其作用的可能机制。方法:18只雄性裸小鼠左侧腹壁皮下移植三维培养人结肠癌HT-29细胞,随机分为6组,每组3只:Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组[Hyase200U/(kg.d)]、Ⅲ组[5-FU30mg/(kg.d)]、Ⅳ组[Hyase50U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)]、Ⅴ组[Hyase100U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)]和Ⅵ组[Hyase200U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)],Hyase于肿瘤细胞移植处第1、5天皮下注射,5-FU于第1～5天右侧腹腔注射。每周以游标卡尺测定瘤体最长径和最短径,计算肿瘤体积和抑瘤率,第6周杀鼠称瘤重,取瘤组织行HE染色,Westernblotting法检测瘤组织中E-钙黏素(E-cadherin)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和NF-κBp65蛋白的表达并对蛋白条带的光密度(OD)进行半定量分析。结果:裸小鼠均成功移植皮下肿瘤,与对照组(Ⅰ组)比较,单纯Hyase治疗组(Ⅱ组)肿瘤体积减小不明显(P>0.05),单纯5-FU治疗组(Ⅲ组)自第3周开始肿瘤体积明显减小(P<0.05),而不同剂量Hyase联合5-FU治疗组(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组)瘤体积减小更明显(P<0.05);与单纯5-FU治疗组(Ⅲ组)比较,第3周开始联合治疗组(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组)瘤体积明显减小(P<0.05);第6周Ⅱ～Ⅵ组抑瘤率分别为6.8%、17.5%、34.1%、46.3%和56.6%;Ⅲ～Ⅵ组瘤重均低于Ⅰ组(P<0.05或P<0.01);Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤组织内E-cadherin和ICAM-1蛋白条带OD值均较Ⅰ组有不同程度减低,而NF-κBp65蛋白条带OD值在各组间无明显变化(P>0.05)。结论:透明质酸酶可能通过抗细胞黏附在结肠癌化疗中具有增敏作用。
- 李建军黄海辉潘凤边志衡胡绍毅梁后杰
- 关键词：透明质酸酶氟尿嘧啶结肠癌
- 青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用被引量：5
- 2007年
- 目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,培养体系中预先加入不同浓度AS2h后,观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果:AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由100%降低至50%(P<0.05)。预先加入的AS能明显抑制热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论:AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。
- 张蓉李斌张乐之李军丁国富和生琦罗平周红
- 关键词：青蒿琥酯小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-6
- E-钙黏素和ICAM-1诱导结肠癌多细胞耐药的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨E-钙黏素(E-cadherin)和细胞间黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)诱导结肠癌HT-29细胞多细胞耐药的作用及可能的机制。方法:HT-29细胞的三维或单层培养分别采用liq-uid overlay技术或常规贴壁法;radial out-growth分析或MTT法测定药物敏感性;免疫组织化学和蛋白质印迹法检测E-cadherin、ICAM-1蛋白的表达;TUNEL检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bcl-2和Bax)的表达水平。结果:三维培养HT-29细胞与单层培养细胞相比,对5-FU的敏感性降低,IC50值分别为(18.74±0.97)和(1.38±0.09)μg/mL;E-cadherin、ICAM-1表达增强。以不同浓度透明质酸酶(Hyaluronidase,Hyase)抗黏附处理后,三维培养HT-29细胞对5-FU敏感性增加(IC50值明显降低),E-cadherin和ICAM-1表达减弱,凋亡细胞数目增多,Caspase-3活化片断和Bax表达增强,而Bcl-2表达减少,并呈现浓度依赖性的特点。结论:E-cadherin和ICAM-1可诱导结肠癌HT-29细胞产生多细胞耐药,其机制可能与凋亡相关蛋白的表达调控有关。
- 李建军潘凤胡绍毅黄海辉边志衡梁后杰
- 关键词：结肠肿瘤E-钙黏素细胞间黏附分子-1多细胞耐药
